电化学发光原理与仪器

1、Elecsys 原理及仪器,免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光仪器性能特点 电化学发光技术的优势 电化学发光检测项目,免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光仪器性能特点 电化学发光技术的优势 电化学发光检测项目,技术创新领先的免疫检测新技术ECL,放免,酶免 荧光免疫 化学发光,电化学发光,1960S,197080S,2000S,1，抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2，从手工操作向全自动分析仪的转变 3，从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变,1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫测

2、定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。,缺点 半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。,在一定时期内曾被采用，正在被逐步取代。,放射免疫测定法,1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。,酶免疫测定法,缺点 试剂制备困难。 操作步骤复杂，耗时长。 影响因素多，质量控制难以保证。 最后测定的是颜色的

3、光密度，其精密度和敏感性不如发光免疫技术。,各实验室操作不规范，质量难以保证。有学者认为ELISA技术已逐步走向退化，可能会逐步退出临床实验室。,化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初。由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA，而且试剂较稳定，并可进行全自动分析。,化学发光免疫测定法,采用标记催化酶（如辣根过氧化物酶）或化学发光分子（如鲁米诺）的方法，其化学反应一般不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中易发生裂变，导致反应结果不稳定。 检测时需对结合相与游离相进行分离，操作步骤多。 反应原理相对落后。,缺点,电化学发光免疫技术,电化学发光免疫测定法（

4、ECLIA）发展于 1996年，它在 发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是 电化学和免疫测定相结合的产物。,世界公认的 最先进 的临床免疫检测技术,免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光仪器性能特点 电化学发光技术的优势 电化学发光检测项目,Elecsys系列全自动免疫分析仪,1996年德国宝灵曼公司推出Elecsys 2010系统 世界上第一台 应用电化学发光技术的全自动免疫分析仪 1998年罗氏公司收购宝灵曼公司 2001年罗氏推出电化学发光免疫模块E 170 罗氏是全球唯一 应用电化学发光免疫技术制造仪器的厂

5、商 2006年罗氏推出电化学发光免疫模块e601 2007年罗氏推出电化学发光免疫模块e411,ECL 2010 disk,E170,ECL 2010 rack,e601,Elecsys系列全自动免疫分析仪,e411 disk,e411 rack,电化学发光反应的原理 三联吡啶钌和三丙胺在电极表面发生的电化学发光反应,电化学发光原理,底物：三联吡啶钌Ru(bpy)2+3 N羟基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA),在电极阳极表面，以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧化反应，2价的Ru(bpy)2+3 标记物被氧化成3价的Ru(bpy)3+3 的标记物，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+*

6、 ， TPA+* 很不稳定，自发地失去一个质子而形成自由基TPA* ，其为强还原剂，将一个电子给3价的Ru(bpy)3+3 ，使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧化产物。激发态的Ru(bpy)2+3衰减时发射一个波长620nm的光子，重新形成基态的Ru(bpy)2+3 。这一过程在电极表面周而复始进行，产生许多光子。使得光信号增强。,Sandwich Principle 双抗夹心法, large molecular weight antigens are measured directly proportional measurement, means: low signal = low concentration high signal = high concentration e.g. TSH, CA 15-3 II assays,双抗夹心法 妊娠过程中,PlGF对胎盘血管的形成有重要调节作用,PlGF的下降与妊 高征发病有关. 9、Elecsys sFLT1 可溶性血管内皮生长因子受体1,子痫前期患者胎盘组织中sFlt-1蛋白 过度表达,可引起循环中sFlt-1水平升高,从而参与子痫前期的病理生理过程.