霍乱疫情应急处置技术方案

1、湖南省澧县霍乱疫情应急处置技术方案1前言霍乱是由O1血清群或O139血清群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是以发病急、传播快、波及范围广、能引起大流行为特征的严重危害人体健康的甲类传染病，也是国际检疫传染病之一。霍乱潜伏期最短36小时，最长为数天，一般为1272小时。主要临床表现为剧烈腹泻(水样、黄水样、米泔水样或血水样便)，伴有呕吐，迅速出现严重脱水，循环衰竭和肌肉痉挛(特别是腓肠肌)。为及时发现我县的霍乱疫情，迅速采取有效的控制策略和措施，保障人民群众的身体健康与生命安全，维护社会稳定，促进经济发展，根据中华人民共和国传染病防治法、突发公共卫生事件应急条例、鹿泉市突发公共卫生事件应急预案等有

2、关规定，结合我市实际，制定本技术方案。2相关定义及诊断依据2.1术语和定义(1) 腹泻(0iarrhea)：是指1天排便3次或以上且具有粪便性状改变的一种临床症状。(2) 霍乱(Cholera)：是指因感染O1群或O139群霍乱弧菌并由此引起腹泻等症状的一种急性肠道传染病。(3) 暴发疫情：霍乱暴发是指一定地市一定人群中，在短时间内(一般指霍乱的最长潜伏期)突然出现较多霍乱病例，其发病率超过一般流行年的平均发病水平。出现1例。2.2诊断标准2.2.1带菌者：无霍乱临床表现，粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到0，群或和O139群霍乱弧菌。2.2.2疑似病例：具有下列三项之一者。(1)凡有典型临床

3、症状，如剧烈腹泻，水样便(黄水样、清水样、米泔水样或血水样)，伴有呕吐，迅速出现脱水或严重脱水，循环衰竭及肌肉痉挛(特别是腓肠肌)的病例。(2) 霍乱流行期间，与霍乱病人或带菌者有密切接触史，并发生泻吐症状者。(3) 出现无痛性腹泻或伴有呕吐，且粪便或呕吐物中霍乱弧菌快速辅助诊断检测试验阳性的病例。2.2.3临床诊断病例：具有下列三项之一者均可视为临床诊断病例。(1)疑似病例的日常生活用品或家居环境中检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者；(2)疑似病例的粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱弧菌毒素基因PCR检测阳性者；(3)在一起确认的霍乱暴发疫情中，具有直接暴露史且在同一潜伏期内出现无痛性腹泻或伴呕

4、吐症状者。224实验室确诊病例(1)凡有腹泻症状，粪便、呕吐物或肛拭子标本培养O1群或和O139群霍乱弧菌阳性者。(2)在疫源检索中，粪便或肛拭子标本检出O1或和O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。3应急准备3.1制定应急技术方案和有关操作规程根据霍乱防制的总体要求，结合本地历史上的疫情发生情况和规律，科学分析年度疫情发生趋势；制订应急处置技术方案和有关操作规程。3.2专业培训与应急演练在高发季节之前以及流行期内，对卫生行政领导和管理人员、防疫人员、检验人员和临床医扩人员等进行专项培训，强化霍乱病例的早发现、早报告和早隔离意识，开展流行病学、临床学、病原学、实验室诊断技术的培训，推广有

5、效控制疫情的新方法和新技术。落实各项疫情控制的技术准备工作，并根据情况组织应急演练。3.3物资准备根据疫情预测和防制工作的实际需要，购置足量的调查物资、消杀药品，配备必要的抢救治疗药械，包括饮水消毒药物、污物排泄物消毒药物、快速灭蝇灭蛆药物、必要的抢救治疗药品、器械和病床等。(1)调查和资料分析用品：霍乱个案调查表以及其它相关表格、记录本。(2)标本采集和现场检测用品：标本采集记录表、标本采集刚拭子(注意用于PCR检测标本采集的拭子，应使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒)、吸管、带盖可密闭的塑料管、自封式塑料袋、标签纸、油墨耐水的记录笔、装有运送培养基的密闭试管、空培养皿和装好选择性(包括强性和弱性

