食品安全国家标准食品中乙酰丙酸的测定征求意见稿

1、食品安全国家标准食品中乙酰丙酸的测定（征求意见稿）201x-xx-xx实施201x-xx-xx发布中华人民共和国卫生部 发布1.1.1.1 2010-06-01实施2010-发布 前 言本标准代替sb/t10417-2007酱油中乙酰丙酸的测定方法。本标准与sb/t10417-2007相比，主要变化如下： 对标准的适用范围进行了修改，将酱油中乙酰丙酸的测定扩展到了不同食品类型。增加了不同类型食品试样的前处理方法。食品安全国家标准食品中乙酰丙酸的测定方法1 范围本标准规定了用气相色谱法测定食品中乙酰丙酸的方法。本标准适用于食品中乙酰丙酸的测定。第一法 内标法2 原理样品经酸化后，用乙醚提取乙酰丙

2、酸，以正庚酸作为内标物，用具有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行测定，以内标法进行定量。3 试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，所用水为gb/t 6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 无水硫酸钠：650下灼烧4h，贮于密闭容器中备用。3.1.2 无水乙醚。3.1.3 浓盐酸。3.1.4 氯化钠。3.1.5 乙酸乙酯: 色谱纯。3.2 试剂配制3.2.1 饱和氯化钠溶液：称取58.50 g氯化钠于500毫升烧杯中，加入约300 ml蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其完全溶解，将烧杯中溶液用玻璃棒引流转移到1000 ml容量瓶中，用适量蒸馏水洗涤烧杯内壁2到3次，将其一并转入容量瓶

3、中，加水定容。3.3 标准品3.3.1 标准品正庚酸：色谱纯，纯度99.5%。3.3.2 标准品乙酰丙酸：色谱纯，纯度98%。3.4 标准溶液配制3.4.1 正庚酸标准储备液(0.0050 g/ml)：称取0.50 g正庚酸标准品（精确至0.0001g），用乙酸乙酯定容至100 ml。3.4.2 乙酰丙酸标准储备液(0.0050g/ml)：称取0.50g乙酰丙酸标准品（精确至0.0001g），用乙酸乙酯定容至100ml。3.4.3 乙酰丙酸标准系列工作液：分别准确吸取乙酰丙酸标准储备液0.05 ml、0.1 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml于6个10 ml容量瓶中，

4、各加入1.0 ml正庚酸标准储备液，用乙酸乙酯定容，即得标准系列工作液，相当于每毫升含25 g、50 g、250 g、500 g、750 g、1000 g的乙酰丙酸。4 仪器和设备4.1 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（fid）。4.2 分析天平：分度值为0.01 g和0.0001 g。4.3 浓缩设备（水浴、旋转蒸发仪或氮吹仪）。5 分析步骤5.1 试样制备 5.1.1 液体试样制备准确称取5.0 g试样于100ml具塞试管中，加入10ml的饱和氯化钠溶液、1.0 ml的正庚酸标准储备液、3.0 ml的浓盐酸，充分振摇1 min后，加入50.0 ml无水乙醚，振摇萃取3 min5 min

5、，静置约10 min15 min。待分层后，吸取上层乙醚萃取液于250 ml圆底烧瓶中，再重复萃取两次，合并乙醚萃取液，用10 ml饱和氯化钠溶液洗涤两次，弃去下层。乙醚层用过量无水硫酸钠脱水，在45 左右浓缩至近干，残液用乙酸乙酯定容至10 ml，即可上机测定。5.1.2 固体试样制备 准确称取充分粉碎均匀的试样5.0 g于100 ml具塞试管中，按“加入10ml的饱和氯化钠溶液（5.1.1）”操作。5.2 气相色谱参考条件色谱柱：db-wax石英毛细管柱（30 m 0.25 mm 0.25 m）或相当型号色谱柱。进样口温度：270。检测器温度：270。升温程序：初始柱温120 ，保持1 m

6、in，以8 /min升温至230 ，保持4 min。载气：高纯氮，纯度大于99.999%，流速：1.0 ml/min。进样方式：分流进样，分流比25:1。进样体积：1 l。5.3 标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入气相色谱仪中，测定乙酰丙酸与内标物质的相应峰面积。以乙酰丙酸峰面积/内标物峰面积为纵坐标，以乙酰丙酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。乙酰丙酸的标准气相色谱图参见附录a的图1。5.4 试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱仪中，得到响应峰面积，根据标准曲线得到待测液中乙酰丙酸的浓度，平行测定次数不少于两次。5.5 空白试验用5.0 ml蒸馏水代替试样，按5.15.2的步骤做空白试验6 分

