生物技术引论与实践.ppt

1、,生物技术引论与实践,（适用于生物科学类专业）,教师：代培红 邮箱：,导 言,一 课程安排 二 课程目的与教学基本要求 三 实验安排的特点 四 教学方式 五、课程作业和考核 六、实验教学管理事项 七、目前工作,欢迎,一、教学安排,二、课程的目的和基本要求,基础和专业课程知识的综合运用 学习和掌握一系列生物大分子的制备、分离的方法和技术 基因工程常规操作技术 了解并掌握各种常规生化仪器的使用； 在科研素质，如分析和解决问题的能力方面获得培养和训练，为今后独立从事生物技术及相关学科领域的研究奠定基础。,三、实验安排的特点,1独立性和连贯性 每个实验单元本身既有相对的独立性，单元之间又有紧密的连贯性

2、。即每个实验单元都有实验结果（有产物），上一实验单元的产物是下一单元的材料，联系紧密。每个实验单元的产物要保存好，留作下一单元用。,2、实验具有可行性：所设立的实验方法和策略得当，只要操作正确，就会获得结果。,四、教学方式共同参与,教师讲授每单元内容，每个同学全程参与，动手操作，包括试剂的配制、仪器的安装、样品的处理,四、教学方式自主开展,小组制，实行组长制，各组自主开展每个单元的设计和实验，组长负责协调组员与教师的联系（仪器及试剂的领取）,五、课程作业和考核,总成绩,实验报告 40,？,实验表现 10,课程作业实验报告,每做完一项实验需写一份规范的实验报告。 每个同学各自写出有具体数据、符合

3、逻辑推理的实验报告。 能对实验中碰到的问题进行分析并提出解决方法，或对实验方案提出修改。 实验报告要及时交给老师。,原始数据的记录！,如何才能做好实验,充分预习 充分讨论 胸有成竹 充分准备 胆大心细,干净利落 了解每一步骤的作用 了解每一种试剂的用途 仔细观察、忠实记录,六、实验教学管理,由于这门课教学内容多，涉及面广，同学们独立操作时间长，有必要建立一系列的分项管理制度，如仪器损坏赔偿、实验室卫生、安全责任制等，更好地督促大家养成良好的学习、工作习惯，保证整个课程教学有序顺利地进行。,管理制度1以小组为单位保管器具,由于实验是分组进行，每一组都有一套固定的玻璃仪器、层析柱、微量移液器、电泳

4、仪等由各组使用和保管，特别是微量移液器由各组长签领，全部实验结束后再亲自交回老师注销。损坏或丢失要赔偿。,管理制度2岗位责任制,由于独立实验时长，要求每位同学都 要有很强的责任心，认真、细致做好每一步实验。对仪器的使用、试剂的配制，不懂或不很明确时，要问老师或其他同学，千万不要想当然。组长有协调本组和其它组之间关系的责任。,管理制度3卫生责任制,注意实验室 的卫生，实验桌面及公共区域要及时清理干净，值日安排表见门后。,管理制度4安全工作,离开实验室前，必须由任课老师亲自检查合格后，方可离开。值日生记得要关好水阀、电源开关、注意防火、注意人身及钱财安全。,六、目前工作,自由组合，34人一大组，两

5、人一小组 选组长，台长；,进入实验阶段,实验一 大肠杆菌液体培养基和 固体筛选培养基的制备,一、实验目的,1了解培养基制备的基本原理，掌握培养基制备的方法和步骤。 2了解灭菌的基本原理，学习并掌握实验室常用的灭菌方法。,二、实验原理,1按物理状态分：,液体：不含任何凝固剂 固体：1.5-2.0%琼脂 半固体：0.2-0.7%琼脂,2、按其成分分：,培养基的配制,符合（天然培养基）：以天然有机物质为主要成分的培养基。（LB培养基） 合成培养基：用化学纯的营养物质配制而成。（察氏培养基） 半合成培养基：用纯化学试剂和天然有机物质配制而成。（马铃薯蔗糖培养基）,二、实验原理,培养基的灭菌,1、定义：

