GB∕T 38163-2019 常见过敏蛋白的测定 液相色谱-串联质谱法

犐犆犛０７．０８０

犃４０

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犌犅／犜３８１６３—２０１９

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犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犾犾犲狉犵犲狀犻犮狆狉狅狋犲犻狀—犔犆犕犛／犕犛犿犲狋犺狅犱

２０１９１０１８??２０１９１０１８??

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前言

本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。

本标准由全国生化检测标准化技术委员会（ＳＡＣ／ＴＣ３８７）提出并归口。

本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中

心、辽宁出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

本标准主要起草人：陈颖、古淑青、邓晓军、张九凯、郑秋月、王娉、黄文胜、韩建勋。

Ⅰ

犌犅／犜３８１６３—２０１９

常见过敏蛋白的测定

液相色谱串联质谱法

１范围

本标准规定了固态食品中牛奶、鸡蛋、大豆、花生、榛子、杏仁和核桃过敏蛋白的液相色谱串联质谱

检测方法。

本标准适用于含小麦粉、燕麦粉、腰果、可可粉等固态食品基质中牛奶、鸡蛋、大豆、花生、榛子、杏仁

和核桃过敏蛋白的液相色谱串联质谱测定和确证。

２规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法

３术语和定义、缩略语

３．１术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

３．１．１

特征肽犮犺犪狉犪犮狋犲狉犻狊狋犻犮狆犲狆狋犻犱犲

唯一在靶蛋白的胰蛋白酶消化产物中发现、其氨基酸序列具有专属性的多肽。

３．１．２

食物过敏犳狅狅犱犪犾犾犲狉犵狔

免疫机制介导的食物免疫反应不良反应，即食物蛋白引起的异常或过强的免疫反应。

注：免疫反应可由ＩｇＥ或非ＩｇＥ介导。表现为一疾病群，症状累及皮肤、呼吸、消化、心血管等系统。

３．１．３

过敏原犪犾犾犲狉犵犲狀

能够引起机体免疫系统异常反应的成分。

３．１．４

过敏蛋白犪犾犾犲狉犵犲狀狆狉狅狋犲犻狀

能够引起机体免疫系统异常反应的成分中的蛋白质。

３．１．５

肽狆犲狆狋犻犱犲

两个或两个以上的氨基酸脱水缩合形成的有机化合物。

３．１．６

胰蛋白酶狋狉狔狆狊犻狀

从动物胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶，能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，特

