消毒后餐饮具的微生物检验技术.ppt

1、消毒后食饮具的微生物检验技术,饮食业食饮具消毒是控制肠道传染病发生和流行的重要环节之一，也是防止胃肠道传染病传播的重要措施。现行国家标准为GB 14934-94食（饮）具消毒卫生标准 ，该标准适用于宾馆、饭店、餐厅、食堂等饮食企业的食（饮）具，也适用于个体摊点的食（饮）具。,一、餐饮具消毒指标(感官指标、理化指标、细菌指标) 1 感官指标1.1物理消毒（包括蒸汽、煮沸等热消毒）：食（饮）具必须表面光洁、无油渍、无水渍、无异味。1.2化学消毒：食（饮）具表面必须无泡沫、无洗消剂的味道，无不溶性附着物。,2理化指标 采用化学消毒的食（饮）具，必须用洁净水清洗，消除残留的药物。用含氯洗消剂消毒的食（

2、饮）具表面残留量，应符合表1的要求。 表1 理化指标,3 细菌指标 采用物理或化学消毒的食（饮）具均必须达到表2的要求。（发酵法与纸片法任何一法的检验结果均可作为判定依据。 ） 表2 细菌指标,二采样与检验方法1发酵法检测大肠菌群1.1采样方法食（饮）具抽检碗、盘、口杯，将2.0cm2.5cm（5cm2）灭菌滤纸片紧贴内面各10张（总面积50 cm2、）、碟、匙、酒杯以每5件为1份，每件内面紧贴灭菌滤纸片各2张（总面积50 cm2/份）,经1min，按序取置入50 mL灭菌盐水试管中，充分振荡后，制成原液。筷：取每双的下段12 cm处约50 cm2（l2cm2cm2cm），置入50 mL 灭菌

3、盐水试管中，充分振荡20次，制成原液。,1.2检验方法 1.2.1 初发酵试验 选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL，361 培养24 h2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。,1.2.2 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 1培养48 h2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。,1.2.3 大肠菌群最可能数（M

4、PN）的报告 按1.2.2 确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见GB4789.3-2010附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。,1.2.4 MPN表(GB4789.3-2010附录B),2纸片法检测大肠菌群食（饮）具消毒采用专用的大肠菌群快速检验纸片。2.1采样方法随机抽取消毒后准备使用的各类食具（碗、盘、杯等），取样量可根据大、中、小不同饮食行业,每次采样610件,每件贴纸片两张,每张纸片面积25cm2（5cm5cm）用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内。筷子以5只为一件样品，用毛细吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片

5、后，立即将筷子进口端（约5cm）抹拭纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。,2.2检验方法将已采样的纸片置37培养1618 h，若纸片保持紫蓝色不变为大肠菌群阴性，纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。,致病菌检验 GB 4789_4-2010 沙门氏菌检验.mht GB 4789_11-2003溶血性链球菌检验.mht GB 4789_10-2010金黄色葡萄球菌检验.mht GB-T 4789-5-2003 志贺氏菌检验.mht,3.1.1 沙门氏菌检验程序见图 1。,3.2.2 操作步骤(1 )前增菌无菌操作将样品转至 500 mL 锥形瓶中，于 36 1 培养 8 h

6、 18h。(2) 增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 42 1 培养 18 h24 h。同时，另取 1 mL，转种于 10 mL SC 内，于 36 1 培养 18 h24 h。(3)分离培养分别用接种环取增菌液 1 环，划线接种于一个 BS 琼脂平板和一个 XLD 琼脂平板（或 HE 琼脂 平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于 36 1 分别培养 18 h24 h （XLD 琼脂平板、HE 琼脂 平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或 40 h48 h （BS 琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落, 各个平板上的菌落特征见表 1。,表1 沙门氏菌

7、属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征,(4)生化试验 接种三糖铁琼脂 自选择性琼脂平板上分别挑取 2 个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于 36 1 培养 18 h24 h，必要时可延长至 48 h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属 的反应结果见表 2。,表 2 沙门氏菌属在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内的反应结果,其他生化试验:接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水 （供做靛基质试 验）、尿素琼脂 （pH7.2）、氰化钾 （KCN） 培养基，也可在初步

8、判断结果后从营养琼脂平板上挑 取可疑菌落接种。于 36 1 培养 18 h24 h，必要时可延长至 48 h，按表 3 判定结果。将已挑菌 落的平板储存于 2 5 或室温至少保留 24 h，以备必要时复查。 表 3 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表,注：阳性；阴性；/阳性或阴性。,结果判定: 反应序号 A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶 3 项中有 1 项异常，按表 4 可判定为沙门氏菌。 如有 2 项异常为非沙门氏菌。 表 4 沙门氏菌属生化反应初步鉴别表,注：表示阳性；表示阴性,反应序号 A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 反应序号 A3：补做 ONPG。ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒 沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。,三、细菌实验室配置 1.细菌检验操作室（细菌检验操作室是细菌培养与检验主要操作室，主要设施是实验台）； 2.培养基制作室（培养基室是制作、配制微生物培养所需培养基及检验用试剂的场所）； 3.洗涮消毒室（洗涮消毒室用以消毒洗涮待用与已用之玻璃器皿，培养基及污物）。,四、微生物实验室的基本仪器配备 生化培养箱，冰箱、生物显