GB 16550-1996 新城疫检疫技术规范

中华人民共和国国家标准

新城疫检疫技术规范

GB16550一1996

Technicalcodeofquarantinefornewcastledisease

主题内容与适用范围

本标准规定了新城疫群体检疫、个体检疫、实验室检验和检疫后处理的技术规范。

本标准适用于鸡和其他可感染新城疫的禽类。

引用标准

GB16548-1996畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程

3群体检疫

对养禽场、独立饲养的禽群及外售、外运的禽群施行检疫。

3.1查明疫病背景

通过询问兽医人员或检查疫病记录，核查被检禽场(群、室)在过去一年内是否出现过新城疫临诊病

例，是否有与新城疫病例接触史，周围2km范围内是否发生过新城疫。

3.2查清免疫状况

通过查验免疫证明或查询其他资料，核查被检禽群是否已按规定注射合格疫苗。如按规定免疫并正

处于规定的保护期内，禽只健康状况良好，被认为免疫合格。如免疫不符合规定要求，要以合格疫苗再次

接种，隔离饲养观察至群体抗体滴度达2'以上，全群健康，认为免疫合格;观察期内发现疑似新城疫病

禽，须按3.3条和3.4条要求进一步检查。

3.3群体临诊检查

首先作静态检查，让禽群处于静止状态，观察营养状况、精神状态、呼吸、粪便、鼻及口腔分泌物有否

异常。然后观察禽只运动状况，有否踱行、共济失调、痉挛等异常现象。检查中重点注意以下情况:

a精神沉郁或无任何症状而死亡;

b.体温升高、食欲减退、精神萎顿、产蛋减少或停止;

c.口腔和鼻腔分泌物增多，嗦囊胀满;

d.呼吸困难、喉部发出“咯咯”声(晚间较明显);

e.下痢，粪便成绿色;

f.偏头转颈，作转圈运动或共济失调。

若发现疑似病例，按3.4条要求进一步检查，同时对全群隔离饲养。

I4病理解剖检查

对临诊疑似病例，应全部或抽样解剖，依据下述病变作出初步判断:

a.口腔、咽喉部有粘液，咽部粘膜出血;

b.腺胃乳头肿胀，挤压后有豆腐渣样坏死物流出，乳头有散在的出血点;

生NL鱼重五星有条纹状或点状出血，有时见不规则溃疡，腺胃与肌胃交接处有出血斑、条;

国家技术监督局1996一10一03批准

1997一02一01实施

GB16550一1996

d.小肠前段有大面积散在出血点，或肠粘膜有纤维性坏死并形成假膜，假膜下出现红色粗糙溃

疡;

盲肠和直肠皱褶处有出血，盲肠扁桃体(淋巴滤泡)出血坏死;

气管粘膜充血、出血、气管内有粘液;

心冠脂肪、心耳外膜及心尖脂肪上有针尖状小出血点。

4个体检变

4.1在无群体检疫条件的场合，须进行个体检疫。个体检疫合格的禽只一般供食用，如继续饲养应隔离

三周，经观察无异常后，方准与其他禽只混养。

4.1.1查明是否来自疫区。

4.1.2查验免疫证明。

4.1.3临诊检查和病理解剖检查

检查内容参照3.3条和3.4条进行，发现疑似新城疫染疫禽只，立即作无害化处理。

5实验室检验

5门下列情况进行实验室检验

a.产地定期检疫;

b.监测免疫状态;

c.疑似病鸡的定性，或临诊及解剖检查初步诊断为新城疫，需进一步确诊;

d.检疫中发现重大疫情(如禽流感)，须作鉴别诊断;

e.行政主管部门、饲养单位、售购或争议双方要求进行实验室诊断。

5.2实验室检验方法

病毒分离鉴定试验，见附录A(补充件)。

血凝抑制试验，用于免疫监测，见附录B(补充件)。

a.阮

6.A一

检疫后的处理

经临床检查、解剖检查和实验室诊断等综合判定，确诊为新城疫的禽群或禽只，按GB16548处

6.2经初步诊断为新城疫可疑的禽群(禽只)，按下述方法之一处理:

a.除将可疑禽只按6.1条处理外，全群隔离饲养，并进行紧急免疫接种，如在接种后观察期内出

现可疑禽只，亦按6.1条处理。观察21d后，对临床健康，免疫滴度达到25以上的禽只，经体表消毒后按

健康禽只对待。

b.’经初步诊断为新城疫可疑的禽群(禽只)，在全群隔离饲养的同时，对可疑禽只采样作实验室诊

断，如确为新城疫者，全群即按6.1条处理。

6.3发生过新城疫的禽场在半年之内，其禽只不准出售、外运。

GB16550一1996

附录A

病毒分离鉴定试验

(补充件)

A1仪器设备

注射器:1mL;

注射针头:5-5合号;

血凝试验板:V型、96孔;

微量移液器:50pL;

恒温箱，

超净工作台或无菌室。

a.h仁d.已f.