１

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异性较强。

３．２缩略语

下列缩略语适用于本文件。

ＤＴＴ：二硫苏糖醇（ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ）

ＩＡＡ：碘代乙酰胺（ｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅ）

ＬＣＭＳ／ＭＳ：液相色谱串联质谱法（ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）

ＭＲＭ：多反应监测（ｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）

Ｔｒｉｓ：三羟甲基氨基甲烷［ｔｒｉｓ（ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ］

４原理

利用质谱技术结合蛋白质组学软件挖掘能够鉴别区分目标食品过敏原特征肽段。通过构建的特征

肽段的质谱信息，对被测样品蛋白酶解后的多肽混合物进行定向监测，实现对食品过敏原的定性检测。

质谱中特征肽段的响应峰面积与过敏原的含量呈线性关系，将质谱响应峰面积与过敏原含量建立标准

曲线，以肽段的谱峰面积代表过敏原的实际量，通过标准曲线计算得到被测食品过敏原含量。

５主要试剂

除非有特殊说明，仅使用分析纯试剂和符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定的一级水。

５．１碳酸氢铵（ＮＨ４ＨＣＯ３）。

５．２二硫苏糖醇（Ｃ４Ｈ１０Ｏ２Ｓ２，ＤＴＴ）。

５．３碘代乙酰胺（ＩＣＨ２ＣＯＮＨ２，

ＩＡＡ）。

５．４三羟甲基氨基甲烷（Ｃ４Ｈ１１ＮＯ３，Ｔｒｉｓ）。

５．５盐酸。

５．６磷酸。

５．７乙酸（ＣＨ３ＣＯＯＨ）：色谱纯。

５．８甲酸（ＨＣＯＯＨ）：色谱纯。

５．９乙腈（ＣＨ３ＣＮ）：色谱纯。

５．１０碳酸氢铵溶液（５００ｍｍｏｌ

／Ｌ）：称取３．９５ｇ碳酸氢铵，用水溶解后定容至１００ｍＬ。

５．１１碳酸氢铵溶液（５０ｍｍｏｌ

／Ｌ）：称取３．９５ｇ碳酸氢铵，用水溶解后定容至１０００ｍＬ。

５．１２二硫苏糖醇（５００ｍｍｏｌ

／Ｌ）：称取０．７７１ｇ二硫苏糖醇，用５００ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸氢铵溶液溶解后定容

至１０ｍＬ。４℃冷藏可保存一个月。

５．１３碘代乙酰胺溶液（５００ｍｍｏｌ

／Ｌ）：称取０．９２５ｇ碘代乙酰胺，用５００ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸氢铵溶液溶解后

定容至１０ｍＬ。４℃避光冷藏保存一个月。

５．１４ＴｒｉｓＨＣｌ溶液（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）：称取２．４２ｇＴｒｉｓ，溶解于８００ｍＬ水中，用１０％盐酸调节

