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文档简介

1、革兰染色法,实验目的,掌握革兰染色的操作技术及油镜的使用。,实验原理,1、细菌细胞壁结构的不同。G+菌肽聚糖层数多，结构致密，不易脱色。 2、G菌等电点较低，在碱性染料中带较多负电荷，与碱性染料（结晶紫）结合力牢固，不易脱色。 3、G菌中核糖核酸镁盐与媒染剂（卢戈碘液）结合力牢固，已着色的细菌不易脱色。,革兰阳性菌细胞壁,革兰阴性菌细胞壁,Why did G+ bacteria and G- bacteria appear difference by Gram satin ?,Carbolfuchsin,革兰染色法意义,鉴别细菌 选择药物 研究细菌致病性,材料与器材,菌种： 大肠杆菌，金黄色葡

2、萄球菌 革兰氏染色液： 结晶紫，卢戈碘液，95%乙醇，稀释石碳酸复红 接种环、载玻片、酒精灯、显微镜。,实验方法,1、制片： 涂片：取1环生理盐水置载玻片，取少许细菌在生理盐水里研磨成1cm直径的菌膜； 干燥：室温自然干燥或酒精灯烘干； 固定：将载玻片在外焰上快速过4次。 2、染色： 初染：结晶紫-染覆盖菌膜区，1 min，水洗； 媒染：卢戈碘液-覆盖菌膜区，1 min，水洗； 脱色：95%酒精-覆盖菌膜区，10 s ，甩干，水洗； 复染：稀释石炭酸复红-覆盖菌膜区，30 s，水洗； 干燥：玻片放滤纸间以吸干玻片水分； 镜检：菌膜区加香柏油，油镜检。,实验结果,观察细菌的形态，颜色，判断阴阳性，排列方式等,Gram positive,Gram negative,实验完成后： 玻片扔到消毒缸内 还显微镜前，油镜用石油醚擦干净 洗手后离开教室,注意事项 无菌操作 涂片不宜多 烘干时不能靠近火焰，以免菌体变形 火焰固定温度要适

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