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文档简介

1、第三章 细胞培养的必备设施、常用器材和培养基,第一节 细胞培养的必备设施,一、无菌实验室 二、净化工作台 三、恒温培养箱 四、其他设备,一、无菌实验室 有防止微生物污染和有害因素影响的措施，要求工作环境清洁，空气清新、干燥、无烟尘。无菌实验室最好单独设置，只限于进行细胞培养及其他无菌操作。无菌室通常应由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成，操作间应密闭，设置有空气消毒用的紫外线灯、空气过滤装置和恒温装置。,二、净化工作台,三、恒温培养箱,四、其他设备,第二节 细胞培养常用器材及处理方法,一、玻璃器材 清洁液浸泡或用 2%磷酸三钠或用洁消净自来水冲10次单蒸水洗2次。 培养瓶再用三蒸水浸泡过夜晾干包

2、装灭菌。 二、塑料器材 用3%HCl或2%NaOH溶液浸泡过夜（单用或交叉处理）水洗10次单蒸水2次三蒸水浸泡过夜晾干紫外线或辐照灭菌。,三、橡皮器材 5%NaOH煮水洗4%盐酸煮水洗810次单蒸水洗3次、二蒸水洗1次。 四、金属器材 纸擦去表面的油脂洗衣粉煮沸或用1%碳酸氢钠煮沸15分钟 水洗 95%酒精纱布擦干包装灭菌。 五、其他物品,第三节 常用溶液、培养液及其配制,一、平衡盐溶液 二、其他溶液 三、培养基（维持液、营养液） （一）天然培养基（组成=平衡盐液+天然动物成分） 1、血清（马、兔、鸡、小牛、新生小牛和胎牛（200300天） （1）收集与保存,（2）小牛血清对细胞的作用 提供细

3、胞增殖所必须的生长因子 （A因子促进；B、C因子对细胞有抑制生长作用；D因子促进细胞粘连）。 对细胞附壁有利。 保护作用，解除毒性物质对细胞的毒性作用，使细胞免受冻存、搅拌的损伤。 其他：利于染色体分布良好。,（3）影响血清作用的因素 年龄；血型（ABA或O）；血色素；胆红质脂肪酸；红细胞生成素；肿瘤患者血清；浓度；支原体污染。,2、水解乳蛋白（hydrolytic albumin） 乳蛋白经蛋白酶和肽酶混合物水解而得的制品，常用浓度为0.2%0.5%，用平衡盐溶液配制。0.4%浓度的水解乳蛋白经分解后几乎与人血浆中氨基酸成分相当。,3、酵母浸出液：它还含有丰富的维生素，对增加细胞的生长率特别

4、有利。常用浓度为0.1%。 4、鸡胚浸出液 5、鸡血浆 6、胰酶消化牛心肌浸液,（二）人工合成培养基（基础培养基） 1、种类：199、Eagle 、RPMI1640、HAMF12、NCT109等。 2、优点： 已知成分配制，培养条件一致。 有利于定量研究代谢成分。 可延长培养时间，节省人力、物力。 无潜在病毒污染。 便于细胞大量生产。,2、人工合成培养基的成分 人工合成培养基的主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子及其他一些辅助物质。 将合成基础培养基再添加小牛血清，就称为完全培养基。,所有培养基、洗液、缓冲液以及各种添加剂等溶液，在配制完成、投入使用前都必须进行无菌处理。能耐受高温高压者可进行高压消毒，不能耐受高温高压者可进

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