ｐＨ

至

８．０±０．１，用水定容至１０００ｍＬ。

５．１５考马斯亮蓝试剂：称取１００ｍｇ考马斯亮蓝Ｇ２５０溶于５０ｍＬ９５％乙醇，

加入１００ｍＬ８５％的磷

酸，用蒸馏水补充至２００ｍＬ。

５．１６甲酸的水溶液（０．１％，体积分数）：

准确移取１．０ｍＬ甲酸，用水定容至１０００ｍＬ。

５．１７甲酸的乙腈溶液（０．１％，体积分数）：

准确移取１．０ｍＬ甲酸，用乙腈定容至１０００ｍＬ。

５．１８胰蛋白酶溶液：１００

μｇ

胰蛋白酶（活力大于４０００Ｕ／

ｍｇ

蛋白质），用１００μＬ１％乙酸溶液溶解。

溶液于－２０℃可保存６个月。

２

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６主要仪器设备

６．１液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子（

ＥＳＩ）源的三重四级杆质谱仪。

６．２分析天平：感量为０．０１ｇ、

０．００１ｇ、０．１ｇ。

６．３恒温水浴锅。

６．４离心机：转速不低于２６８３犵。

６．５超滤离心管（１０ｋＤ截止膜）。

６．６注射器和０．２２μｍ水系滤膜（

聚醚砜滤膜）。

６．７涡旋混匀仪。

６．８ｐＨ计：测量精度为０．０１。

６．９微量移液器：０．５μＬ～１０μＬ，

１０μＬ～１００μＬ，２０μＬ～２００μＬ，２００μＬ～１０００μＬ。

６．１０组织研磨器。

６．１１具塞离心管。

６．１２旋转蒸发仪。

６．１３分光光度计。

７．１试样制备

７．１标准工作液制备

７．１．１过敏原标准品：榛子、核桃、杏仁、大豆、

花生、全脂奶粉和全蛋粉，或等效商业化标准品。

７．１．２食品基质标准品：小麦粉（饼干基质）、

腰果（坚果基质）、燕麦粉（早餐谷物基质）、可可粉（巧克力

基质）（以上基质均无７．１．１中提到的７种过敏原），或等效商业化标准品。

７．１．３样品制备：称取每种过敏原标准品和食品基质标准品５００ｇ±０．１ｇ，

采用粉碎机粉碎后，再将其

研磨成细粉状，过５０目筛，装入洁净盛样容器内，密封并标明标记，备用。

７．１．４标准储备液：分别准确称取１ｇ（±０．００５ｇ）（

精确至０．００１ｇ）过敏原标准品和食品基质（７种过敏

原分别配制４种基质），充分混匀后加入ＴｒｉｓＨＣｌ溶液，定容至２０ｍＬ。震荡均匀使试样完全溶解，置

于水浴锅６０℃加热振荡提取３ｈ。提取液以１３８００犵高速离心５ｍｉｎ，上清液过低蛋白质吸附的

０．２２μｍ聚醚砜滤膜后，用Ｂｒａｄｆｏｒｄ方法（考马斯亮蓝法）测定提取液中总蛋白的浓度，总蛋白浓度在

０．０５ｇ／ｍＬ以上视为有效提取，储备液置于－２０℃冰箱内保存备用。

７．１．５系列标准溶液：准确移取适量的标准储备液，

用含不同基质的ＴｒｉｓＨＣｌ溶液配制成最终浓度为

含全脂奶粉总蛋白０．２５ｍｇ／Ｌ、０．５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、１０ｍｇ／Ｌ、５０ｍｇ／Ｌ、１００ｍｇ／Ｌ（相当于过敏

原质量分数２．５ｍｇ／

ｋｇ

、５ｍｇ／

ｋｇ

、１０ｍｇ／

ｋｇ

、２０ｍｇ／

ｋｇ

、１００ｍｇ／

ｋｇ

、５００ｍｇ／

ｋｇ

、１０００ｍｇ／

ｋｇ

），花生、

榛子、杏仁、大豆、鸡蛋、核桃总蛋白０．５ｍｇ／Ｌ、１ｍｇ／Ｌ、２ｍｇ／Ｌ、４ｍｇ／Ｌ、２０ｍｇ／Ｌ、８０ｍｇ／Ｌ、１６０ｍｇ／Ｌ

（相当于过敏原质量分数５ｍｇ／

ｋｇ

、１０ｍｇ／

ｋｇ

、２０ｍｇ／

ｋｇ

、４０ｍｇ／

ｋｇ

、２００ｍｇ／

ｋｇ

、８００ｍｇ／

ｋｇ

、１６００ｍｇ／

ｋｇ

）的系列标准工作溶液。

７．２试样保存

试样与蛋白提取液均在－２０℃冰箱保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留

物含量的变化。

３

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８分析步骤

８．１蛋白提取与纯化

称取混合均匀的试样约２ｇ（±０．００５ｇ）（精确至０．００１ｇ），于５０ｍＬ具塞塑料离心管中，加入

２０ｍＬＴｒｉｓＨＣｌ溶液，振荡均匀使试样完全溶解，置于水浴锅６０℃加热振荡提取３ｈ。提取液以

１３８００犵高速离心５ｍｉｎ，取上清液过低蛋白质吸附的０．２２μｍ聚醚砜滤膜，用Ｂｒａｄｆｏｒｄ法（考马斯亮

蓝法）测定提取液中总蛋白的浓度。

准确移取上述蛋白粗提液２００μＬ加入超滤离心管（１０ｋＤ）中，以１３８００犵高速离心１５ｍｉｎ，超滤

去除小分子杂质；向超滤离心管中加入１００μＬ５００ｍｍｏｌ／Ｌ的碳酸氢铵，润洗超滤膜，以１３８００犵高速

离心１５ｍｉｎ至膜上完全无液体残留，重复３次。准确移取２００μＬ５００ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸氢铵溶液复溶膜上

