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文档简介

1、实验二,微生物培养基的配制和灭菌,目 的 要 求,了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 了解几种灭菌方法，掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。,实 验 名 称,牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方如下： 蛋白胨 10g 牛肉膏 3gNaCl5g琼脂 15-20g蒸馏水 1000mL将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121C高压灭菌30min。最终pH7.2-7.4 特别注意要用酸或碱调整pH值,实 验 程 序,培养基的配制 分离培养微生物常用器皿的准备 培养基和玻璃器材的灭菌方法,实 验 程 序1 （培养基的配制）,培养基的种类

2、培养基的配制方法和步骤 培养基的配方及配制 无菌水的制备,蛋白胨,牛肉膏,实 验 程 序2,琼脂,NaCl,实 验 程 序2,实 验 程 序2,常用凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。琼脂在96C熔化，40C凝固。,实 验 程 序3 （培养基的配制方法和步骤）,称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。 调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 分装：注意不要污染棉塞。 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 灭菌备用：培养基灭菌后必须在370C下恒温培养24h，

3、确定无菌生长，方可使用。,实 验 程 序4,改用注射器分装,实验程序5,实验程序6,无菌水的制备,实验程序7,清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等。 包装培养皿和吸管等 注意：吸管要用全脂棉花塞入约0.5厘米，以起到过滤作用,实验程序8 （培养基和玻璃器材的灭菌方法）,加压蒸汽灭菌法 其步骤如下： 1.灭菌器内加入一定量的水，将用防水纸包扎好的物品放入其中。 2.接通电源，进行加热。 3. 排除高压锅内的冷空气，可将排气阀打开，待排出大气后关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 4.当压力达15bl/in2（即1.05kg/cm2）时，此时灭菌器内的温度为1210C，维持30min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等物时，应适当降低压力，延长时间。 5.灭菌时间一到，切断电源

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