微生物课件：3病毒感染的检查方法与防治原则

1、病毒感染的检查方法与防治原则,温州医科大学微免教研室 陈俊,病毒感染的实验室诊断,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性抗体,病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察 光镜检查包涵体 分离培养,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清,二、形态学检查,光学显微镜检查 荧光显微镜检查 透射电子显微镜检查,三、病毒的分离与鉴定,（一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculatio

2、n）,1.鸡胚培养 采用孵化914天的鸡胚 绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔 流感病毒的初次分离 卵黄囊 嗜神经病毒,1、鸡胚培养,优点：易管理，不带微生物，成本较低 缺点：操作程序复杂,2.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒,3.细胞培养 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细

3、胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line）,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,1病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,（二）病毒在培养细胞内增殖的检查与鉴定,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落,麻疹病毒感染细胞,呼吸道合胞病毒感染细胞,形成多核巨细胞或称融合细胞,(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),形

4、成包涵体(inclusion body),(1)细胞病变效应(cytopathic effect, CPE),腮腺炎病毒感染细胞,(2)红细胞吸附（hemadsorption）,病毒囊膜表面血凝素(HA) 红细胞表面HA受体,(3)干扰现象（interference）,风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE(),人胚肾细胞,风疹病毒？ 埃可病毒,CPE(-)风疹病毒(+) 埃可病毒(-) CPE(+)风疹病毒(-) 埃可病毒(+),(4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH变化减慢,四、病毒抗原的检测,免疫荧光法 放射免疫测定法 酶联免疫吸附试验,五、病毒核

5、酸检测,抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序,六、血清学诊断,补体结合试验 血凝抑制试验 ELISA,病毒感染的防治原则,灭活疫苗（inactivated vaccine） 活疫苗（living vaccine） 重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine） 亚单位疫苗（subunit vaccine） 化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（recombinant vaccine） 核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,一、人工主动免疫,二、人工被动免疫,免疫球蛋白 血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂 IFN-、 细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞,病毒感染的药物治疗,核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 2.干扰素和干扰素诱生剂 3.中草药 4.基因治疗剂 5.治疗性疫苗,1.抗病毒化学制剂,反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（ribozyme