的截留蛋白，涡旋超滤离心管。

８．２烷基化与酶解

移取１５０μＬ５００ｍｍｏｌ／Ｌ碳酸氢铵溶液、１０μＬ二硫苏糖醇溶液加入上述超滤管样品溶液中，混匀

后置７５℃下恒温水浴３０ｍｉｎ；冷却至室温，加入３０μＬ碘代乙酰胺溶液，暗处静置３０ｍｉｎ。１３８００犵

高速离心３０ｍｉｎ至膜上干燥无液体残留。

移取５０ｍｍｏｌ／Ｌ的碳酸氢铵溶液２００μＬ至超滤离心膜上，涡旋后１３８００犵高速离心１５ｍｉｎ，超

滤去除反应剩余碘代乙酰胺等杂质，离心至膜上无液体残留，弃掉收集管中的废液，并加入超纯水清洗。

在超滤膜上加入１００μＬ５０ｍｍｏｌ／Ｌ的碳酸氢铵溶液，并加入４μＬ胰蛋白酶乙酸溶液，充分混匀后置

于３７℃恒温水浴中酶解４ｈ。将超滤管进行１３８００犵高速离心３０ｍｉｎ，至膜上干燥无液体残留，加入

１００μＬ５０ｍｍｏｌ／Ｌ的碳酸氢铵溶液，涡旋后１３８００犵高速离心１５ｍｉｎ，重复３次。合并收集管中的膜

上酶切肽段，放入真空旋转蒸发仪中离心旋干。

准确移取流动相Ａ甲酸水溶液（０．１％，体积分数）１００μＬ复溶干燥后的肽段，涡旋后１３８００犵高速

离心１５ｍｉｎ。移取上清液１００μＬ于进样瓶中，供液相色谱串联质谱仪检测。

８．３仪器参考条件

８．３．１液相色谱条件：

ａ）色谱柱：Ｃ１８柱，１５０ｍｍ×４．６ｍｍ（内径），填料粒径３．５μｍ，孔径３０ｎｍ（３００?）或性能相

当者；

ｂ）柱温：４０℃；

ｃ）流动相：Ａ：体积分数为０．１％的甲酸水溶液，Ｂ：体积分数为０．１％的甲酸乙腈溶液，梯度洗脱

见表１；

ｄ）流速：０．４ｍＬ／ｍｉｎ；

ｅ）进样量：１０μＬ。

表１梯度洗脱程序

时间／ｍｉｎ流动相Ａ／％流动相Ｂ／％

０．００９７．０３．０

１．００９７．０３．０

１０．００７０．０３０．０

４

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表１（续）

时间／ｍｉｎ流动相Ａ／％流动相Ｂ／％

１３．００４５．０５５．０

１３．１０２０．０８０．０

１６．００２０．０８０．０

１６．１０９７．０３．０

２０．００９７．０３．０

８．３．２质谱条件（不同品牌、型号质谱仪可做相应调整）：

ａ）电离方式：电喷雾电离，正离子；

ｂ）扫描方式：多反应监测（ＭＲＭＳｃｈｅｄｕｌｅｄ）；

ｃ）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气及其他合适气体；使用前应调节各气体流量

以使质谱灵敏度达到检测要求，参考质谱条件参见附录Ａ中表Ａ．１；

ｄ）电喷雾电压：４５００Ｖ；

ｅ）离子源温度：５００℃；

ｆ）雾化器压力：０．４４８ＭＰａ（６５ｐｓｉ）；

ｇ）气帘气压力：０．２４１ＭＰａ（３５ｐｓｉ）。

８．４空白试验

样品前处理时，除不加试样外，均按以上操作步骤进行。

８．５定性测定

在相同使用条件下，按照液相色谱串联质谱条件测定全脂奶粉、花生、榛子、杏仁、大豆、鸡蛋、核桃

的标准工作溶液，同时测定样品溶液。定性时样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间

偏差在±２．５％之内；且样品中所选择的肽段定性离子均出现（附录Ａ中表Ａ．１），各组分定性离子的相

对丰度与标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表２规定的范围，则可判定

为样品中存在对应的待测物。

表２液相色谱串联质谱法定性离子相对丰度的最大允许偏差

相对丰度／％＞５０２０～５０１０～２０≤１０

允许的相对偏差／％±２０±２５±３０±５０

