建川生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用

1、肿瘤生物治疗及其在临床肿瘤治疗中的应用，夏剑川，中山大学肿瘤防治中心，肿瘤生物治疗的概念，肿瘤生物治疗主要通过机体的免疫机制或生物制剂的作用来调节机体的生物反应，从而达到治疗肿瘤的目的。它主要包括肿瘤基因治疗、免疫治疗和免疫基因治疗。近年来，生物分子靶向药物也被纳入生物治疗范畴。随着分子生物学、肿瘤学和免疫学的发展，肿瘤生物治疗已经成为继手术、放疗和化疗之后的第四种肿瘤治疗模式，并在临床上显示出良好的应用前景。1.基因治疗(gene therapy)是应用分子生物学技术，将相应的功能基因补充到有功能缺陷的细胞中，从而纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。参与者：体细胞。4。基因疗法被认为是

2、治疗包括肿瘤在内的许多重要疾病的希望，1990年美国阿香蒂德席尔瓦，1999年美国杰西格尔辛格，2000年美国阿兰费舍尔，2003年法国阿德里安付令超，英国杰西格尔辛格，1999年，阿香蒂德席尔瓦，1990年，阿兰费舍尔，2003年，(1)基因疗法的曲折发展，2003年阿德里安付令超，1990年弗里斯安德森，1969年基因疗法的概念，6，1999年，宾夕法尼亚大学的一名患者在接受腺病毒介导的基因治疗时死亡。从2002年到2003年，11名SCID患者在法国内克儿童医院接受了逆转录病毒介导的基因治疗，其中3人在治愈后出现白血病样症状。杰西格尔辛格(Jesse Gelsinger)，1999，阿散

3、蒂德席尔瓦(Ashanti de Silva)，1990，阿兰费希尔(Alain Fischer)，2003，“基因疗法的挫折”，自然，2003年1月，421，305，“自然生物技术”，2003年2月，第21卷，第121页，7，白血病的原因：在原癌基因LOM2基因座插入活化逆转录病毒载体。EX 1、患者5整合、患者4整合、mfg c、mfg c、ex 2、ex 6、lom2、8，世界上有1714个基因治疗临床试验，美国，美国，澳大利亚，德国，(2)基因治疗策略，要把一个修复基因转移到病人体内，研究人员必须经过几个步骤：他们必须分离疾病相关的基因；它必须被包装在一个载体中，通常是一种不能繁殖和导

4、致疾病的残疾病毒，但它可以像一辆运送卡车一样将基因运送到患者细胞中；一旦进入人体细胞，新基因就能开始发挥作用并恢复健康。10，基因治疗的必要条件，1。发病机制在基因水平上是清楚的；2.待转移基因已被克隆和分离，其表达产物已被完全了解；3.基因正常表达的组织可以在体外进行基因操作。理想的基因疗法还必须是：1 .外源基因可以有效地导入靶细胞；2.外源基因能在靶细胞中长时间稳定存在；4.导入基因的方法和载体对宿主细胞安全无害。11。腺病毒模式。12。缺失第二代腺病毒载体(E1区和部分E3区)，将人内皮抑素基因表达盒插入E1区，构建新的重组人内皮抑素腺病毒。构建新的重组人内皮抑素腺病毒，基因治疗基础，

5、严重联合免疫缺陷症的基因治疗，(3)肿瘤基因治疗的研究策略，1 .抗肿瘤细胞因子基因治疗，通过将抗肿瘤细胞因子基因转移到肿瘤细胞或机体的特定细胞中，可以持续高效地分泌这种细胞因子，达到杀伤肿瘤的目的。(例如肿瘤坏死因子)。2.改变肿瘤相关基因的功能1)恢复肿瘤抑制基因的功能最具代表性的肿瘤抑制基因是p53基因。目前，腺病毒载体携带的p53基因治疗是可行的。2)纠正癌基因的过度表达，利用反义技术如反义核酸、核酸或肽核酸以及核糖核酸干扰技术，特异性阻断基因表达，抑制某些癌基因的过度表达，从而达到治疗疾病的目的。例如使用反义癌基因治疗恶性肿瘤。3.自杀基因治疗：这种治疗方案的原理是将编码酶的基因(自

