骨髓检查、组化、免疫分型、遗传学

1、二、骨髓细胞学检查的内容、方法及临床意义，p293、骨髓标本采集注意事项：形态学检查的抽吸量不应超过0.2毫升；同时，多项检查应优先抽取形态学检查标本；涂片厚度适宜，不小于4，同时制作匹配的血片；取得好成绩；如果干泵，此时应考虑骨髓活检；多点穿刺或压痛点穿刺或根据x光检查提示提高阳性率。判断骨髓取样成功的标准是，患者在吸吮骨髓液时有特殊的酸痛感；有骨髓颗粒和脂肪滴；显微镜下可见骨髓特异性细胞，如巨核细胞、成骨细胞、破骨细胞、浆细胞、组织嗜碱性细胞、成纤维细胞和大量红细胞和粒细胞未成熟细胞。骨髓涂片，染色：赖特或吉姆萨染色，双重染色，返回，2。骨髓细胞学检查的内容、方法及临床意义。低倍显微镜检查

2、。确定是否获得骨髓标本，涂片制备是否令人满意。骨髓穿刺液涂片后，肉眼观察，涂片尾部可见散在的骨髓颗粒和少量脂滴，大小为淡肉色，半透明；显微镜下可见许多骨髓特异性细胞，如各种未成熟细胞和巨核细胞，这是穿刺成功的标志。如果骨髓颗粒减少或缺失，骨髓的特定成分就会减少，这表明骨髓可能具有不同的外周血液稀释度。取样不佳，如脂肪滴增多，意味着红骨髓成分减少，反映骨髓增生减少。插图，2。判断骨髓增生的程度(表4-2-7)骨髓增生的程度通常由骨髓中有核细胞的数量来反映。采用五级法，骨髓增生程度分级，下页，骨髓增生程度分级(高倍镜)，明显降低15/HP，降低520/HP，活跃增殖2050/HP，明显活跃5010

3、0/HP，极度活跃100/HP，返回，3。观察巨核细胞的数量、成熟度、血小板生成功能及其形态。在低倍显微镜下计数所有膜中的巨核细胞数。并更换油显微镜观察，分类计数，注意巨核细胞和血小板是否异常。4.注意是否有异常细胞，如恶性组织细胞增生症的异常组织细胞、转移性癌细胞、高雪细胞、尼曼-皮克细胞等。注意观察是否有散在或堆积的体积较大、形状特殊的异常细胞，尤其注意涂片的尾部、边缘和骨髓颗粒。可疑异常细胞应在油浸显微镜下观察和确认。2.骨髓细胞学的内容、方法及临床意义。油浸显微镜检查：油浸显微镜检查涂膜体与尾部交界处，有核细胞分布均匀，结构清晰，着色良好。1.有核细胞的分类和计数在油浸显微镜下，根据细

4、胞的不同系列和不同发育阶段，连续计数200或500个有核细胞。然后计算细胞核总数的百分比。累计颗粒线和红线的总数，计算颗粒红比率(G:E)。分类中不计算巨核细胞、分裂细胞和退化细胞。2.观察细胞形态，仔细观察各系列细胞形态是否有异常，包括成熟红细胞形态是否有异常，是否有特殊异常细胞，必要时是否有寄生虫。插图，检查结果的临床意义1。骨髓增生的程度，其临床意义如前表所述。2.骨髓中各系列细胞的比例粒细胞系统及其发育阶段：50.60%红细胞系统：20%红细胞比(G/E)2.760.83:1(2-4:1)淋巴细胞系统：20%单核细胞系统：4%浆细胞系统其他细胞：可见极少量的非造血细胞成分。3.各系列细

5、胞比例、粒细胞系统与红细胞系统比例(粒/红)变化的临床意义2)红色颗粒比例增加：红色颗粒与红色颗粒的比例大于5:1。可以看出粒细胞系统增加或由红细胞系统减少引起。常见于：急性或慢性粒细胞白血病；急性化脓性感染，中性粒细胞白血病反应；纯红色再生障碍性贫血。3)红粒比例降低：红粒与红粒的比例小于2:1。可见粒细胞系统减少或由红细胞系统增加引起。常见于：粒细胞减少症，如谷物缺乏症；红细胞增多症，如各种增殖性贫血、真红病或继发性红细胞增多症。粒细胞系统：1)粒细胞增殖：可见于各种类型的粒细胞白血病，急性粒细胞白血病主要由原粒细胞和早期粒细胞增殖组成，慢性粒细胞白血病主要由中性晚期粒细胞和杆状粒细胞增殖

