C_05 微生物液体深层培养—发酵罐的使用.ppt

1、Central Laboratory of Biology,微生物液体深层培养发酵罐的使用,微生物学实验 食品微生物学实验,课前预习与目的要求,【课前预习】 1. 液体深层发酵的原理。 2. 小型自控发酵罐的使用方法。 【目的要求】 1.了解微生物液体深层培养的方法和设备的使用。,基本原理,好氧微生物的生长繁殖需充足的氧。液体深层培养，其氧的供给由空气系统完成，“通风搅拌”是最常用的方式。 空气过滤器至罐体以及其他与罐体相通的管道、培养基都需进行彻底地灭菌。然后，控制好微生物培养所需的温度、风量、搅拌速度并接种，方可正常生产。,实验用品,1. 材料 玉米粉、豆饼粉 2. 试剂 K2HPO43H

2、2O、MgSO47H20、红曲霉液体菌种 3. 仪器 小型通风发酵罐,方法步骤,1. 准备工作 1）培养基的配制：玉米粉5%，豆饼粉2%，K2HPO43H2O 0.5%，MgSO47H20 0.1%，pH自然。 2）检查本系统各单件设备，确保各设备能正常运行时方可开机。 3）温度、pH、转速、消泡设定值的调节,2. 空气过滤及空气管路的消毒 1）慢慢打开蒸汽阀门，排尽冷凝水。 2）蒸汽通过空气过滤器进入发酵罐内。 3）消毒时间一般为30分钟。 4）吹干空气过滤器需20分钟左右。. 3空消 1）排尽夹套中的水。 2）排尽蒸汽管中冷凝水，使蒸汽徐徐进入发酵罐。 3）空消时间一般为3050分钟。排尽

3、发酵罐内的冷凝水。,4. 加培养基液 1）将培养基原液加入发酵罐内，装液量7585%。,5. 实消 1）排尽夹套中的水。 2）夹套预热：调节电机转速至150rpm左右，进行慢速搅拌。 3）发酵罐内温度达到80左右时，排尽蒸汽管中冷凝水，使蒸汽徐徐进入发酵罐。 4）当培养液温度达到95100后方可停止搅拌。 5）实消时间一般为30分钟。自然冷却10分钟左右。 6）通冷却水进行冷却。 7）当罐内温度降至70以下时，慢速搅动培养基。,6. 接种 1）当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。 2）准备合格的摇床菌种。 3）在接种口四周围上酒精棉。 4）点燃酒精棉，拧下接种口螺母，并将其放入预先准备的盛

4、有酒精的培养基中。 5）将装菌种的瓶口在火焰上烧一会儿，在火焰下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内，盖上接种口螺母，灭火焰。 7. 培养 1）按照工艺要求调节通气量、培养温度及搅拌转速。,8. 取样 蒸汽通过取样口，保持2030分钟，消毒后再取样。取完样再通蒸汽约5 min。 9. 出料 1）出料管的灭菌。 2）出料。 3）出料完毕后用蒸汽消毒出料管。 4）发酵罐应及时清洗干净。 5）如果发酵罐暂时不用，则需排尽罐内及各管道内的余水。,10. 发酵罐的清洗 1）关闭电源，旋下电机及个传感器的连线插头。 2）如果搅拌轴及机械密封装置不干净，则可用水冲刷。 3）安装完毕后，检查管道及发酵罐的密封性。

5、,注意事项,1）必须确保所有单件设备能正常运行时使用本系统。 2）在过滤器消毒时，流经空气过滤器（金属滤芯）的蒸汽压力不得超过0.17MPa，否则过滤器滤芯会被损坏，失去过滤能力。 3）在操作过程中，罐压不得超过0.12MPa，防止引起设备的损坏。 注意：在空、实消升温过程中冷却按钮必须处于停止状态，否则当设定值设定在培养温度时，冷却水管中会自动通冷却水，不仅会影响升温速度、浪费蒸汽，更重要的是会引起冷凝水过多，造成培养液的浪费。,4）在空、实消结束后冷却时，发酵罐内严禁产生负压，以免损坏设备或造成污染。 5）在发酵过程中，罐压应维持在0.030.05MPa之间，以免引起污染。 在各操作过程中，必须保持空气管道中的压力大于发酵罐的罐压，否则会引起发酵罐中的液