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文档简介

1、磁珠式核酸提取体系,核酸提取的总体要求,高质量：纯度高并且尽可能不破坏核酸 高产量：样本量一定时尽可能提取多的核酸 高通量：同时提取多个标本 自动化：降低劳动量；生物科技的飞速发展，需要处理的核酸样本迅速增多，自动化提取核酸成为一种迫切需要的选择。,磁粒法核酸提取的特点,步骤： 裂解核酸结合洗涤洗脱 特点： 提取时间短 不使用酚、氯仿 用磁分离替代离心分离易于自动化，可以实现高通量提取 目前处于市场发育阶段，是未来发展的方向 主要产品为国外产品：Promega、Roche、KingFisher、Dynal等，大多需要与专用仪器配套,各种提取方式操作比较,磁粒法核酸提取基本步骤,裂解细胞或病毒颗

2、粒 核酸与磁粒结合 磁分离弃上清 洗涤缓冲液洗涤磁粒 磁分离弃上清 洗脱液将核酸从磁粒洗脱 磁分离弃磁粒，收集上清,磁粒法提取核酸示意图,磁粒提取试剂操作方式,磁架 磁笔 自动提取仪,裂解,结合,磁分离,吸去废液,洗涤,洗脱,磁架提取核酸示意图,裂解,结合,转移磁粒,洗涤,洗脱,转移磁粒,磁笔提取核酸示意图,自动仪器提取,自动提取的原理与磁笔提取相同，只是用机器的运转代替手工操作，实现高通量提取和减少工作量。,磁珠提取方法的优化,裂解：裂解液配方，作用时间和温度等 结合：结合液的选择和用量等 洗涤：洗涤液配方等 洗脱：洗脱时间和温度等,主要实验结果,与其他方法或类似商业化试剂盒的比较 核酸提取

3、的灵敏度： HCV RNA，HIV RNA，HBV DNA,与Qiagen 磁珠式核酸提取试剂盒的比较,HCV RNA提取比较,HBV DNA提取比较,提取灵敏度实验,阳性样本梯度稀释 国家灵敏度参考品,HCV RNA提取,HCV阳性样本10倍稀释梯度：100,10-1,10-2,10-3,10-4,磁珠提取与柱提取法比较（数据见下页）,磁珠提取方法与柱提取法及水溶液梯度稀释样本比较,磁珠提取与柱提法的提取效果相当。在低浓度样本提取方面，荧光增量与稀释组无显著差异，此方法在去除样本中抑制物方面效果良好。,HCV RNA国家标准品检测,10份阳性参考品: P1P10,HIV RNA提取,HIV阳性样本梯度稀释成1/5，1/25，1/50，1/100和1/200 五个浓度，提取RNA，原样本提取后用TE按相同比例稀释 ，上机比较。,HIV 样本稀释梯度： 1/5，1/25，1/50，1/100和1/200,HIV核酸国家参考品检测,HIV RNA灵敏度和定量参考品：B2B5（至少检出B2-B3）,HIV RNA线性参考品：A2A5。,HIV RNA荧光定量标准曲线, 线形相关系数:0.9907,HIV 阳性参考品:P1, P2, P3, P5, P7, P8,HIV阳性参考品检测,中检所HBV核酸

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