A2试荆

无菌生理盐水;

青霉素;

链霉素;

标准阳性血清。

氏b.已已

A3样品采集及处理

A3.1活禽用气管拭子和泄殖腔拭子(或粪)。

A3.2死禽以脑为主;也可采心、肝、脾、肺、肾、气囊等组织。

A3.3样品用生理盐水研成1:5乳液;拭子浸入2^-3mL生理盐水中，反复吸挤压至无水滴出，弃之。

溶液中加入青排素(使终浓度为1000单位/mL),链霉素(使终浓度为1mg/mL)。泄殖腔拭子(或粪)样

品，青霉素、链霉素量提高5倍。然后调pH7.。一7.4,37℃作用1h，再1000r/min离心10min，取上清

0.1mL经尿囊腔接种9^-10日龄SPF鸡胚。

A4培养物的收集及检测

A4.1培养4--7d的尿囊液经无菌采集后一20℃保存。

A4.2尿囊液按附录B(补充件)作血凝试验，并与标准阳性血清作血凝抑制试验，确定有无新城疫病毒

繁殖。

A4.3MDT(最小病毒致死量引起鸡胚死亡的平均时间)的测定:将新鲜尿囊液用生理盐水连续10倍

稀释,10-6-10-。的每个稀释度接种5个9^10日龄SPF鸡胚，每胚0.1m1.,37C孵化。余下的病毒保

存于4C.8h后以同样方法接种第二批鸡胚，连续7d内观察鸡胚死亡时间并记录，测定出最小致死量，

即引起被接种鸡胚死亡的最大稀释倍数。计算MDT,

A4.4以MDT确定病毒的致病力强弱,40^-70h死亡为强毒,140h以上为弱毒。

GB16550一1996

附录B

鸡新城疫徽t红细胞凝集抑制试验

(补充件)

B1仪器设备

a.微量血凝板:v型,96孔;

b.微型振荡器;

c.塑料采血管;

d，移液器:50ML.

B2试剂

B2.1稀释液

pH7.0-7.2磷酸缓冲盐水

氯化钠(GB1266-77)170g

磷酸二氢钾(GB1274-77)13.6g

氢氧化钠(GB629-77)3.0g

蒸馏水1000m1

高压灭菌，4C保存，使用时作20倍稀释

B2.2浓缩抗原

B2.3。，5%红细胞悬液

采成年鸡血，用20倍量磷酸缓冲盐水洗涤3-4次，每次以2000r/min离心3^-4min，最后一次

5min，用磷酸缓冲盐水配成0.50o悬液。

B2.4标准阳性血清

B3被检血清

每群鸡随机采血20^-30份血样，分离血清。

采血法:先用三棱针刺破翅下静脉，随即用塑料管引流血液至6^-8cm长。将管一端烧融封口，待凝

固析出血清后以1000r/min离心5min,剪断塑料管，将血清倒入一块塑料板小孔中。若需较长时间保

存，可在离心后将凝血块一端剪去，滴融化石蜡封口，于。℃保存。

B4操作方法

B4.1微量血凝试验

B4.1.1于微量血凝板(Bl.1)的每孔中滴加稀释液((B2.1)50kL，共滴四排。

B4.1.2吸取1:5稀释抗原滴加于第一列孔，每孔50,}L，然后由左至右顺序倍比稀释至第11列孔，

再从第11列孔各吸取50pL弃之。最后一列不加抗原作对照。

B4.1.3于每孔中加人0.5%红细胞悬液(B2.3)50pL.

B4门.4置微型振荡器(Bl.2)上振荡1min，或手持血凝板绕圆圈混匀。

B4门，5放室温下((18-20'C)30-40min，根据血凝图象判定结果。

以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度。每次四排重复，以几何均值表示结果

B4.1.6计算出含4个血凝单位的抗原浓度。按式(BL)进行计算:

GB16550一1996

抗原应稀释倍数=

血凝滴度

4

................·..·.⋯⋯(BI)

B4.2微量血凝抑制试验

B4.2.1先取稀释液(132.1)50pL，加人微量血凝板(Bl.1)的第1孔，再取浓度为4个血凝单位的抗原

依次加入3^-12孔，每孔50风，第2孔加浓度为8个血凝单位的抗原50pL,

B4.2.2吸被检血清(133)50pL于第1孔(血清对照)中，挤压混匀后吸50pL于第2孔，依次倍比稀释

至第12孔，最后弃去50pLo

B4.2.3

置室温(18^200C)下作用20min,

滴加5011.0.5%红细胞悬液(B2.3)于各孔中，振荡混合后，室温下静置30-40min，判定结

每次测定应设已知滴度的标准阳性血清(132.4)对照。

2.425

结果判定

B4果B4BS

B5.1在对照出现正确结果的情况下，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制滴

度。

B5.2若有10%以上的鸡出现11(log,)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染

B5.3若监测鸡群的免疫水平，则血凝抑制滴度在40092)的鸡群保护率为50%左右