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1、Ellman试剂介绍、1页半胱氨酸作为巯基基团的标准品、2页巯基基团的摩尔吸光度、2页故障排除、3页相关的赛默飞世尔科技产品 、3页附加信息、4页参考文献、4页半胱氨酸作为巯基基团的标准品A. 原料制备反应缓冲液：0.1M磷酸钠缓冲液，PH=8.0，包含1mM EDTA半胱氨酸一水合盐酸盐，分子量175.6Ellman试剂溶液：1mL反应缓冲液溶解4mgDTNBB.步骤1、在缓冲液中溶解一系列不同浓度的半胱氨酸：标准品缓冲液体积半胱氨酸质量最终浓度A100ml26.34mg1.5mMB5ml25ml标准品A1.25mMC10ml20ml标准品A1.0mMD15ml15ml标准品A0.75mME

2、20ml10ml标准品A0.5mMF25ml5ml标准品A0.25mMG30ml0ml0.0mM2、 取若干试管，每个试管中包含50L的Ellman试剂液和2.5ml的缓冲液。3、 在各试管中加入250L各浓度的标准工作液或待测物溶液。注：对于未知的样品需要稀释，以便使其浓度标准曲线的工作范围之内（理想的浓度为 0.1-1.0）。4、 室温下反应15min。5、 测试412nm紫外吸收。6、 根据得到数值生成一个标准曲线，测定待测样品由标准曲线计算SH含量基于摩尔吸光系数精确测量巯基的基团A.原料制备反应缓冲液：0.1M磷酸钠缓冲液，PH=8.0，包含1mM EDTAEllman试剂溶液：1m

3、L反应缓冲液溶解4mgDTNBB.吸光度测试1、 对于每一个未知样本进行测试,准备一个包含50L的Ellman试剂液和2.5ml的缓冲液。2、 加入250L待测样品,空白添加250L反应缓冲液。3、室温下反应15min。4、测试412nm紫外吸收。5、根据TNB的摩尔消光系数(14,150M-1cm-1)计算巯基含量。自由巯基浓度的计算示例250L整数倍的待测液与2.5ml缓冲液、50L的Ellman试剂混合测试吸光度为0.879（减去空白），用1cm比色管。计算未知的巯基浓度mol/L。报道的摩尔吸光数（摩尔消光系数，用M-1cm-1来表示），TNB在412nm这种缓冲条件下是14150。摩尔吸光系数E被如下定义：，A为吸光度，b为路径长度多少厘米，c为浓度mol/L。如上得：吸光度A=0.879，b=1cm，E=14150M-1cm-1，c=6.2110-5mol/L。这个值代表试管中溶液的浓度，计算未知样品的浓度，有必要考虑稀释因素如下：被测溶液的总体积：如果测定溶液浓度为6.2110-5mol/L，2.80ml溶液包含：这1.7410-7mol来源于巯基测定溶液中由原来的0.25毫升样品。因此，自由巯基在原始的未知样品的浓度为：可能遇到的问题可能原因

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