实验一光学显微镜构造及使用B.ppt

1、实验一、光学显微镜构造和使用,细胞生物学实验规则： 保持实验室和实验台面的整洁； 保持安静有序的实验秩序； 规范操作，爱护仪器设备； 不随意动用不必要的仪器设备，更不可在不懂操作规程的情况下或不按规范使用仪器设备； 实验结束后认真、完整地填写“仪器设备使用记录”，仪器运行出现异常或损坏要及时报告老师，不可私自拆装仪器； 鼓励提出实验设计或操作的改进意见； 独立完成实验报告。,OLYMPUS BX 50系统显微镜组成部分,OLYMPUS BX 50,光强预置旋钮,粗细准焦旋钮,激发模块,万能聚光镜,孔径光栏拉杆,光路合轴调中, 转动聚光镜高度升降旋钮把聚光镜升高到最高位置； 放入样品，将DIC、

2、起偏器等光学附件移出光路，聚光镜转到明场上； 用4X或10X物镜聚焦，调至清晰； 视场光阑打至最小； 通过调节聚光镜升降旋钮下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像； 通过调节聚光镜中心调节旋钮，把正多边形图像移至视场中心位置； 逐步打开视场光阑，如正多边形与视场边缘内切，则聚光镜已正确对中； 实际观察中，稍加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即可。,光路合轴调中过程,调节装置,暗视野显微镜（DFA）,开启照明光源 明场（BF）聚焦 转动万能聚光镜转盘至DFA 起偏器拉出光路 检偏器拉出光路 调节孔径光栏至可见样品 调节载物台使样品聚焦 取下目镜，观察物镜外缘，调节并对中暗场环装置； 装好目

3、镜观察暗场图像，重复对中直至获得光学暗场效果图像 上下移动聚光镜直到获得均匀的暗场照明 将视场光阑开大到获得均匀亮度的程度,暗视野光挡,相差显微镜（Ph）,开启照明光源 明场（BF）聚焦 转动万能聚光镜转盘至Ph（X），使匹配的环状光阑进入光路 选择与聚光镜相匹配的同型物镜Ph（X） 起偏器拉出光路 检偏器拉出光路 打开孔径光阑（孔径光阑太小中央可能产生眩光） 对样品聚焦，取下目镜（可换上调中望远镜,CT），调节环状光阑对中螺丝，使亮环和暗环在视场内重叠，（更换不同倍率物镜需重复调节） 取下对中望远镜，换上目镜观察（可插入绿色干涉滤色片，以增大反差）。,相差物镜,对中望远镜,万能聚光镜,视场光

4、阑调节环,简易偏光显微镜,开启照明光源 明场（BF）聚焦 起偏器推入光路 检偏器（U-ANT）推入光路 调节起偏器旋转旋钮以获得暗场（正交尼科尔位置）并固紧旋钮 调节孔径光栏与光照强度至最佳效果（关小孔径光阑可增大图像反差）,微分干涉差显微镜（DP）,开启照明光源 明场（BF）聚焦 起偏器推入光路 DIC滑座（附检偏器）推入光路，固紧螺丝 顺时针把DIC棱镜控制钮旋转到头 取下目镜可见物镜外缘，同时调节起偏器旋钮至黑色条纹最黑的位置（若为两条黑纹，起偏器旋转90，以使只可见一条黑色条纹）固紧起偏器旋钮； 目镜复位，转动万能聚光镜转盘至DP（DIC棱镜）进入光路 样品聚焦（样品要表面干净），调节

5、孔径光栏与光照强度至最佳浮雕效果（调节视场光阑与视场外切，缩小孔径光阑可增大反差） 旋转DIC调节钮可调节背景干涉色，灰色到品红色连续变化（100-600nm) 背景黑色时为类暗场效果，灰色则获得最大反差的三维图像，品红色则很小的光学延滞都可观察到颜色变化，如结合可旋转载物台则干涉差的方向灵敏性可表现出来。,起偏器 拔出状态,视场光阑调节环,检偏器 拔出状态,DIC滑行器（U-DICT），上附检偏器（U-ANT或U-AN）,棱镜控制旋钮,激发模块,紫外防护罩,汞 灯,汞灯调中检验器, 为了延长高压汞灯的使用寿命，一旦启动，不能在少于15分钟内关闭。关闭高压汞灯后，至少10分钟后才能再次启动。 转动转盘或插入滤光片时始终要停在听到卡嗒声处。如果偏离这个位置，遮光板会由于过热而变形。,荧光显微调节装置,荧光显微镜使用注意事项,1. 紫外光有害，注意保护眼、皮肤 2. 荧光弱，曝光时间长，需注意防震 3. 保护标本，避免长时间曝光对