6、)培养基的培养皿、增菌培养基和装有增菌液的培养瓶等。(3)现场消杀用药品与器械：常用消毒杀虫剂：包括漂白粉、漂精片、次。次氯酸钠、过氧乙酸、碘伏、戊二醛、环氧乙烷等；配备的器械：包括喷雾器、刻度量杯装药品的消毒箱等。(4)现场防护用品：现场工作(流行病学调查、样品采集和消毒杀虫)防护用品，包括次性手套、长筒橡皮手套、长筒靴、工作服等。(5)预防性服用药物：环丙沙星、氟哌酸等。3.4霍乱监测监测是预防和控制霍乱流行的一项重要措施，在卫生行政部门的领导下，由疾病预防控制中心负责组织实施，各有关医疗卫生单位承担具体任务。霍乱监测应采取点、面结合的方式进行。监测内容包括：(1)腹泻病人：腹泻病门诊按监

7、测任务对腹泻病人采便培养，对疑似病人及时处理和上报。(2)重点人群：根据防治工作的需要，可在一定的范围内采检病人的密切接触者、与病人有传播关系的一般接触者及可能与流行有关的重点职业人群，如外地民工、饮食及旅游服务行业人员、经常外出人员等。亦可采检有追溯传染来源意义的往年病人、带菌者、旧疫点人群及来自疫区的人群。(3)外环境：每年疾病预防控制中心对外环境采样不少于10份，主要包括：水体：指疫点周围及有直接关联的水体，包括河、湖、井、塘、沟水等，可在沟河盲端、市镇下水道排放处及医院污水排放处等地抽样检查。在霍乱反复流行，水体容易检出阳性的地区可设长期监测点。阳性水体定期复查直至转阴。此外，对河塘泥

8、、水生动植物等也可视需要进行采检。其他：对公共厕所、粪坑、苍蝇和可能被病人污染的其他物品、环境等，亦可适当采样检查。(4)食品：根据需要检查市售食物。重点检查市售熟肉、乳制品、食用生品半成品等。3.5健康知识宣传在肠道疾病流行季节，定期或不定期通过媒体、宣传画等多种方式向群众宣传肠道病的防治方法等。4应急调查处置4.1组织领导根据疫情应急处理工作的实际需要和事件级别，卫计局向县人民政府提出成立相应的应急指挥组织机构的建议。应急指挥机构迅速组织现场调查工作组到达现场。现场调查组一般包括流行病学、实验室和临床医学、食品卫生、环境卫生等专业人员，现场调查组设立负责人，组织协调整个现场调查工作，调查组

9、成员明确各自的职责。4.2疫情报告按照中华人民共和国传染病防治法和突发公共卫生事件与传染病疫情监测信息报告家管理办法，各类医疗机构的医务人员发现带菌者；疑似、临床诊断或确诊霍乱病例后，2小时内以最快方式向县疾控中心报告并进行网络直报；不具备网络直报条件的应在诊断后2小时内以最快的通讯方式向相应单位送(寄)出“中华人民共和国传染病报告卡”。确诊病例必须由疾病预防控制中心进行确认和报告，当发现霍乱确诊病例l例及以上时，要按有关疫情报告和国家突发公共卫生事件相关信息报告管理工作规范(试行)的要求进行报告。疾病预防控制中心在接到辖区内霍乱病例报告后，在以最快方式向县卫计局和上级疾病预防控制中心报告的同

10、时，立即组织有关人员进行调查、核实和处理，病例确诊后于2小时内填写墓本信息(见附表11霍乱个案基本信息表)，以传真形式及时上报有关部门。同时根据实验室检测结果、流行病学调查结果、疫情动态等情况的变化，及时填报、更新和订正霍乱监测信息报告管理系统。所确病例的流行病学个案调查表(见附表12霍乱个案调查表)，于疫情结束后5日内上报有关部门。4.3现场调查4.3.1核实诊断通过查看病例、访问病人和能够提供较详细的病人发病与发病前生活信息的人、查看病人的检查信息甚至专家会诊等方式，收集病人的基本情况包括年龄、性别、地址、职业以及发病日期等，同时还要收集病人的症状、体征和实验室检测资料以及发病危险因素如可