6、组成；大多数急性炎症和感染性疾病，中性粒细胞白血病样反应等。主要包括中性粒细胞晚期粒细胞和杆状粒细胞增殖。2)、粒细胞减少症：见于再障、粒细胞缺乏症或粒细胞减少症。红细胞系统：1)红细胞增多症：见于：各种增殖性贫血，如溶血性贫血、出血性贫血、小细胞色素减退性贫血等。主要是中度至幼红和晚期幼红细胞增多症；巨幼细胞，贫血，主要是巨幼红细胞增多症；急性红白血病的主要特征是红细胞增多症和早期红细胞增多症，通常伴有红细胞的巨幼细胞变化。2)红系减少：见于AA(包括PRCA)，但在某些CAA中，骨髓呈局灶性增生，有时红系细胞比例增加。淋巴细胞系统：1)淋巴细胞绝对增加：见于急性和慢性淋证、恶性淋巴瘤、淋证

7、和小叶、其他病毒感染、淋巴细胞白斑等。2)淋巴细胞相对增多：见于急性淋巴细胞白血病、粒细胞缺乏症或粒细胞减少症。单核细胞系统：多见于：血液系统疾病如急性单核细胞增多症、急性单核细胞增多症、骨髓增生异常综合征、恶性肿瘤、淋巴瘤等；一些传染病如肺结核、布鲁氏菌病、原生动物感染、感染性心内膜炎等。风湿性疾病，如系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎；其他如恶性肿瘤、肝硬化、药物反应等。浆细胞系统：多见于：多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、巨球蛋白血症、重链病等。反应性浆细胞增多，如慢性炎症和传染病、风湿性疾病、恶性肿瘤、过敏性疾病等。缺粮等。巨核细胞系统：1)增加：ITP综合征；骨髓增生性疾病，如慢粒、真红、内皮

8、素、国际货币基金组织等。脾功能亢进；巨核细胞白血病。2)、巨核细胞减少症：见于AA、AL等骨髓浸润或破坏疾病，以及急性感染、化学或药物中毒、放射病等。二、骨髓细胞学检查、血涂片观察的内容、方法及临床意义在检查骨髓时，有必要同时观察血涂片。1.注意白细胞分类计数和形态学观察；2.注意成熟红细胞的形态是否异常。有核红色。3.估计PLt的数量，注意其形状是否异常；4、观察有无寄生虫(如疟原虫)。根据骨髓和血象检查结果，填写检查报告，根据检查报告的要求，逐项详细填写和描述骨髓和血象的特征，并结合临床资料提出形态学诊断意见。在低倍显微镜下观察(取有核细胞和增殖的巨核细胞病理细胞的涂片)，在油显微镜下观察

9、，对200，500个细胞系进行分类计数，进行形态学观察，计算粒细胞红系、单核系统、淋巴系统和浆液系统中其他细胞的结果(各细胞系的粒细胞与红细胞的百分比)，观察血液切片的组织化学染色，并填写骨髓图结果报告(骨髓细胞的特征组织化学特征)存档并保存骨髓切片、骨髓图像分析步骤示意图、返回、3。血细胞的细胞化学染色，意思是：1 .帮助了解各种血细胞的化学组成和病理生理变化。2.它可以用来识别血细胞的类型。3.在诊断和鉴别诊断、疗效观察和发病机理研究中具有一定的价值(1)过氧化物酶染色(POX)，【原理】血细胞中的过氧化物酶(POX)能分解试剂中的底物H2O2，释放新的生态氧，将无色的联苯胺氧化成蓝色的联

10、苯胺，与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒，沉淀在细胞质中。【结果】无蓝黑色颗粒的细胞质为阴性，颗粒细且分布稀疏的细胞质为弱阳性，颗粒粗而密的细胞质为强阳性。临床意义过氧化物酶染色主要用于鉴别急性白血病的类型。在急性髓系白血病中，白血病细胞大多呈强阳性；急性单核细胞白血病弱阳性或阴性反应；急性淋巴细胞白血病呈阴性反应。因此，POX染色在区分急性髓系白血病和急性淋巴细胞白血病中最有价值。骨髓切片用POX染色，骨髓切片用POX染色，APL:显示强阳性反应，AML-M4:部分阳性反应，部分弱阳性反应，AML-M5:弱阳性，全部：阴性，3%，(2)苏丹黑B染色，原理：它是一种脂溶性染料，一种可溶于细胞质

11、的含脂物质结果和意义：它与POX染色大致相同。(3)中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)原理偶氮偶联法。血细胞中的碱性磷酸酶水解基质溶液中的-萘酚磷酸钠，产生-萘酚与重氮盐偶联形成灰黑色沉淀，沉淀位于细胞质中的酶活性处。结果碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞(分叶状核和杆状核)，其他血细胞呈阴性反应。参考值成人NAP阳性率为10% 。整数值为4080(分钟)。临床意义1。传染病：细菌感染和病毒感染的区别。慢性髓系白血病的NAP活性明显降低，积分值常为0，白血病样反应的NAP活性极显著升高。3.在急性髓系白血病中，NAP积分值下降；急性淋巴细胞白血病的NAP积分值增加；急性单核细胞白血病通常正常

