药物分析第甾体激素类药物的分析

1、分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,肾上腺皮质激素,氢化可的松,肾上腺皮质激素,醋酸地塞米松,雄性激素,丙酸睾酮,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,孕激素,黄体酮,雌激素,炔雌醇,一、结构与性质,1. 肾上腺皮质激素,2. 雄性激素及蛋白同化激素,3. 孕激素,4. 雌激素,二、鉴别试验,（一）与强酸的呈色反应,甾体激素类药物,呈色,H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl,（母核）,(二) 官能团的反应,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐 OH,1 C17 醇酮基,还原性,A. 呈色反应,肾上腺皮质激素药物,Cu2O橙红色,碱性 酒石酸铜,B. 沉淀反

2、应,Ag黑色,氨制硝酸银,甾酮类激素药物,呈色,羰基试剂,2. C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂： 2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,异烟腙（黄色）,睾酮,黄体酮,异烟双腙（黄色）,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化纳 间二硝基酚 芳香醛,3. 甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁 氰化纳,其他甾体,淡橙色 不显色,黄体酮,蓝紫色,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,4. 有机卤素,茜素氟蓝 硝酸亚铈,硝酸硝酸银,AgCl,呈色,茜素氟蓝,蓝紫色,F-,雌激素类药物,红色偶 氮染料,重氮苯磺酸,5. 酚羟基,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,6. 乙炔基,炔雌醇,

3、白,KOH,(三) 制备衍生物测定m.p.,（四）水解产物的反应,-3-酮 240nm,苯环 280nm,（五） UV法,33003000cm-1,30002700cm-1,19001650cm-1,16501450cm-1,1000650cm-1,（六） IR法,37503300cm-1,醋酸可的松,结构特征：43酮、C17 OH C20 酮基、 C11 酮基、醋酸酯,结构特征：43酮、C17 OH C17乙炔基,炔诺酮,结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基,炔雌醇,（七） TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液

4、的主斑点相同。,（八） HPLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,三、 杂质检查,（一）其他甾体,定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”,Li/NH3 C2H5OH,弱酸,雌二醇3甲醚,苯丙酸诺龙的合成路线,I,II,强酸,苯丙酰氯,HCl,III,特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似,2. 来源 原料、中间体、异构体、降解产物,4. 方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）,（1）TLC法

5、（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色,特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。,（2）HPLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积,（二）游离磷酸,地塞米松磷酸钠 氢化可的松磷酸钠 倍他米松磷酸钠 氢化泼尼松磷酸钠,对照品法,原理：,方法：,（对照液 0.0035%KH2PO4）,（三）甲醇和丙酮,（灵敏度法）,甲醇 不得出峰 检测限= 3.1ng,丙酮 5.0% 内标法 + 校正因子,GC法,炔雌醇,（四）雌酮,原理 Zimmermann反应

6、,碱性KOH乙醇,高纯度,来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,原理,方法,四、含量测定,（一）UV法,-3-酮 240nm（）,肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素,苯环 280nm（）,雌激素,（二）反应分光光度法,1. 适用于非分光光度活性药物 2. 使待测组分光谱位移，避免干扰 3. 增加测定灵敏度 4. 增加选择性,弱、非分光光度活性药物,强分光光度活性药物,化学反应,肾上腺皮质激素类,C17 -醇酮基,强还原性,1. 原理,四氮唑比色法,O,OH-,分子重排,蓝四氮唑（BT）,双甲瓒（暗蓝）,2. 方法,ChP TTC（RT） BP TTC（RT） USP BT,对照品

7、法,3. 讨论,（1） 基团对反应速度的影响,C11= O C11OH,C21OH C21-酯,C16无论何种取代基,（2） 溶剂、水分的影响,含水量5%,含水10%A10% 含水30%几无反应, 无水乙醇,（3） O2与光线的影响,反应过程 反应产物,怕光,避光、快速,O2影响颜色强度和稳定性,隔绝空气、 快速、充N2,（4）碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75） 条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳,加入顺序：,（5） 温度与时间,t甲瓒分解%,4. 特点： 缺点 影响因素太多 优点 测定结果能指示药品 的稳定性（氧化及降 解产物无此反应）,肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素,C3酮基,1. 原理,异