11、疑水、食物及患同类病人的接触史等。分析临床采样的准确性，必要时重复采样进行检测。根据病例的临床表现、实验室检查与流行病学资料进行综合分析，做出判断。4.3.2流行病学调查开展个案调查(见附表1l霍乱个案基本信息表及附表1-2 霍乱个案流行病学调查表)，及时、完整、准确地填写调查表，以了解患者的发病原因及疫源地现况，积累资料，作为当地流行病学分析的基础。对疫点开展病原检索工作。在发生病例的整个单位及与之相关的单位开展暴发调查，确定暴发规模，查明原因。迅速摸清发病的时间分布、人群分布，确定可能的传染源与传播途径。在现有临床与流行病学资料难以确定感染来源和途径时，需要提出假设，开展专项调查；通过病例

12、对照研究、实验室检测等综合方法，验证假设，确定感染来源、途径与流行因素。4.3.3样本采集、运送和实验室检测(1)标本的采集实验室检测与流行病学调查密切结合，在个案调查开展同时即对病人、疑似病人、密切接触者进行采样。采集的标本包括粪便、呕吐物、肛拭子、血液等。在工作能力可及的情况下，要对每个病例收集标本分离霍乱弧菌。病原分离标本的采集最好在使用抗生素之前；必要时，也可对使用抗生素后的病人、疑似病人及密切接触者采集标本进行检测。对病人接触的可疑食品、水体等，应规范采集标本进行病原分离。因聚餐引起的暴发，除采集可疑食品标本外，对食品清洗水源也需采样检测。怀疑或经病原分离确证感染来源为市售食品或原料

13、时，应对市场相关食品进行采样检测。标本采集方法见附录1(各种标本的采集方法)。采集标本时详细填写标本送检单。病人或疑似病人标本送检单包括标本编号、姓名、地址、发病时间、临床诊断、标本种类、采样地点(住院时填写医院和病房名称)、采样时间等内容：健康人标本送检单包括标本编号、姓名、地址、是否为病人密切接触者(如果“是”，则同时记录病人姓名、发病日期、医院名称)、是否有共同餐饮史、标本种类、采样地点、采样时间等内容；食品或环境标本送检单包括标本编号、标本名称、采样地点、采样时间等内容。标本管(盒)外表作明确标记，且所作标记应能防水、不易擦除。(2)标本的运输采集的标本宜立即处理和接种培养基进行增菌和

14、或培养。不能立即检测的标本，需置于保存培养基(碱性蛋白胨水、文腊氏保存液、Cary-Blair半固体保存培养基等)中保存。所有标本按照可能有霍乱弧菌对待，注意相应的生物安全要求，置于坚固、防水、密闭、耐压的转运箱中，专人送往实验室。(3)标本的检测实验室收到标本立即进行检测。所有标本首先进行增菌，对食品和环境标本等，考虑二次增菌的需要：典型病人水样腹泻标本可同时接种选择性培养基。标本最好同时接种强选择培养基(如对霍乱弧菌具强选择性的庆大霉素琼脂、对主要致病性弧菌选择性强的TCBS琼脂、4号琼脂等)和弱选择培养基(碱性琼脂、碱性胆盐琼脂等)。对生长菌落的鉴定参照卫生部疾控司霍乱防治手册(第五版)

15、执行。现场使用的快速检测方法，需要注意其检出灵敏度和应用范围。原则上要求高灵敏度。可以使用检出限与病人标本中菌浓度相符合的简易方法，但注意对结果的解释和对整个腹泻人群的参考价值。对于分离到的霍乱弧菌菌株、尤其是分离来自首例和暴发疫情的菌株，立即送常德市疾病控制中心的实验室进行复核。对菌株主要进行以下实验分析：通过标准诊断血清的凝集试验(玻片凝集)进行鉴定和血清分群分型、O1群菌株的生物分型实验；利用必要的生化实验进行鉴定和鉴别；药物敏感性实验；噬菌体生物分型；霍乱毒素和毒素基因检测(如GMl-ELISA和PCR检测)。疾病预防控制中心的实验室根据实际工作能力完成以上基本分析，及时上报常德市疾病

