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文档简介
1、专题5 DNA和蛋白质技术,课题1 DNA的粗提取与鉴定,（1）DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 （2）DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精,（一）DNA的溶解性,一、原理,（二） DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性,（1）酶：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。 （2）高温：大多数蛋白质不能忍受6080的高温， 而DNA在80以上才会变性。 （3）洗涤剂：瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。,（三）DNA分子的鉴定,现配现用,DNA的粗提取与鉴定,二、实验设计,（一）实验材料的选取,哺乳动物红细胞： 大肠杆菌： 鸡血细胞：,没有细胞核，没有DNA。,原核生物，DNA含量少。,DNA
2、含量丰富，材料易得，易吸水胀破。,DNA的粗提取与鉴定,DNA含量相对较高的生物组织。,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,（1） 动物细胞：加蒸馏水 搅拌 过滤,二、实验设计,DNA的粗提取与鉴定,（2） 植物细胞：加洗涤剂和食盐 搅拌和研磨 过滤,（三）去除滤液中的杂质,方案一原理 方案二原理 方案三原理,二、实验设计,DNA的粗提取与鉴定,（四）DNA的析出与鉴定,制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，搅拌（防止血液凝固） 静置或离心（提高细胞悬液浓度） 去除上清液（血浆，没有DNA ） 破碎细胞，释放DNA加蒸馏水，快速同向搅拌 过滤取滤液 （除去核膜、细胞膜等） 溶解核内DNA加入NaCl至2mol/L，同向缓慢搅拌 可过滤取滤液（除去部分杂质） DNA析出 加蒸馏水至0.14mol/L，同向缓慢搅拌 过滤或用玻璃棒撩起DNA（除去大部分杂质） DNA再溶解加入NaCl至2mol/L，同向缓慢搅拌 可过滤取滤液（除去部分杂质） DNA再析出加等体积95冷却酒精，同向缓慢搅拌 （析出白色丝状物） 过滤或用玻璃棒撩起DNA
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