7、析结果的表述试样中乙酰丙酸的含量按公式（1）计算： （1）式中：x样品中乙酰丙酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c测定用样品中乙酰丙酸含量，单位为微克每毫升（g/ml）；v样品的定容体积，单位为毫升（ml）；m样品质量，单位为克（g）计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字（或小数点后几位）。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。8 其他方法检出限为10 mg/kg，定量限为25 mg/kg。第二法 外标法9 原理样品经酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，用配有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，以

8、外标法（标准曲线法）跟系列标准进行比较定量。10试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为gb/t 6682规定的二级水。10.1 试剂10.1.1 无水乙醚：不含过氧化物。10.1.2 无水硫酸钠：650 以下灼烧4 h，贮于密闭容器中备用。10.1.3 乙酸乙酯。10.1.4 盐酸。10.1.5 亚铁氰化钾。10.1.6 乙酸锌。10.1.7 氯化钠。10.1.8 乙酸。10.2 试剂配制10.2.1 盐酸溶液（6 mol/l）：量取50 ml浓盐酸，用水稀释至100 ml。10.2.2 亚铁氰化钾（92 g/l）：称取亚铁氰化钾106g，用水溶解于1000 ml容量瓶中，

9、定容至刻度后混匀。10.2.3 乙酸锌溶液（183 g/l）：称取乙酸锌219g，加入32 ml乙酸，用水溶解于1000 ml容量瓶中，定容到刻度后混匀。10.3 标准品10.3.1 乙酰丙酸：纯度99.5%。10.4 标准溶液配制10.4.1 乙酰丙酸标准储备溶液：准确称取0.5000 g乙酰丙酸，用乙酸乙酯溶解于100 ml容量瓶中，定容至刻度后混匀。此溶液每毫升含5.0 mg乙酰丙酸，冷藏于冰箱中，有效期2个月。10.4.2 乙酰丙酸标准系列工作液：分别准确吸取乙酰丙酸标准储备溶液0.05 ml、0.1 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml于6个10 ml容量瓶中

10、，用乙酸乙酯定容至刻度后混匀。此标准系列工作液相当于每毫升含25 g、50 g、250 g、500 g、750 g、1000 g的乙酰丙酸。11仪器和设备11.1 气相色谱仪，配有氢火焰离子化检测器（fid）。11.2 分析天平：分度值为0.01 g和0.0001 g。11.3 浓缩设备（水浴、旋转蒸发仪或氮吹仪）。12分析步骤12.1 试样制备12.1.1 液体试样称取充分均匀的试样5.0 g（精确至0.001 g），加入盐酸溶液1ml，充分震摇均匀，再加入25 ml无水乙醚，震摇萃取1 min，静置分层（如有必要时盐析或于4000 r/min离心5 min），吸取乙醚层，再用乙醚重复萃取二

11、次，每次20 ml，合并乙醚提取液经无水硫酸钠过滤，将滤液浓缩至干，用乙酸乙酯定容至5.0 ml，待气相色谱进样检测。对于含蛋白质的液态试样，称取充分均匀的试样5.0g（精确至0.001g），加入1 ml亚铁氰化钾溶液和1 ml乙酸锌溶液，摇匀，以沉淀蛋白质。按6.1.1“加入1 ml盐酸溶液”操作。12.1.2 固体试样取1份均匀试样用组织捣碎机打碎，称取充分均匀的试样5.0g（精确至0.001g），加入2.0 g氯化钠，加入1 ml盐酸溶液，加入25 ml乙醚，超声波提取10 min，以3000 r/min离心10 min，上清液移出另放，残渣中加入20 ml乙醚重复提取二次，合并乙醚提取

12、液经无水硫酸钠过滤，将滤液浓缩至干，用乙酸乙酯定容至5.0 ml，待气相色谱进样检测。12.2 仪器参考条件色谱柱：db-ffap石英毛细管柱（30 m 0.25 mm 0.25 m）或相当型号色谱柱。进样口温度：260 。检测器温度：280 。升温程序：初始柱温60 ，保持1 min，以18 /min升温至200 ，保持1 min，再以10 /min升温至230 ，保持12 min。载气：氮气，流速1 ml/min进样方式：分流进样，分流比25:1进样量：1 l。12.3 标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入气相色谱仪中，测定相应的响应峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以响应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。12.4 试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱仪中，得到响应峰面积，根据标准曲线得到待测液中乙酰丙酸的浓度，平行测定次数不少于两次。13 分析结果的表述试样中乙酰丙酸含量按公式（2）计算： （2）式中：x样品中乙酰丙酸含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c测定用样品中乙酰丙酸含量，单位为微克每毫升（g/ml）；v样品的定容体积，单位为毫升（ml）；m样品质量，单位为克（g）计算结果以重复