PCR技术.ppt

1、,线粒体中各种酶的定位,呼吸链中各种组分的排列高度有序,光合作用单位,捕光色素,作用中心,1个中心色素分子 1个电子供体 1个电子受体,常染色质的DNA序列主要为单一序列和一些重复序列，碱基组成富含G、C，遗传活性大，复制较早。 异染色质通常具有3个特点：(1)在间期中处于凝缩状态；(2)是遗传惰性区，只含有极少数不表达的基因；(3)复制时间晚于其它染色质区域。 异染色质可分为两种类型：一种是在各种在细胞中总处于凝缩状态，最后进行复制的称为恒定型异染色质，多定位于着丝粒区，端粒，次缢痕及染色体臂的某些节段，由相对简单的高度重复序列构成 。 另一种，只是在几种细胞中或在一定的发育时期和生理条件下

2、可变为常染色质的，则称为兼性异染色质,类囊体(thylakoid),第二节 叶绿体的超微结构,膜间隙,内、外两层膜之间厚约10 20nm的空隙,双层单位膜 每层厚约68nm,由膜围成的圆盘状扁囊,外膜的通透性大 内膜选择性强(特殊载体),基质,各种酶类,一、G蛋白的结构与活性变化,活化后激活蛋白酶,活化后抑制腺苷酸环化酶,G蛋白是由、和三个亚基组成。当细胞未受刺激时，G蛋白受体和G蛋白均处于无活性状态。一旦细胞外信号分子与G蛋白受体结合时，受体被激活。随之G蛋白便与激活的受体结合，亦被激活。不同类别的G蛋白受体可激活不同的G蛋白。G蛋白的活性受GTP和GDP的调节，结合GTP时处于活性状态，而

3、结合GDP时则为失活状态。,Gs蛋白的激活机制,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,Gs蛋白激活靶蛋白的作用机制,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,G蛋白在信号转导中的活性变化过程,受体,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,激活,激活的G蛋白,激活,失活的G蛋白,失活,在信号转导中G蛋白的活性变化大体上可分为三个步骤：,、受体激活。当细胞外信号配体与受体结合时，引起受体蛋白构象改变，暴露出了与G蛋白结合的部位，于是G蛋白便与配体-受体复合物结合，导致G蛋白与GDP的结合力大大减弱。 、G蛋白激活。GDP从亚基上脱离下来之后，空出的位置结合上了GTP，G蛋白被激活，于是亚基与复合物相解离。激活的亚基暴露出

4、了与腺苷酸环化酶相结合的部位，二者结合，后者被激活。 、G蛋白复原失活。亚基具有GTP酶活性，GTP与亚基结合几秒钟之后，GTP被水解成GDP，亚基恢复原来的构象，并与腺苷酸环化酶分离，而重又和复合物结合成G蛋白，腺苷酸环化酶失活。,1、调节离子通道,G蛋白可调节K+通道的开放，从而参与心率的调节,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,二、G蛋白在信号传递中的功能,Gs蛋白调节K+通道开关的机制图解,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,2、激活腺苷 酸环化酶,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,三、胞内信号传递与第二信使,细胞内的信号传递小分子,第二信使(second messengers) or 细胞内介

5、导物(intracellular mediators),cAMP Ca2+ 肌醇三磷酸(IP3),第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,1、cAMP信号传递途径,2、细胞内的钙信号,3、肌醇磷脂信号传递途径,讲授提纲,1、cAMP信号传递途径,某些激素通过cAMP诱导细胞反应的种类,注：ACTH，促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone）,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,cAMP浓度的提高可起不同的作用:,引起糖原降解，应付细胞对能量的急需,激活特定基因的转录，合成所需的新蛋白,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,cAMP发挥各种效应主要是通过激活一种称为cAMP依赖蛋白

6、质激酶（cAMP-dependent protein kinase）来实现的。该酶简称为A激酶，通常它无活性，但一旦它与cAMP结合，引起构象发生变化，而被激活。活化的A激酶催化特定的靶蛋白的丝氨酸或苏氨酸磷酸化，使靶蛋白被激活。,cAMP的产生过程：,A激酶：cAMP依赖性蛋白质激酶 (cAMP-dependent protein kinase, cAPK),骨骼肌细胞中cAMP刺激糖原降解过程图解,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,葡萄糖,cAMP浓度提高后激活特定基因转录的途径,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,(cAPK),2、 细胞内的钙信号,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,钙调蛋白(c

7、almodulin), 钙调素,150个氨基酸残基,4个Ca2+结合位点,结构模式图及其激活机制,动物细胞: 107个CaM分子; 占总蛋白的1,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,(A),Ca2+的这些作用是通过影响一种Ca2+敏感蛋白来实现的，这种蛋白称为钙调蛋白（钙调素）（calmodulin）。钙调蛋白是Ca2+的受体蛋白.钙调蛋白分子结合Ca2+后，发生构象变化，可参与多种反应的调节过程。,钙调蛋白,Ca2+/钙调蛋白 依赖性蛋白质激酶,CaM激酶,蛋白质的Ser或Thr磷酸化,Ca2+泵,Ca2+运输,Ca2+-ATPase,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,细胞反应,钙调蛋白所参与的功

8、能活动：,蛋白质 磷酸化酶,CaM-激酶 II：,神经系统中的一种分子记忆物质,memory trace,某些记忆和学习活动,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,钙调蛋白,Ca2+-非依赖性,cAMP与Ca2+信号传递途径的对比图解,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,3、肌醇磷脂信号传递途径,磷 脂 酰 肌 醇 (PI) 磷 酸 化 产 生 PIP 和 PIP2 两 种 多 磷 酸 肌 醇,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,PI 4-磷酸 (PI-phosphate, PIP),磷脂酰肌醇 (phosphatidylinositol, PI),PI 4,5-二磷酸 (PI-biphosphate, P

9、IP2),质膜,肌醇,PIP激酶,PIP激酶,由磷脂酰肌醇(PI)产生DG和IP3两种信号分子的过程小结,蛋白质激酶C激活的信号传递途径,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,蛋白质激酶C激活的信号传递途径的图示,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,第3节 G蛋白关联受体与G蛋白,名词缩写,激活的C-激酶激活专一基因转录的两条途径 SRF, 血清反应因子; SRE, 血清反应成分；,在G1-S期， cyclinE与CDK2结合，促进细胞通过G1/S限制点而进入S期。向细胞内注射CyclinE的抗体能使细胞停滞于G1期，说明细胞进入S期需要CyclinE的参与。同样将CyclinA的抗体注射到细胞内，发现能抑制细胞的DNA合成，推测CyclinA是DNA复制所必需的。 在G2-M期，cyclinA、cyclinB与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化、如将组蛋白H1磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞周期事件。 在中期当MPF活性达到最高时，通过一种未知的途径，激活后期促进因子APC，将泛素连接在cyclinB上，导致cyclinB被蛋白酶体（proteasome）降解，完成一个细胞周期,i,p,o,z,y,a,细菌乳糖操纵子的结构模型,i, regul