８．６定量测定

对标准工作溶液进样，每种过敏原选择一种丰度较高、线性关系较好的肽段，外标法通过标准曲线

进行定量，平行测定３次。标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。标准品

提取离子色谱图（ＸＩＣ）参见附录Ｂ中图Ｂ．１～图Ｂ．１４。

９结果计算和表述

以定量离子的响应峰面积对相应的过敏原含量作图，试样中过敏原的含量按标准曲线所得结果计

５

犌犅／犜３８１６３—２０１９

算得到。各基质中各过敏原的含量按照式（１）进行计算：

犡＝犢－犅

犃

……（１）

式中：

犡———过敏原的含量，单位为毫克每千克（

ｍｇ

／

ｋｇ

）；

犢———定量离子对的响应峰面积；

犅———标准曲线的截距；

犃———标准曲线的斜率。

１０精密度

在重复性条件下，获得的三次独立测定结果差值的绝对值，不得超过其算术平均值的１５％。

１１检出限、定量限和回收率

１１．１检出限和定量限

本方法牛奶过敏原的检出限为１ｍｇ／

ｋｇ

，定量限为５ｍｇ／

ｋｇ

；鸡蛋、大豆、花生、榛子、杏仁、核桃的

检出限为２．５ｍｇ／

ｋｇ

，定量限为１０ｍｇ／

ｋｇ

。不同基质中的定量标准曲线及线性范围参见附录Ｃ中

表Ｃ．１。

１１．２回收率

不同基质中添加浓度水平各待测过敏原的回收率范围参见附录Ｄ中表Ｄ．１。

６

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附录犃

（资料性附录）

过敏蛋白特征肽段及其主要参考质谱参数

１４种过敏蛋白特征肽段及其主要参考质谱参数参见表Ａ．１。

表犃．１１４种过敏蛋白特征肽段及其主要参考质谱参数

过敏原过敏蛋白特征肽段＃母离子犿／狕子离子犿／狕

保留时间

ｍｉｎ

去簇电压

Ｖ

碰撞能量

ｅＶ

牛奶

αＳ１ｃａｓｅｉｎＦＦＶＡＰＦＰＥＶＦＧＫ

αＳ２ｃａｓｅｉｎＮＡＶＰＩＴＰＴＬＮＲ

βｃａｓｅｉｎ

ＡＶＰＹＰＱＲ

κｃａｓｅｉｎＳＰＡＱＩＬＱＷＱＶＬＳＮＴＶＰＡＫ

６９２．９（２＋）９２０．５（＋）１６．２４５２９

６９２．９（２＋）９９１．５（＋）１６．２４５２６

５９８．３（３＋）９１１．５（＋）１２．３５０２５

５９８．３（３＋）７０１．４（＋）１２．３５０３４

４１５．７（２＋）４００．２（＋）５．７３４０２５

４１５．７（２＋）６６０．３（＋）５．７３４０２０

６６０．７（３＋）３１５．２（＋）１０．８５６５２４

６６０．７（３＋）８２９．５（＋）１０．８５６５２７

鸡蛋ｏｖａｌｂｕｍｉｎＧＧＬＥＰＩＮＦＱＴＡＡＤＱＡＲ

８４４．４（２＋）１１２１．５（＋）１３．５７０４５

８４４．４（２＋）１００７．５（＋）１３．５７０４８

大豆

ＧｌｙｃｉｎｉｎＧ１ＶＬＩＶＰＱＮＦＶＶＡＡＲ

βｃｏｎｇｌｙｃｉｎｉｎ

βｃｈａｉｎ

ＴＩＳＳＥＤＫＰＦＮＬＲ

βｃｏｎｇｌｙｃｉｎｉｎ

αｃｈａｉｎ

ＱＱＱＥＥＱＰＬＥＶＲ

７１３．４（２＋）５０１．３（＋）１５．２５０３０

７１３．４（２＋）１００１．６（＋）１５．２４０３０

７０４．３（２＋）１１９３．５（＋）１４５０３３

７０４．３（２＋）６４６．４（＋）１４５０３６

６９２．３（２＋）１１２７．６（＋）１１５０３０

６９２．３（２＋）８７０．５（＋）１１５０３０

花生

Ａｒａｈ１ＧＴＧＮＬＥＬＶＡＶＲ

Ａｒａｈ３／４ＲＰＦＹＳＮＡＰＱＥＩＦＩＱＱＧＲ

５６４．８（２＋）６８６．４（＋）１３．２６０２９

５６４．８（２＋）５５７．４（＋）１３．２６０３０

