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文档简介
1、超速离心技术简介超速离心机的离心速度为每分钟60,000转或更多,离心力约为重力加速度的500,000倍。在操作技术中,最常用的是差速离心和密度梯度离心。前者是一种交替使用低速和高速离心的方法,通过不同的离心力分离不同质量的物质。该方法适用于混合样品中不同沉降系数组分的分离。密度梯度离心广泛用于分离接近沉降系数的物质。该方法使用的溶剂系统的密度可以形成梯度(在离心管中,其密度从上到下连续增加),而不会使分离的生物活性物质凝聚或失活。离心后,每个物质颗粒可以根据其比重平衡在相应的溶剂密度中形成一个区域。首先,差速离心差速离心是一种交替使用低速和高速离心的方法,利用不同强度的离心力来分离不同质量的
2、物质。该方法适用于混合样品中不同沉降系数组分的分离。离心速度较低,较大的颗粒沉淀在管的底部,较小的颗粒仍悬浮在上清液中。收集沉淀物,以较高的离心速度离心悬浮液,沉降较小的颗粒等,从而达到分离不同尺寸颗粒的目的。原理:不同成分的沉降系数在不同的离心速度下有不同的沉降速率,可以用来分离亚细胞成分。当一个物体绕中心轴旋转时,它会受到离心力的影响。离心力越大,离心后的物质沉降得越快。应用:该方法主要用于分离细胞匀浆中的各种亚细胞成分。质膜可被低渗透性匀浆、超声破碎或研磨破坏,形成由细胞器和细胞成分如细胞核、线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体和溶酶体组成的混合匀浆。然后,通过差速离心从各种颗粒中分离出不同
3、质量和密度的各种亚细胞组分。2.密度梯度离心密度梯度离心使用一种溶剂系统,其密度可以形成梯度(在离心管中,其密度从上到下连续增加),而不会使分离的生物活性物质凝聚或失活。离心后,每个物质颗粒可以根据其比重在相应的溶剂密度中形成一个区域。常用的密度梯度溶剂是蔗糖或氯化铯溶液。当使用蔗糖时,首先将蔗糖溶液制成密度梯度溶液,然后在其顶部加入样品。离心后,如果你想收集分离的成分,你可以在离心管的下端钻一个小孔,然后收集它们的一部分。例如,当CsCl用作具有高密度和快速扩散的溶剂系统时,样品可以均匀地混合在溶剂中。离心达到平衡后,CsCl溶液形成密度梯度,样品中的每种成分也在相应的密度下形成一个区域。原理:离心介质以连续的密度梯度分布。通过离心,每个物种都被悬浮在一个有自己密度的培养基区域。当不同的颗粒之间存在浮力密度差时,在离心力场中,在密度梯度介质中,颗粒要么沉降,要么上浮,直到它们移动到与它们各自的密度完全相等的位置,在那里颗粒没有重量,并且无论它们被离心多久,它们都不会再移动,形成一系列密度区。从而分离具有不同浮力密度的物质。应用:该方法通常使用氯化铯、蔗糖、甘油等作为介质,一般用于物质大小相近但密度相差较大的情况。它通常用于分离和提取核酸、富含AT和GC的DNA、亚细胞器和质粒。前景:超离心是研究
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