6、采用强烈的理化因素使任何物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称之为灭菌。,2、分类,高压蒸汽灭菌：在密闭的高压蒸汽灭菌器（锅）中进行。 火焰灭菌：微生物接种工具如接种环、接种针或其他金属用具等，可直接在酒精灯火焰上灼烧灭菌。此外，接种过程中，试管或三角瓶口等，也可通过火焰灼烧灭菌。 干热灭菌：用干燥热空气杀死微生物的方法。,三、实验内容,1配制LB液体培养基、LB固体培养基。 2准备无菌培养皿。 3培养基及器皿的高压蒸汽灭菌。,四、实验试剂、耗材和用具,五、操作步骤,药品称量 加水溶解 定容 调pH值 分装 包扎,（一）LB液体培养基的配制（50ml体系） 胰蛋白胨0.5g； Na

7、Cl 0.5g；酵母提取物 0.25g，双蒸馏水40mL，溶解；定容到50ml，充分混匀；倒入三角瓶中，找老师领封口膜分口。,五、操作步骤,（二）LB固体培养基的配制（50ml） 分装前如液体培养基，等封装后，50ml的LB液体培养基中加入凝固剂琼脂粉0.75g。,（三）灭菌 严格按照高压蒸汽灭菌的灭菌指标（温度、压力、时间）对培养基、器皿灭菌，确保灭菌彻底。,实验二 大肠杆菌工程菌平板培养,一、实验目的,1.学习掌握微生物培养的原理和方法。 2.建立纯培养技术中的“无菌”概念，学习掌握无菌接种技术。,二、实验原理,消毒：是用较温和的物理或化学方法杀死物体上绝大多数微生物，主要是病原微生物和有

8、害微生物的营养细胞。(化学药剂消毒) 微生物接种技术：是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。包括斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等操作，目的是获得生长良好的纯种微生物。 无菌操作：是微生物接种技术的关键。常使用超净工作台（紫外线杀菌、过滤除菌）、酒精灯（火焰灼烧灭菌）、75%酒精。,三、实验内容,1.每小组制备LB琼脂培养基平板1个（无抗生素）、LB琼脂培养基平板（含氨苄青霉素）2个、LB液体培养基25mL两瓶，备用。 2.每人采用平板划线法，培养大肠杆菌单菌落DH5。,四、实验材料和用具,大肠杆菌液体培养物DH5菌种、LB固体培养基、无菌培养皿、超净工作台、75%消毒酒精、无菌注射

9、器、无菌针头、0.2m微孔滤膜、冰箱、接种环、记号笔、打火机、酒精灯、恒温培养箱,（一）大肠杆菌平板培养 1.制备平板：蘸取75%酒精的棉球仔细擦手，待干后，将已灭菌、熔化的瓶装LB固体培养基冷却至55左右，右手握瓶，在靠近火焰处用左手拔下瓶塞，瓶口通过火焰23次（以烧去可能附着于瓶口的微生物）后稍微离开火焰，但保持在火焰上方的无菌区域内启开皿盖，迅速注入培养基15-20mL左右，立即合上皿盖并使皿底均匀铺满培养基。平皿静置于桌上，冷凝即成平板。室温下放置，使平板表面干燥无水膜，以利于形成单菌落。,2.制备含氨苄青霉素的培养基： (1)固体培养基：使用无菌注射器吸取氨苄青霉素溶液，将一张0.2

10、m微孔滤膜装入无菌注射器，加上无菌针头，火焰旁打开无菌培养皿盖，加入皿底中央（使终浓度50g/mL），迅速注入培养基15mL左右，立即合上皿盖并慢速转动使氨苄青霉素溶液和培养基混合均匀。平皿静置于桌上，冷凝即成平板。 （2）液体培养基：将氨苄青霉素溶液加入LB液体培养基试管，使终浓度50g/mL。,3.画线： （1）连续画线法：接种环或针头稍弯的接种针火焰灭菌并冷却后，取大肠杆菌菌液，在平板上作连续画线。 （2）分区画线法：接种环（或针）取样品后，在靠近平皿边缘处的平板上，用接种环前缘或针尖的弯曲部位接触平板，接种棒与平板成3040角，画34条平行线。然后转动平皿约50角，灼烧接种环（针），冷却后，通过前一区划23条平