16、控制中心。4.4控制措施在发生疫情后，迅速组织核实诊断，确定疫情的严重程度，以便及时采取针对性的控制措施，防止疫情续发、蔓延，并尽快扑灭疫情。4.4.1疫点、疫区的划定及处理对从首例病人检出的埃尔托型霍乱弧菌应及时做噬菌体一生物分型。如为流行株要及时划定疫点、疫区，并按下列规定处理。如为非流行株，按一般腹泻病菌处理。4.4.11疫点、疫区的划定(1)疫点：指发生病人、疑似病人或发现带菌者的地方，以及可能引起新感染的地方。要根据流行：病学资料来划定疫点。主要包括病人在发病前3天至隔离时的活动范围、与周围人群的接触情况和其排泄物对外环境污染的情况，以及当地基本卫生设施和卫生状况。一般以同门户出入的

17、住户，或与病人、疑似病人、带菌者生活上密切有关的若干户为疫点范围。根据传染源的污染情况，一个传染源可有一个以上的疫点。(2)疫区：为了防止由疫点向外传播造成继发感染，根据疫点的地理位置、水系分布、交通情况、自然村落等特点宋划定疫区。一般在农村以一个村或几个村、一个乡或毗邻乡，在城市以一个或几个居委会或一个街道为范围划为疫区。可根据流行病学调查结果，适时调整疫区范围。若为水源性暴发，可以饮水供应范围划定疫区；若为食源性暴发，则可以进餐者活动范围划定疫区。划定疫点后应立即设岗封锁。除医务人员外，严格限制其他人员出入。进入人员必须穿隔离衣，戴手套、口罩，换鞋：出疫点时在封锁圈边缘设置的消毒站脱去手套

18、、防护服、帽子、鞋，并进行手的消毒清洗。4.4.1.2疫点处理(1)坚持“早、小、严、实”的原则，即时间要早，范围要小，措施要严，落在实处。疫点内有可能被污染的物品未经消毒不得带出。(2)隔离治疗传染源：病人、疑似病人和带菌者要立即送就近指定医院或治疗点治疗(主要采用mf0推荐的0RS补液法)。不允许长距离转送病人。若确需转送的病人，要随带盛放吐泻物的容器。对途中污染的物品、地面和运送病人之工具要随时消毒处理。(3)疫点消毒：认真做好随时消毒和终末消毒，特别注意对病人、疑似病人和带菌者的吐泻物和污染过的环境、物品、饮用水等进行消毒和处理。消毒前向疫点内人群进行宣传、解释和介绍消毒知识。随时消毒

19、时向隔离的健康人培训消毒剂使用方法并使之掌握。随时消毒：具体消毒方法详见肠道传染病暴发后消毒和病媒生物控制技术方案。终末消毒：在病家向病人家属解释消毒目的、过程和注意事项，请病人家属配合开展工作，了解患者发病时居住和活动的房间市域、触及物品以及吐泻物污染市域，将未受污染并且不能进行消毒的物品进行遮掩或转移。消毒前需要穿戴好个人防护服和手套。消毒时先灭苍蝇、蟑螂，然后按由外向内的顺序，喷雾或擦拭消毒门把手、地面、墙壁、家具、厕所等处：从不同房间以及最后退出时，边退边消毒经过的地面。病人穿过的衣物、吃过的剩余食品、使用过的餐具及其它生活用品、吐泻物等，按照随时消毒的方法进行消毒。对于室外环境，根据

20、流行病学调查和室外环境采集标本的验检测结果，对污染市域及可能污染市域，尤其水井和污水排放处等市域进行消毒。(4)接触者管理：调查与传染源发病前5天内及病后有过饮食、生活上密切接触的人，了解健康状况，特别是每口大便的次数和性状，限制接触者的活动范围，对其排泄物要进行消毒，特别要注意防止污染水源。自开始处理之口起每日验大便1次，连续2次；并给予预防服药，可根据各地药敏试验情况选择药物。(5)开展爱国卫生运动：加强饮用水消毒，劝导群众不喝生水，不吃生冷变质食物，严禁使用新粪施肥，应积极杀蛆灭蝇，改善环境卫生。(6)如涉及跨辖区的病例或密切接触者时，要及时按规定发出协查通知，紧密配合作好调查处理工作。