6、杀基因)转染到肿瘤细胞中。这种酶可以将药物转化为对细胞有害的物质，从而使肿瘤细胞的脱氧核糖核酸不能复制和死亡。这种药对正常细胞没有毒性作用。例如5氟胞嘧啶系统。4.耐药基因转移疗法：增强肿瘤细胞的药物敏感性，提高正常细胞对化疗药物的耐受性。将一些药物敏感基因转移到肿瘤细胞中可以提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性；相反，耐药基因治疗是修饰正常细胞，使其比肿瘤细胞对化疗药物有更强的耐受性。(4)基因治疗载体，可分为两类：病毒载体和非疾病毒性载体。1.病毒载体：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、疱疹病毒等。2.非病毒载体：裸的、阳离子脂质体、包装颗粒等。18，NIH FDA : AAV载体是基因

7、治疗最安全的病毒载体，1。非病理性，2。抑制致病病毒的复制。抑制肿瘤发生，1。AAV病毒是一种有缺陷的病毒，只能通过潜伏感染感染，不能自主复制；2.它可以整合在特定的位点，而AAV可以特异性地整合在人19号染色上，从而避免了随机整合引起的细胞突变的风险。此外，染色体整合可以使转导的基因长时间稳定表达。3.免疫原性弱，避免了病毒自身蛋白引起的免疫反应；4.被感染的宿主细胞包括静止细胞和分裂细胞。AAV载体不能插入大的外源基因，缺乏高效的包装细胞，制备过程复杂，制备效价低。病毒是基因治疗的有效载体，可以高效感染哺乳动物细胞，并在靶细胞中高效表达靶基因。目前，腺相关病毒(AAV)被认为是人类基因治疗

8、研究中最理想的病毒载体之一。与其他病毒载体相比，AAV具有以下优势：(5)肿瘤基因治疗的临床应用。肿瘤基因治疗的策略主要包括：肿瘤抑制基因替代治疗；抑制细胞表面生长因子受体的基因疗法；抗血管生成基因疗法。其中，最广泛的临床试验是用p53肿瘤抑制基因替代疗法进行的。目前，已经发现大多数恶性实体瘤含有p53突变。在临床实践中，腺病毒转入野生型p53基因可以在体内和体外抑制含p53突变癌细胞的生长。在此基础上，研究人员进行了相关的临床试验。重组人p53腺病毒注射液(现已重生)是一种广谱抗癌药物，用于治疗头颈部鳞状细胞癌和其他恶性肿瘤。这是世界上第一种由国家食品和药物管理局批准的基因治疗药物。2.安克

9、瑞(重组人5型腺病毒注射液):利用肿瘤细胞中P53基因及其通路的变异，识别并杀死肿瘤细胞。适应症：晚期鼻咽癌。3.恩多(注射剂):重组人内皮抑素注射剂，其作用机制是通过抑制形成血管的内皮细胞的迁移来抑制肿瘤新生血管的生成，并阻断肿瘤细胞的营养供应，从而达到抑制肿瘤增殖或转移的目的。目前，肿瘤基因治疗药物已在中国上市。其次，肿瘤免疫治疗旨在通过生物制剂的作用来刺激和增强机体的免疫功能或调节机体的免疫反应，从而达到治疗肿瘤的目的。目前，临床上有许多肿瘤免疫治疗的新思路，临床方法也多种多样。一些临床结果令人兴奋。尽管仍有许多问题需要解决，但积极免疫疗法和过继性细胞免疫疗法将是对抗肿瘤更有效的方法。(

10、1)肿瘤免疫理论的建立。肿瘤免疫的概念起源于上世纪初。埃利希在1909年首次提出，免疫系统不仅负责抵御微生物的入侵，还能从体内清除已改变的宿主成分。并直接提出了肿瘤细胞免疫的概念。从那以后，人们意识到癌细胞是变化的宿主成分。上世纪末，传染病病原体的发现和疫苗接种可以诱导免疫系统对疾病产生保护作用，这对医学研究产生了深远的影响。正是在这些理论和原则的背景下，最初的理论出现了，提出了抗肿瘤保护性免疫反应的存在以及诱导和扩大这种反应的可能性。20世纪60年代，托马斯、布尔内特和古德将这一观点系统化，提出了免疫监视理论。免疫监视理论的核心思想是免疫系统具有非常完整的监视功能，能够准确区分“自我”和“非

