组织培养课件-胚胎培养-5

1、第六章 胚胎培养和离体授粉,胚培养 胚乳培养 胚珠和子房培养,雌蕊的主要部分是子房，子房的胚珠中产生胚囊，并在成熟胚囊中产生卵细胞，胚珠是子房中的重要结构。,胚发育和种子结构,合子发育成胚,珠被发育成种皮,受精极核发育成胚乳,一、胚培养,1、含义 1.1 含义 采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 1.2 培养对象 胚胎发生过程中的不同发育时期的胚和具胚的器官。如：成熟胚、幼胚、胚珠培养、子房培养。,1.3 意义：,促使发育不良或中途败育的胚发育成熟 打破休眠期促进胚萌发 快速繁殖良种砧木 诱导胚性愈伤组织,2、离体胚培养

2、的发育途径,按正常胚胎发育途径形成植株 脱分化形成愈伤组织 胚“早熟萌发”,成熟胚 未成熟胚,2.1 按正常胚胎发育途径形成植株,2.2 脱分化形成愈伤组织,离体胚,2.3 胚“ 早熟萌发”,畸形苗,发育不正常而死（即胚性发育）,离体的幼胚在培养基上不能长出成熟胚的各种结构，越过正常胚胎发生过程中的若干阶段，直接长成幼苗。,3、成熟胚的培养,3-1、材料的消毒与接种,健壮优良的个体自交种或杂交种子，常规消毒灭菌， 剥离胚。,3-2、培养基 大量元素和微量的无机盐为基本成分,谷氨酰胺作为氮源，可以促进胚生长 植物天然浸提物（ye）促进胚生长 硫氨素促进胚根的伸长 生长素低浓度促进胚的发育（胚根）

3、 赤霉素促进有后熟作用的种子萌发,3-3、培养条件 ph一般为5.26.3,12小时光照和25c，热带兰花杂交种胚30 c,4、原胚(幼胚)的培养,4.1 培养方法 4.1.1 取材：子房 4.1.2 常规表面消毒 4.1.3 在高倍显微镜下 剥离幼胚，接 种于培养基 4.1.4 送入培养室培养,4.2 原胚培养的条件,未成熟的幼胚，当它在胚囊里生长时，不仅依赖于周围细胞中的代谢，而且依赖于周围胚乳消耗的养料。与成熟胚的相对自养性比较，幼胚则完全是异养的，在离体情况下，要求更复杂的培养基。除了一般的无机盐成分外，还要加入微量元素和各种生长辅助物质。胚龄越小，要求的培养基成分就越复杂。,4.2

4、原胚(幼胚)的培养的条件,4.2.1 无机氮： 4.2.2 渗透压： 4.2.3 复杂的天然提取物： 4.2.4 活性炭：,包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；,蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一样，初期高（why）。因为自然条件下，原胚被一层高渗液体包围着。,椰乳 cm有促进幼胚生长和分化的作用,吸附有毒物质,4.2.5 有利幼胚培养的因素 胚乳看护培养，利于原胚的生长有明显的促进作用。 胚柄的存在对于幼胚的存活至关重要： 胚柄促进生长的活性，心形早期活性最高。而且保留胚柄减少对胚的直接损失。,二、胚乳培养,1. 胚乳 x3（2极核1精子） 是营养组织，影响胚的发育。 有些植物在胚发育过程中

5、把胚乳消耗尽（豆科和葫芦科）； 有些植物，胚乳在成熟种子中存在，贮存大量营养物质（禾谷类，椰子，咖啡）,2 胚乳培养 2.1 含义 将胚乳从母体上分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。,2.2 胚乳培养的意义,胚乳培养再生植株证明了全能性理论； 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； 可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统。,2.3 胚乳培养的发展史 2.3.1 发展史 1933年，lampe和mills进行最初尝试。 1949年，larue报道玉米成

6、熟胚乳长出愈伤。 其后，黑麦草，黄瓜，蓖麻相似的结果。 1973年，印度学者获得了三倍体胚乳再生植株。,2.3.2 由胚乳再生完整植株的物种 12科，20多种。 蔷薇科：苹果，梨，桃。 禾本科：大麦、玉米和水稻。 茄科：枸杞，马铃薯。,3 胚乳培养的方法,3.1 胚乳愈伤组织的建立 绝大多数经历愈伤组织阶段（器官发生），极少数直接从胚乳直接分化器官(胚状体)。 3.2 胚乳发育时期 发育早期的胚乳，接种不方便，愈伤组织的诱导频率很低。 处于旺盛生长期的胚乳，离体条件下最易诱导产生愈伤组织。 接近成熟或完全成熟的胚乳，愈伤组织诱导频率很低。,3.3 培养基成份 wt、ms植物激素 3.3.1 生

7、长素细胞分裂素合理搭配，效果更好 一般植物 均适宜 3.3.2 特殊种类激素 如: 大麦2,4-d 猕猴桃玉米素 3.3.3 无特别要求，任何一种生长素均可 如:枣,3.4 胚在胚乳培养中的作用 旺盛期的未成熟胚乳，在诱导培养基上无需原位胚的参与，就能形成愈伤组织。 完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前，必须借助于原位胚的萌发，使其活化。 胚在萌发时产生某种物质“ 胚因子”。外源ga3能部分取代胚因子。,3.5 胚乳培养过程,胚乳,胚状体发育成苗 不定芽苗,柚，柑桔和枣,大麦, 水稻, 玉米, 苹果, 马铃薯,4 胚乳再生植株的染色体倍性变异 很少三倍体(稳定型)，大多为二倍体，非整倍

8、体(畸变型)。 why？ 畸变型胚乳类型：多倍性细胞嵌合体，核型胚乳 核型胚乳：被子植物中最普遍的胚乳发育形式。初生胚乳核第一次分裂和以后的多次分裂不伴随细胞壁的形成，胚乳核游离在胚囊中。 细胞型胚乳：从初生胚乳核分裂开始，产生细胞壁，形成胚乳细胞。,原因: 胚乳愈伤发生的部位：不同部位胚乳细胞染色体组成不同。 培养基中外源激素的种类和水平： 继代培养时间长短：,三、胚珠和子房培养,1、作用,促进原胚继续生长，使杂种幼胚发育成熟；,成功：四季桔、柑、凤仙花、洋葱,成功的植物：西葫芦、莴苣、百合等,未授粉胚珠和子房，诱导孤雌生殖，产生雌性单倍体,2、外植体消毒和接种,3、培养基及培养条件,4、离体培养胚胎的发育,胚珠或授粉子房培养，合子胚可以更好地发育成植株。但如果条件不适，也容易从幼胚或珠心组织产生愈伤组织。 芸香科易产生珠心