微生物检验14.ppt

1、棒状杆菌属,棒状杆菌属是一群革兰染色阳性杆菌，菌体形态特征是在其一端或两端常呈棒状膨大，故名，归属放线菌科。,棒状杆菌属概述,棒状杆菌属种类繁多， 主要有： 白喉棒状杆菌（C.diphtheriae） 假白喉棒状杆菌（C.pseudodiphtheriticum） 干燥棒状杆菌（C.xerosis） 化脓棒状杆菌（C.pyogenes） 溃疡棒状杆菌（C.ulcerans） 假结核棒状杆菌（C.pseudotuberculosis） 溶血棒状杆菌（C.haemolyticum） J-K群棒状杆菌（C.jeikeium-CDC group JK）,G+杆菌、一端或两端膨大成棒状 染色不均匀，两端

2、浓染或有异染颗粒 无鞭毛、无芽胞 排列不规则，呈栅栏状 白喉棒状杆菌致病菌 类白喉棒状杆菌条件致病菌,第一节 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae,致病物质 (一)白喉外毒素 毒力强，130ng/kg可使人死亡 抗原性强 编码外毒素的tox基因-棒状杆菌噬菌体,一、临床意义,作用机制： A亚单位可使细胞延伸因子-2（EF-2）灭活，影响蛋白质的合成 作用特点： 毒性作用大，1分子能杀一个细胞 作用于多种细胞，心肌、神经细胞均有毒素受体 肿瘤细胞对此毒素敏感,（二）索状因子 细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的呼吸与磷酸化 （三）K抗原 -细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 -抗吞噬

3、 -有利于细菌在黏膜表面的定植,所致疾病：白喉-急性呼吸道传染病,传染源：患者及带菌者 传播途径：飞沫或污染 临床表现 细菌-上呼吸道粘膜， 生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症： 炎性渗出，坏死，纤维蛋白 假膜窒息 毒素血液全身中毒症状 外周N-N炎：膈肌麻痹-呼吸困难 声带麻痹-声音嘶哑 软颌麻痹-吞咽困难 心肌-心肌炎,白喉假膜,抗毒素免疫 感染后机体可获得牢固的免疫力 机体还可通过其它方式获得免疫力： 六月以下婴儿-母亲 成人-隐性感染、人工主动免疫 易感者： 15岁儿童 成人-也有可能,免疫性：,锡克试验（Schick test）（白喉外毒素皮内试验）,调查人群在感染或

4、预防接种后对白喉是否产生免疫力 根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白喉外毒素测定机体有无相应抗毒素 缺点观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测试,致敏红细胞凝集试验 测定血清中抗毒素水平 0.1ml血清，倍比稀释+外毒素致敏红细胞37、1h 敏感度可达10-4单位，简便快速,防治原则： -人工主动免疫白喉类毒素 DPT混合疫苗：白喉类毒素、百日咳菌苗、破伤风类毒素 -人工被动免疫白喉抗毒素+白喉类毒素 -治疗：抗毒素+抗生素 早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在与细胞结合以前被抗毒素中和,二、生物学特性,形态与染色: G +细长微弯的杆菌 一端或两端膨大呈棒状 常排列呈V、L、X等文字形 异染颗粒

5、形态上的鉴别特征 无荚膜、无芽胞、无鞭毛,白喉棒状杆菌异染颗粒 1000,培养特性：,需氧或兼性厌氧，最适温度3537 营养要求高，在含血液、血清、鸡蛋的培养基上生 长良好 吕氏（Loeffler)血清斜面或鸡蛋斜面： 生长最快，6h即生长，1012h长出灰白色、 湿润、有光泽的光滑型菌苔/菌落，菌体形 态典型、异染颗粒明显，连续传代可保持形 态和产毒性能不变,BAP中菌落,BAP： 菌落灰白色、光滑型、 直径12mm、有狭窄 溶血环（轻型） 多次传代后菌体变为球 型,亚碲酸钾BAP：选择鉴别培养基 黑色菌落鉴别依据 不同菌型还原能力不同，呈现黑色或灰黑色 菌落 根据菌落特征及生化反应特点可将

6、本菌分为： 重型、中间型、轻型,白喉棒状杆菌 在亚碲酸钾BAP中菌落,液体培养基： 生长较好，但菌型不同其生长特点也不相同,生化反应：,分解葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、果糖产酸不产气，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚 （-）、硝酸盐还原（+）、触酶（+）、氧化酶（-）、明胶液化（-）尿素（-） 重型能分解淀粉、糖原、糊精，迟缓分解蔗糖,抵抗力：,对干燥、寒冷和日光抵抗力较其他无芽胞细菌强，在干燥的假膜中可生存3个月 对湿热和消毒剂敏感，5%石炭酸、1：1000升汞1min，1001min、6010min均可灭菌 对青霉素、红霉素等敏感，对磺胺不敏感,三、微生物学检验,分离出白喉杆菌，并证明

7、其毒力 标本采集： 分泌物 取双份 如不能及时检验，标本浸于无菌生理盐水或15%甘油生理盐水保存,毒力试验,直接涂片染色镜检： - 23张涂片G染色、异染颗粒染色 镜检初报“直接涂片检出形似白喉杆菌”早期诊断 -用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本，3710h，涂片染色镜检提高阳性率,分离培养：,吕氏血清斜面： 37、812h 涂片染色镜检 -检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断 亚碲酸钾BAP： 37、2448h，黑色菌落 BAP： 轻型有溶血环，应注意与溶血性链球菌鉴别,鉴定：,形态染色、菌落特点、生化反应 糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原 鉴别棒状杆菌属不同的种 白喉：葡萄糖 （+）、麦芽糖 （+） 蔗糖 （-）,毒力试验（鉴定致病菌株的重要依据）,体外法： 琼脂平板毒力试验（Elek平板毒力测定） SPA协同凝集试验 对流电泳,琼脂平板毒力试验-Elek平板,对流免疫电泳,体内法 ： 用豚鼠作毒素-抗毒素中和试验,第二节 类白喉