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文档简介

1、传代培养对于贴壁生长的细胞来讲，随着培养时间的延长，细胞分裂增殖，数量越来越大，逐渐会在培养瓶底壁形成一完整的细胞层，细胞之间因接触性抑制作用而停止生长，此时就需要对细胞进 行传代。传代前准备工作实验进行前无菌室及无菌操作台紫外灯照射30分钟灭菌,关闭大灯15min后可进入培养基、血清、胰酶使用前水浴加热至细胞生长温度 紫外灯照射灭菌 预热培养用液肥皂洗手后，以75%酒精将手消毒至手腕处,所需培养基,血清,细胞,胰酶以75%酒精棉擦拭后放入操作台边缘.酒精棉消毒手和手臂,(消毒后的手不可以再碰别的东西),进入操作台开始试验使用物品入台传代详细过程按照所需血清浓度配置新培养液 ，一般先加血清，再

2、加培养基，然后将两者用5ml的移液管混匀。 消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量、不同细胞 吸出旧培养液等诸多因素影响 初次传代细胞的解离程度可以通过倒置显微镜下直接观察判断，一般以细胞突起缩回、细胞之间间隙增大、细胞近乎缩成圆形为度。 长期传代的细胞可以通过平日观察为参考，一般以观察到瓶底细胞出现针孔样缝隙为标准1mL 0.25胰酶消化配制新培养液吸出胰酶，将3ml的新培养液加入瓶里终止消化。 终止消化用移液管吸取培养瓶内液体，从瓶口开始，采用扫描式方法反复吹打瓶皿底壁。 扫描式吹打确保细胞已经被全吹下来后，用移液管将细胞悬液轻轻混匀，然后吸出一定量的细胞悬液扔掉或是接种于新瓶中。补加新培养液

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