21、(7)疫点的解除：当疫点内上述措施均已落实，所有人员验便连续两次阴性，无续发病人或带菌者出现时可予以解除。若有新病人和带菌者出现，则继续做好疫点内各项工作，达到上述要求时再行解除。如无粪检条件，自疫点处理后5日内再无新病例出现，可视为暴发流行已得到初步控制，转为常规防治和监测。在特殊情况下，如新菌型的出现，流行早期，旅游地、人口稠密地区等，可实施疫点封锁并从严管理。4.4.1.3疫区处理为迅速控制疫情，除在疫点内采取严格的防控措施外，还应在划定的疫区范围内开展群众性爱国卫生运动，加强疫点外围的疾病控制工作，及时发现传染源，认真处理，防止传播。主要工作如下。(1)加强卫生宣传教育，要点如下：不喝

22、生水(未消毒)，不吃直接用生水洗过的食物、不吃生冷变质食物，特别是海产品和水产品，不用生水漱口、刷牙；饭前便后洗手，碗筷要消毒，生熟炊具要分开，要防蝇灭蝇；不随地大便，不乱倒垃圾污物，不污染水源；发现吐泻病人及时报告；不到疫区外集镇赶集，不到病家或病村串门，不举办婚丧酒宴和节日聚餐；市场购买的熟食品和隔夜食品要加热煮透；饮用水消毒。(2)及时发现病人、疑似病人和带菌者：医疗机构要加强腹泻病门诊和巡回医疗，对腹泻病人要做好登记报告、采便送检和及时治疗，发现疑似病人时要隔离留验：乡村医生要认真做好查病报病；对疫区人群，按流行病学指征进行检索，及时发现传染源，特别要及时发现首发病例同期内所有腹泻病人

23、并及时处理。(3)加强饮用水卫生管理：饮用河水地区，禁止在河内洗涤便柿、病人衣物、食具、食物及下河游泳；饮用塘水地区，提倡分塘用水，提倡用密闭取水方法；饮用井水地区，水井要有栏、有台、有盖、有公用水桶，要有专人负责饮用水消毒：饮用自来水地区，管网水和末梢水余氯含量要符合要求。(4)加强饮食卫生和集市贸易管理：认真执行中华人民共和国食品安全法，不准出售不符合卫生要求的食物。凡不符合卫生要求的饮食店、摊要限期达到卫生要求，在未达到卫生要求前可暂时停止营业。饮食从业人员要接受带菌检查，发现阳性者要及时隔离治疗。对集市贸易要加强卫生管理，市场管理人员应严格执行各项卫生规章制度，卫生部门要加强督促检查。

24、(5)做好粪便管理，改善环境卫生，进行粪便无害化处理。粪便管理以不污染环境、达到杀蛆灭蝇为原则。要拆迁污染饮用水源的厕所、粪缸，处理苍蝇孳生地，采取各种方法杀蛆灭蝇，改善环境卫生。(6)限制人群流动，防止传染源扩散：禁止大型集会，必要时暂停集市贸易。(7)限制一切大型聚餐活动。4.4.1.4疫情解除后的观察疫情解除后，为了防止再次发生疫情，必须继续做好以下几项工作，即：卫生宣传教育、“三管一灭”(管水、管食品、管粪便和消灭苍蝇)、群众性查病报病以及对腹泻病人和疑似病人的妥善处理，有重点地开展人群检索、水体定点采样观察等。疫情解除后观察时间的长短，可根据流行病学指征而定。4.4.2阳性水体的管理

25、对检出流行株的阳性水体，必须加强管理。树立警示牌，告诫群众暂勿使用。在阳性水体周围检出病人和带菌者时，要引起警惕，防止水型暴发。与阳性水体有关的地区，要加强联防。对周围人群或重点人群进行监测；对水体周边进一步做好饮用水消毒和粪便管理，教育群众避免接触。在水体阳性期间，禁止在该水域从事捕捞等作业。4.4.3阳性食品和管理对被霍乱弧菌污染的食品，必须加强管理，停止生产及销售，严防发生食源性传播、流行。要尽量查清可能的污染来源以及销售去向，以便采取相应的防制措施。同时加强对同类品种和周围有关食品的监测。4.5疫情控制效果评价疫情控制期间，在流行病学调查和病原学检测的基础上，动态分析疫情的发展趋势和防