６８４．４（３＋）７４８．４（＋）１３．９５０２５

６８４．４（３＋）６０１．３（＋）１３．９５０２８

榛子Ｃｏｒａ９ＡＤＩＹＴＥＱＶＧＲ

５７６．３（２＋）８５２．４（＋）１０．８４０３０

５７６．３（２＋）６８９．４（＋）１０．８４０２７

杏仁

Ｐｒｕｄｕ１ＧＮＬＤＦＶＱＰＰＲ

Ｐｒｕｄｕ２ＡＤＦＹＮＰＱＧＧＲ

５７１．８（２＋）８５８．４（＋）１２．９５０２７

５７１．８（２＋）４９７．３（＋）１２．９５０２４

５６２．８（２＋）５１４．３（＋）１０．９４０２８

５６２．８（２＋）６２８．３（＋）１０．９４０２５

核桃Ｊｕｇｒ２ＶＦＳＮＤＩＬＶＡＡＬＮＴＰＲ

５４４（３＋）７４２．４（＋）１５．６５０２４

５４４（３＋）６７１．４（＋）１５．６５０２２

＃定性时，每种过敏原的所有特征肽段同时出现视为“检出”。

为定量离子对。

７

犌犅／犜３８１６３—２０１９

附录犅

（资料性附录）

不同过敏原特征肽段定性检测提取离子色谱（犡犐犆）图

犅．１牛奶四种主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．１～图Ｂ．４）

图犅．１α犛１犮犪狊犲犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

图犅．２α犛２犮犪狊犲犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

图犅．３β犮犪狊犲犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

８

犌犅／犜３８１６３—２０１９

图犅．３（续）

图犅．４κ犮犪狊犲犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

９

犌犅／犜３８１６３—２０１９

犅．２大豆三种主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．５～图Ｂ．７）

图犅．５犌犾狔犮犻狀犻狀犌１蛋白定性检测犡犐犆图

图犅．６β犮狅狀犵犾狔犮犻狀犻狀β犮犺犪犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

图犅．７β犮狅狀犵犾狔犮犻狀犻狀α犮犺犪犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

０１

犌犅／犜３８１６３—２０１９

犅．３花生两种主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．８～图Ｂ．９）

图犅．８犃狉犪犺１蛋白定性检测犡犐犆图

图犅．９犃狉犪犺３／４蛋白定性检测犡犐犆图

犅．４榛子主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．１０）

图犅．１０犆狅狉犪９蛋白定性检测犡犐犆图

１１

犌犅／犜３８１６３—２０１９

犅．５杏仁两种主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．１１～图Ｂ．１２）

图犅．１１犘狉狌犱狌１蛋白定性检测犡犐犆图

图犅．１２犘狉狌犱狌２蛋白定性检测犡犐犆图

犅．６核桃主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．１３）

图犅．１３犑狌犵狉２蛋白定性检测犡犐犆图

２１

犌犅／犜３８１６３—２０１９

犅．７鸡蛋主要过敏原特征肽段定性检测犡犐犆图（

见图Ｂ．１４）

图犅．１４狅狏犪犾犫狌犿犻狀蛋白定性检测犡犐犆图

