遗传实验2-2 粗糙链孢霉生活史及.ppt

1、实验二粗被孢霉的生活史和杂交，一、实验原理粗被孢霉属于真菌中的子囊菌纲。 粗孢白僵菌的菌丝体为单倍体(n=7)，各菌丝细胞中含有数十个细胞核。 菌丝体前端断裂形成分生孢子。 分生孢子有2种，小型分生孢子含有1个核，大型分生孢子含有几个核。 分生孢子发芽成菌丝，再生成分生孢子，可与周重开，这是粗孢子的无性生殖过程。被孢霉(Neurospora crassa )的生活史，图8-19，粗被孢霉菌株有两种不同的结型，用a、a或mt、mt-表示，他们由一对等位基因控制。 不同结合型菌株的细胞结合产生有性孢子，这一过程称为有性生殖。 有性生殖可以用两种方法进行。 一种是产囊体产生内置的原子囊果，另一种结合

2、型的分生孢子落入该原子囊果的受精丝后，分生孢子的细胞核进入受精丝，到达产囊体，形成结合型基因的异核体。 二是不同结合型菌株菌丝连接，两种结合型细胞核融合形成合子，产生子囊果。 其中，1和2未交换，第一次分裂分离子囊3-6全部交换，称为第二次分裂离子囊。 因此，通过修正第2次分裂离子囊在总子囊数中所占的比例并乘以0.5，可以决定某基因与着丝粒之间的重组值。 重组值除% (即100倍)外，就是该基因图的距离。粗孢子囊和子囊型、粗孢子囊和子囊型，本实验中赖氨酸缺陷型(记为Lys )和野生型(记为Lys )杂交，得到的子囊子分离为4个黑色()，4个为灰色(-)。 黑孢子是野生型的；赖氨酸缺陷型孢子因成

3、熟慢而呈灰色。 根据黑色孢子和灰色孢子在子囊的排列顺序，有6种子囊类型。 子囊型(1)和(2)的发生如图所示。 在第一次减数分裂(M1 )中，具有Lys的2个染色单体移动到一个电极，具有Lys-的2个染色单体移动到另一个电极。 Lys /Lys-该基因在第一次减数分裂时被分离，称为第一次分裂分离。 在第二次减数分裂(M2 )中，每个染色单体相互分离，形成四分体，依次或者再次经过有丝分裂，形成(1)和(2)的子囊型。 在形成这2种子囊型时，着丝粒和基因对Lys /Lys-之间没有发生交换，首次分裂分离子囊。 图中(3)和(4)的形成。 由于Lys基因与着丝粒之间发生了一种交换，Lys /Lys-

4、在第一次减数分裂时不分离，在第二次减数分裂(M2 )时具有Lys的染色单体与具有Lys的染色单体相互分离，故将其称为第二次分裂分离。 然后，再次经过丝分裂，形成4个孢子对，顺序为-。 这是第二次分裂离子囊。 (5)和(6)的子囊型的形成与(3)和(4)相似，交换了两种染色单体，但交换不是发生在第二种染色单体和第三种染色单体之间，而是发生在第一、三或第二、四种染色单体之间。 对粗链被孢霉lys和lys杂交子囊孢子的排列顺序、(1)、(2)为非交换型(3)、(4)、(5)、(6)为交换型子囊(7)、(8)的2杂交结果进行纠正，并对基因图距离进行纠正。 三、实验材料粗孢霉野生型菌株Lys、结型a .

5、粗孢霉素缺陷型菌株Lys-、结型a .四、实验器具和药品1 .器具：显微镜、时订镊子、解剖针、接种针、载玻片、试管2 .药品：漂白水。 五、实验步骤1、菌种活化：从冰箱中取野生型和缺陷型菌种，分别连接2条马铃薯培养基试管斜面，在28OC温箱中培养天。 培养到菌丝体上部形成分生孢子。 杂交： ()同时在杂交培养基中接种双亲本菌株的分生孢子或菌丝，在25 OC温箱中进行混合培养。 请贴上标签，注明亲本菌株和杂交日。(2)杂交后天可见许多棕色原子囊果，之后原子囊果变黑变成子囊果。 (3)在天空左右可以用显微镜观察。 另一种方法是在杂交培养基中接种亲本菌株，培养25 OC后发现原子囊果。 同时准备另一

6、亲本菌株的分生孢子，悬浮在无菌水中(接近白色悬浮液)，将该悬浮液加入到形成原子囊果的培养物表面，使表面几乎湿润，继续25OC培养。 原子囊果加入分生孢子后1天变黑开始变成子囊果，后成熟。 显微镜观察步骤： ()在有子囊果的试管中放入少量无菌水，摇晃一段时间，向空三角瓶中注入水，加热煮沸，防止分生孢子飞舞。 取()一个载玻片，滴下漂白水，然后用接种针取出子囊果放置在载玻片上，用另一个载玻片复盖，用手指按压，压碎子囊果，在显微镜下(倍)检查，就可以看到子囊。 (3)最后使用的针或玻璃板应开水煮清洗。 (4)显微镜下观察记录子囊孢子在子囊中的排列顺序，结果见下表。 红色被孢霉性状遗传杂交实验结果表明：被孢霉的子囊果和子囊，(a )成熟的子囊果(b )分散的子囊、交换型子囊、交换型子囊、未交换型子囊、交换型子囊、未交换型子囊、未交换型子