26、治措施的实施效果。5应急医疗救援5.1霍乱病人的医疗救治初步确诊病人要在医院传染科病房或严格隔离的医疗点治疗。医院、诊所收治霍乱病人后，治疗过程中需严格落实隔离措施，对病人使用的物品必须进行浸泡或高压消毒，尤其应注意病人吐泻物的消毒，防止病原菌随污物排出到医院外。对霍乱病人应就近治疗，避免不必要的转院。若因没有救治条件需要转送病人，转送过程中应严格隔离病人，随带盛放吐泻物的容器，对途中污染和可能污染的物品进行随时消毒处理。对霍乱死亡病例，尸体进行体表消毒后再予以火葬，病人入院后在抢救治疗的同时立即采便送检；如当时已停止排便，可用肛拭采便；如有呕吐物，也可同时送检。对陪护者同时采便送检。粪便、呕

27、吐物标本的采集一定要在服用抗生素之前，或在第一次口服的当时，但并不是服药后就不再采集标本，霍乱病人，尤其典型病人体内水分和电解质丢失严重，治疗原则是预防脱水、治疗脱水、纠正电解质紊乱、合理使用抗菌药物。病人应根据病情轻重立即给以补液。5.2出现大量病人时的医疗救援当集中出现大量病人时，需要综合组织我市的医疗资源开展应急救治工作。设立临时医疗救治站(点)是应对出现不能及时入院治疗的大批病人的医疗救援方式。对于建立临时医疗救治站(点)，需要会同传染病流行学人员、环境卫生管理人员、医院负责人员、政府有关人员共同讨论地点的选择，基本原则是离暴发点近，周边没有开放的水源水体如池塘、河流等，便于卫生管理，

28、有电力供应和防雨防风、防寒建筑或设施。临时医疗救治站(点)建立和收治病人后，作为医院传染病房或重要疫点对待，落实隔离、防病、消毒等措施。6响应终止和善后处理在霍乱疫情涉及地域范围内所有霍乱疫点被解除后，可终止应急响应。符合终止条件时，由卫计局组织专家进行分析论证，提出终止应急响应的建议，报县人民政府或应急指挥部批准后实施。7附件7.1附表附表11 霍乱个案基个信息表附表12 霍乱个案流行病学调查表附表2 霍乱菌株登记表附表3 疫点、疫区相关人群霍乱弧菌检索登记表附表4 疫点、疫区外环境及食品霍乱弧菌检索登记表附表5 疫点、疫区相关人群、外环境及食品霍乱弧菌检索统计汇总表7.2附录附录1 各种标

29、本的采集方法附录2 疫点消毒的实施方法附录3 霍乱弧菌的分离与鉴定附录4 霍乱实验室诊断的相关实验技术附录5 霍乱弧菌的鉴别诊断附录1 各种标本的采集方法1粪便标本：对水样便以吸管吸取13毫升，成形便采集成人拇指大小的便量，置于灭菌管内或经增菌后送检。任伺容器均应加橡皮塞或将螺旋盖旋紧，容器外壁不可沾染粪便。采集肛拭子标本，以直肠拭子用保菌液或牛理盐水润湿后，由肛门插入直肠内35厘米处采集，转动取出，插入保存液或无菌试售；内送检。粪便标本应在2小时内尽快送检，否则标本应放入Cary-Blair运送培养基中。沾染粪便的衣物、物品、地面，以及尸体肠内容物等也楞作为检材。所有采集的拭子标本(肛拭子、

30、食品及操作台等的涂抹拭子)，当直接用于PCR检测时，不能使用棉拭子和木质拭子棒，因为这类材料中含有核酸扩增抑制剂，而要使用灭菌人造纤维拭子和塑料棒。 2呕吐物标本：以吸管吸取l3毫升，置司密闭样品管立即送检。3食品标本：采集50100克置于可密闭灭菌广口瓶、塑料瓶或厚的自封塑料袋内，常温下迅速送实验室。4水产品标本：通常选取活的或新鲜水生动物为采集对象，冰冻水生动物也可作为采集标本。采集水生动物鳃部和或肠内容物等标本，置于采样瓶(管)或食品采样袋中密封，常温下送检；同时，以无菌棉签涂抹五只(条)以上的某类水生动物体表和或水生动物肛门，置于碱性蛋白胨水中送检，每管碱性蛋白胨水作一份样品看待。有条