３１

犌犅／犜３８１６３—２０１９

附录犆

（资料性附录）

过敏原特征肽段在不同基质中定量标准曲线

７种过敏原特征肽段在不同基质中定量标准曲线参见表Ｃ．１。

表犆．１７种过敏原特征肽段在不同基质中定量标准曲线

过敏原过敏蛋白定量肽段序列

线性范围

ｍｇ

／

ｋｇ

基质标准曲线犚２（狀＝３）

牛奶αＳ２ｃａｓｅｉｎＮＡＶＰＩＴＰＴＬＮＲ５～１０００

饼干

狔＝１０６２．２狓－２０１６７０．９２２４

早餐谷物

狔＝１９７３．８狓＋４１１１．３０．９９８５

坚果

狔＝８３３．６７狓－１４９２．７０．９９９８

巧克力

狔＝３６６７．９狓＋１４２２９０．９９９９

鸡蛋ｏｖａｌｂｕｍｉｎＧＧＬＥＰＩＮＦＱＴＡＡＤＱＡＲ１０～１６００

饼干

狔＝５１７．２４狓－８５３．４９０．９９９７

早餐谷物

狔＝４４５．０４狓＋１３５５０．９９９７

坚果

狔＝１６７．２４狓－８６６．６８０．９９９７

巧克力

狔＝２４４．４狓－２６０７．２０．９９８９

大豆ＧｌｙｃｉｎｉｎＧ１ＶＬＩＶＰＱＮＦＶＶＡＡＲ１０～１６００

饼干

狔＝１３９．３９狓＋２５１３．３０．９９９２

早餐谷物

狔＝１．０９０７狓＋８３０．６４０．９９７７

坚果

狔＝２５．３２７狓＋１５４２．９０．９８７０

巧克力

狔＝２８．９１３狓＋１２１５．４０．９９６９

花生Ａｒａｈ３／４ＲＰＦＹＳＮＡＰＱＥＩＦＩＱＱＧＲ１０～１６００

饼干

狔＝６３９．１狓－３０４６．７０．９９８１

早餐谷物

狔＝１３８１．８狓－９６３１００．８９６０

坚果

狔＝１１１．０６狓－３７８６０．９７８１

巧克力

狔＝２６．４０６狓－５５０．３１０．９２５１

榛子Ｃｏｒａ９ＡＤＩＹＴＥＱＶＧＲ１０～１６００

饼干

狔＝２０４．５７狓＋７８８７．６０．９９５５

早餐谷物

狔＝２１１．９９狓＋１０５４８０．９９３６

坚果

狔＝４１．８３２狓－２４４０．２０．９２２７

巧克力

狔＝８８．７９５狓＋５２６６．３０．９８５８

杏仁Ｐｒｕｄｕ１ＧＮＬＤＦＶＱＰＰＲ１０～１６００

饼干

狔＝２９７．９２狓－６９９４．４０．９９６１

早餐谷物

狔＝８８３．６９狓＋３９７３．２０．９９９７

坚果

狔＝１０４．３７狓－６５２８０．９２８６

巧克力

狔＝５０．９７４狓＋１７５５．３０．９１３６

核桃Ｊｕｇｒ２ＶＦＳＮＤＩＬＶＡＡＬＮＴＰＲ１０～１６００

饼干

狔＝３７５．０９狓＋５５８２．７０．９９６７

早餐谷物

狔＝９６７．５９狓－３８７７．９０．９９９１

坚果

狔＝１１２．６７狓－３７７４．６０．９７６７

巧克力

狔＝１３７３．１狓－３１０３８０．９９１５

４１

犌犅／犜３８１６３—２０１９

附录犇

（资料性附录）

回收率

目标过敏原在各个基质中的添加回收率参见表Ｄ．１。

表犇．１目标过敏原在各个基质中的添加回收率

过敏原蛋白名称肽段序列

添加水平

ｍｇ

／

ｋｇ

回收率

％

测定次数１测定次数２

饼干燕麦腰果巧克力饼干燕麦腰果巧克力

牛奶αＳ２ｃａｓｅｉｎＮＡＶＰＩＴＰＴＬＮＲ

１００７５．６１０６．１９７．６１０４．１１０８．５９１．０１０４．９１０５．１

２０１０７．５９０．１１０３．９９１．０１０４．３７０．１９３．４８７．２

１０１０３．３６９．４９２．５７２．２２３４．９８２．３１０９．６６９．１

鸡蛋ｏｖａｌｂｕｍｉｎＧＧＬＥＰＩＮＦＱＴＡＡＤＱＡＲ

２００１１０．１１０１．８１０３．３８９．０１２８．５１０３．０１０４．６９０．１

４０８３．９９０．７１１２．１１０９．５９７．９６９