11、自我”的成分；它不仅能清除外界入侵的各种微生物和排斥同种异体移植物，还能消除体内突变细胞，防止肿瘤生长，保护身体健康。每当免疫监视功能由于这样或那样的原因被削弱时，它就为肿瘤的发生提供了有利的条件；如果人体不具备免疫监视功能，人类肿瘤的发病率将会大大增加。(2)肿瘤免疫治疗方法，1)细胞因子疗法(il-2、IFN-、il-12、TNF-a)；2.生物分子靶向药物：1)利妥昔单抗是一种嵌合鼠/人单克隆抗体，与细胞膜CD20抗原结合。如果它与B细胞上的CD20抗原结合，它可以触发B细胞的裂解反应。适用于复发或化疗耐药的B淋巴细胞非霍奇金淋巴瘤患者。2)抗人表皮生长因子(C225)单克隆抗体西妥昔单

12、抗是一种IgG1单克隆抗体，是一种EGFR抑制剂，通过干扰肿瘤细胞表面EGFR蛋白的生长达到抗肿瘤的目的。目前用于治疗晚期结肠癌。26，3)抗血管内皮生长因子配体单克隆抗体(Avastin):研究发现，血管内皮生长因子在多种肿瘤中过度表达，如脑肿瘤、肺癌、乳腺癌、消化道肿瘤和泌尿道肿瘤。阿瓦斯丁通过抑制血管内皮生长因子的生物活性和减少新血管的形成来抑制肿瘤的生长和转移。阿瓦斯丁适用于以5FU为基础的化疗联合一线治疗转移性结直肠癌。4) EGFR酪氨酸激酶抑制剂；吉非替尼是表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶的选择性抑制剂，通常在源自上皮细胞的实体瘤中表达。适用于接受化疗的局部晚期或转移性非小

13、细胞肺癌。5)表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂特鲁克：它也是EGFR酪氨酸激酶结构磷酸化的阻断剂。研究表明，40.85%的非小细胞肺癌患者为EGFR阳性，其机制与易瑞沙相似，易瑞沙抑制肿瘤细胞中过表达的EGFR酪氨酸激酶结构的活性，达到治疗肿瘤的目的。索拉非尼是首个口服聚激酶抑制剂，靶向肿瘤细胞和血管上的丝氨酸和/或苏氨酸和受体酪氨酸激酶，阻断信号转导并抑制肿瘤生长。2005年底，它被美国食品和药物管理局批准用于治疗晚期肾细胞癌和转移性或晚期肝细胞癌。7)舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib，sutent)是一种能够抑制多种受体酪氨酸激酶的小分子，其中一些涉及肿瘤生长、病理性血管生成和肿瘤转

14、移。2006年1月，美国食品和药物管理局批准舒尼替尼治疗胃肠道间质瘤和不能手术的转移性肾细胞癌(MRCC)。3.肿瘤疫苗疗法。肿瘤疫苗疗法是通过使用肿瘤细胞抗原或相应的核酸来治疗肿瘤的方法。它主要包括以下类型：(1)转基因肿瘤疫苗；(2)热休克蛋白疫苗；(3)肿瘤抗原肽疫苗；(4)核酸疫苗；(5)树突状细胞(DC)疫苗(6)DC/肿瘤融合细胞疫苗；(7)抗7)CA125独特型抗体的ACA125疫苗；(8)预防宫颈癌的人乳头瘤病毒疫苗。来源于骨髓前体细胞的树突细胞(DC)在体内具有最强的抗原呈递能力，比普通抗原呈递细胞强1000倍。在捕获体内外的抗原后，DC可以将信息传递给T淋巴细胞和B淋巴细胞，从而引发一系列特异性免疫反应。然而，人体内这种细胞的含量极低，约占正常人白细胞的1%。近年来，利用细胞因子在体外成功培养了大量树突状细胞，为进一步研究其功能和分化状况及其在肿瘤生物治疗中的应用创造了条件。它因其长树突状突起和星状多形性而得名。(1)树突细胞疫苗。三十岁。树突状细胞(DC)是最强大的抗原提呈细胞，发挥着重要的抗肿瘤功能。DC肿瘤抗原摄取诱导CTLs特异性杀伤肿瘤细胞。2010年4月29日，美国食品和药物管理局批准普罗旺斯(Sipuloucel-T)作为一种免疫活性细胞，用于治疗晚期前列腺癌患者，其使用一种在前列腺癌组织中高度表达的抗