31、件的可将水生动物整体采回实验室再进行处理。5水体标本：用火菌的500毫升玻璃瓶采集相对静止的表层水(深度30厘米以内) 500毫升，加盖密封后以牢固自封塑料袋包裹密封，常温下送实验室。取水点的选择应结合流行病学调查资料而确定；每个采样点应相距数米：同一采样点采集样本不少于2瓶，用于平行检测。采集标本的水体按可能污染有霍乱弧菌刑待，因此采样者应注意自身防护，同时避免水样沾染周围环境。6，物体表面标本：以灭菌拭子蘸碱性蛋白胨水涂抹可疑物体表面，置于装有碱性蛋白胨水的可密闭玻璃或塑料试管中，常温送检。附录2疫点消毒的实施方法1消毒原则11及时开展消毒工作：为减少传播机会，在接到疫情报告后城市应在6小

32、时内，农村应在12小时内落实消毒措施。12消毒范围的确定：应以霍乱病人排出霍乱弧菌可能污染的范围为依据。13消毒持续时间：应以霍乱流行情况和病原体监测结果为依据。14消毒方法的选择：应以消毒因子的性能、消毒对象为依据。尽量避免破坏消毒对象的使用价值和造成环境的污染。15对疑似霍乱病人的疫点消毒：按确诊霍乱病人的疫点进行消毒处理。2疫点的随时消毒21医疗机构的防疫人员接到患者诊断与消毒通知单后，应立即到疫点指导随时消毒，必要时提供所需消毒剂和器械。22在病家，随时消毒由病人的陪伴或病人所在单位派人进行；在医院，随时消毒由医院安排专职人员进行。 ，23交给病家使用的消毒剂，应标明名称和使用方法。

33、24对病人应根据病情做到“三分开”与“六消毒”。“三分开”：分住室、分饮食、分生活用具(包括餐具、洗漱用具、便盆、痰罐等)：“六消毒”：消毒呕吐物和排泄物、消毒生活用具、消毒双手、消毒衣服、被单、消毒患者居室、消毒生活污水。25病人的陪伴和护理人员，除做好病人的随时消毒外，应做好本人的卫生防护。特别在护理病人后，应消毒双于。26消毒指导人员与负责随时消毒人员，应共同填写疫点消毒工作记录，及时上报。必要时，采样进行消毒效果检测与评价。3疫点的终末消毒31消毒的执行在疾病预防控制中心的监督指导下，由医院防保医生负责进行终末消毒。32消毒程序321消毒人员接到传染病消毒通知后，应在规定时间内迅速赶赴

34、疫点开展终末消毒工作。322在出发前，应检查所需消毒用具、消毒剂和防护用品，做好准备工作。323消毒人员到达疫点，首先查对门牌号和病人姓名，并向有关人员说明来意，做好防疫知识宣传，禁止无关人员进入消毒市域内。324脱掉外衣，放在自己带来的布袋中(不要放在污染或可能受到污染的地方)。更换隔离服、胶鞋，戴上口罩、帽子。如用过氧乙酸或含氯制剂时，须戴防护眼镜。325仔细了解患者病前居住的房间、活动场所，用过的物品、家具，吐泻物倾倒或存放的地点，以及污水排放处等，以确定消毒范围，并根据不同对象及其污染情况，选择适宜的消毒方法。326进入疫点时，应先消毒有关通道。327测量污染范围内需消毒的房屋及地面的

35、面积和体积，以及需消毒的污水量。328必要时，检验人员对不同消毒对象进行消毒前采样。329消毒前应关闭门窗，将水缸盖好，将未被污染的贵重衣物、饮食类食品、名贵字画及陈列物品收藏好。 3210在关闭门窗前，应先于室内灭蝇，再进行其它消毒。321l消毒室内地面、墙壁、家具和陈设物品时，应按照先上后下，先左后右，依次进行。3212病人用过的餐具、饮具及污染的衣物可在疫点内进行煮沸或浸泡消毒。作浸泡消毒时，必须使消毒液浸透被消毒物品。作擦拭消毒时，必须反复擦拭23次。对污染重、经济价值不大的物品如废弃物等，征得病家同意后进行焚烧。3213室内消毒后，必要时对厕所、垃圾、下水道、自来水龙头或饮用水井等进