12、或减少。4、再生障碍性贫血时NAP活性增加；PNH期间活性下降。5.NAP活性在其他血液疾病中适度增加，但在恶性组中降低。中性粒细胞碱性磷酸酶染色(NAP)，嗜酸性粒细胞-(4)酸性磷酸酶染色(ACP)，原理：(硫化铅法)血细胞中的酸性磷酸酶在酸性条件下水解-基质中的甘油磷酸钠(PH5.0)生成磷酸钠，然后与硝酸铅反应生成。结果：细胞质中出现棕色和黑色颗粒，为阳性反应。否则，它是负的(否则，偶氮偶合方法被省略)。临床意义，1。帮助诊断多毛类白血病。帮助区分t淋巴细胞和b淋巴细胞：TL()，BL(-) 3。以帮助区分戈谢病和尼曼-皮克病。4.单核细胞、组织、网状细胞和巨核细胞的ACP染色呈阴性反

13、应。酸性磷酸酶染色(ACP)，fab:全L2，ACP染色呈阳性反应(橙红色粗颗粒)，提示为T淋巴细胞白血病；(5)氯乙酸酯酶染色的粒细胞酯酶，氯乙酸萘酚酯酶(NCE特异性酯酶):1。急性粒细胞白血病呈强阳性，且不受氟化钠抑制。2.急性单核细胞白血病和急性淋巴细胞白血病为阴性。3.在急性粒单核细胞白血病中，可以看到阴性和阳性细胞。萘酚乙酸酯酶染色，-萘酚乙酸酯酶(-NAE，NSE是非特异性酯酶):1 .急性单核细胞白血病和急性粒细胞单核细胞白血病的单核细胞呈阳性，可被氟化钠抑制(抑制率为50%)；2.急性髓系白血病通常为阴性或弱阳性，并且不受氟化钠的抑制。萘酚乙酸染色呈阳性反应。(7)周期酸希夫

14、反应原理：周期酸能氧化血细胞中的糖原形成醛基。醛基在席夫碱溶液中与无色品红结合形成紫红色化合物，位于细胞质中。结果：胞浆内有红色颗粒、团块，甚至红色。意义：红细胞增多症和红白血病为阳性，其他红细胞贫血为阴性，巨核细胞为阳性。临床意义：原生质细胞(-)，早幼粒细胞为强阳性，中性粒细胞(-)，单核细胞(-)，淋巴细胞(-)，少数(-)，红细胞(-)；巨核细胞和Plt均呈阳性反应。M6红细胞呈阳性，马红细胞呈阴性。(8)铁染色(普鲁士蓝反应)原理人体内一定量的总铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式储存在骨髓单核吞噬细胞系统细胞的细胞质中，红细胞细胞质的线粒体也含有含铁血黄素。这些铁在酸化亚铁氰化钾溶液中反应

15、，形成位于含铁位置的蓝色亚铁氰化物沉淀。【结果】1 .细胞外铁观察到铁储存在骨髓颗粒的单核吞噬细胞系统中。阳性反应是在骨髓颗粒上看到淡蓝绿色的均匀无形物质，或蓝色或深蓝色的小珠、粗颗粒或蓝黑色的块状物质。2.细胞内铁观察年轻红细胞中的铁。在正常红细胞(主要是晚期红细胞)的细胞核周围可以看到15个蓝色小铁颗粒。含有铁颗粒的年轻红细胞被称为铁颗粒年轻细胞。如果有10个以上厚而深染的铁颗粒排列在细胞核周围，超过细胞核周长的2/3，称为环状铁颗粒幼细胞。参考值 1。细胞外铁1 2，主要是2。2.细胞内铁含量为20%，平均为65%。【临床意义】1。当缺铁性贫血发生时，储存在早期骨髓中的铁被耗尽，细胞外的

16、铁被“吸收”。因此，铁染色是诊断缺铁性贫血和指导铁治疗的一种可靠而实用的检测方法。2.非缺铁性贫血，如球蛋白血症，通常会增加细胞外铁，为3.4%。3.在铁载体贫血的情况下，铁载体细胞增加，可以看到环状铁载体细胞。细胞外铁观察显示，阳性样品有蓝绿色沉淀、血色病、AA、铁载体贫血、感染、AA、铁载体贫血、NBM正常骨髓、IDA、骨髓铁染色(Fe)、MDS-RAS铁染色、图中圆形铁载体红细胞、表4-2-10几种常见急性白血病细胞化学染色结果、IV。细胞免疫表型检测，又称细胞免疫标记(表型)检测，是利用单克隆抗体和免疫学技术检测细胞膜表面和/或细胞质上的特异性抗原，从而分析细胞的家族、分化程度和功能状态的方法。骨髓细胞免疫表型，(1)检测方法1，免疫荧光技术2，免疫酶染色法(1)APAAP法(2)巴氏法(3)作业成本法(2)细胞免疫表型的临床应用1。识别不同系列的细胞是有帮助的。例如，为了鉴定骨髓和骨髓细胞的免疫表型，谱系细胞的抗体包括CD13、CD14、CD15、CD32、CD33、CD65、CD91、CD156、CD166等。识别淋巴细胞系列的抗体有CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD52、CD77等。识别巨核细胞和血小板的抗体包括CD41、CD