36、行消毒。3214对病人密切接触者进行卫生处理。3215疫点消毒工作完毕后，先对消毒人员的衣物、胶靴喷洒消毒后再脱下。衣物脱下，将污染面向内卷在一起，放在布袋中带回消毒。将所用消毒工具表面以消毒剂进行擦拭消毒。3216达规定的消毒作用时间后，检验人员对不同消毒对象进行消毒后采样。3217填写疫点终末消毒工作记录。 3218离开病家前，告诉病家开窗通风，擦拭打扫。4消毒人员注意事项41消毒人员在出发前要检查应携带的消毒工具是否齐备无故障，消毒剂是否齐全够用。4.2消毒人员应主动取得病家合作。在消毒过程中，应尽量采用物理消毒方法。在用消毒剂时应尽量选择对相应微生物杀虫灭作用良好，对物品损害轻微者。4

37、.3消毒人员在消毒过程中，不得吸烟、饮食，更不要随便走出消毒。同时应禁止无关人员进入消毒市域内。4.4消毒人员工作时应认真细致，有条不紊，突出重点。凡应消毒的物品，不得遗漏。严格市分已消毒和未消毒的物品，勿使已消毒的物品被再次污染。4.5消毒完毕后，消毒人员携回的污染工作衣物应立即分类作最终消毒。清点所消耗的药品器材，加以整修、补充。填好的消毒记录应及时上报。附录3霍乱弧菌的分离与鉴定1标本的收集病人粪便、呕吐物、肛拭子为必取标本。水样便或呕吐物采样量一般为lml一3ml，成形便采取指甲大小的粪量：肛拭子可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3cm5cm处旋转后取出，置增菌液或运送培养基送检。2

38、标本的送检采得的标本应立即接种于培养基。不能立即接种的，应放入碱性蛋白胨水或文腊二氏保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中送检。标本与保存液的比例约为l：5。3分离培养 31增菌后分离培养：所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基置37增菌6h8h后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强、弱选择性培养基各一个置37培养18h-24h。必要时进行二次增菌培养。32直接分离培养：对急性期病人水样便标本在进行增菌培养的同时可取一接种环或用肛拭子直接接种在选择性培养基上置37培养18h-24h。33常用强选择性培养基包括庆大霉素琼脂、TCBS琼脂和四号琼脂等。弱选择性培养基一般使用碱性营养

39、琼脂等。34不同分离培养基上生长的霍乱弧菌典型菌落特征不同，常见分离培养基的3718h24h培养物的菌落特征如下：341碱性营养琼脂：霍乱弧菌在碱性营养琼脂上生长的菌落呈现为无色、圆形、透明或半透明、表面光滑、润湿、扁平或稍凸起、边缘整齐，菌落直径一般约为2毫米。 342庆大霉素琼脂和四号琼脂：菌落特征与碱性营养琼脂上生长的菌落相似，但透明性略差，多呈半透明状，由于这类培养基均含有业硝酸盐成份，菌落中面呈灰色或灰黑色，并随培养时间的延长而加深。343 TCBS琼脂：菌落牛长呈黄色发亮、表面光滑、润湿、稍凸起、边缘整齐。4菌株鉴定 41菌株初筛：包括玻片凝集实验、氧化酶试验。411玻片凝集实验附

40、录4霍乱实验室诊断的相关实验技术1霍乱弧菌毒素基因PCR检测霍乱弧菌包含多种毒力相关因子，其中霍乱毒素是霍乱弧菌主要的致病因子，因此，在霍乱诊断上霍乱毒素基因(ctxAB)的PCR检测具有重要的诊断价值。该方法特异性和灵敏度均较高，需要在符合PCR实验条件的实验室中进行，同时需要严格的核酸提取操作。扩增检测霍乱毒素基因ctxAB的引物为：P1：5CTC AGA CGG GAT TTG TTA GGC ACG3P2：5TCT ATC TCT GTA GCC CCT ATT ACG3扩增产物长302bp。扩增参数为：预变性：94min；扩增循环：94 30sec，68 30sec，72 30sec，共30个循环；末轮延伸：72 7min。在不同厂商和型号的PCR扩增仪器上，退火温度可能略有不同。该方法直接检测是否为产毒株，需注意有时会出现山非产毒的霍乱弧菌引起的病例或小范围暴发。2