实验4 离体蛙心灌流.ppt

1、蟾蜍离体心脏灌流,实验四,学习离体蛙心灌流方法 观察K+、Ca2+及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏活动的影响。,实验目的,实验原理,心肌具有自动节律性、传导性和兴奋性。 离体和脱离神经支配的动物心脏,保持在适当的环境中,在一定的时间内,仍然能够有节律性地产生兴奋和收缩。 利用心肌细胞的这一特性,可用来制作离体心脏模型, 来观察药物和电解质水平对心肌活动的影响。,离体蛙心循环回路,静脉插管,动脉插管,橡胶连接管,实验材料及仪器设备,蟾蜍 蛙用手术器械，蛙心套管，蛙心夹，张力换能器，受滴-刺激两用电极 RM6240系统，任氏液，2%CaCl2，2%KCl，0.01%肾上腺素，0.01%乙酰胆碱。,

2、实验内容与操作步骤,（一）离体蛙心灌流制作 1.破坏蟾蜍脑和脊髓，暴露心脏，剪除心包膜和肝系膜（不要损伤血管） 2.第1次结扎：双结扎右主动脉,第1次结扎：双结扎右主动脉,左主动脉,右主动脉,实验内容与操作步骤,3.第2次结扎：结扎左右肺静脉、前腔静脉 （关键步骤：结扎时远离静脉窦） 线头从左主动脉下面穿线，穿行于右主动脉下方；然后用眼科镊从右侧穿过左肝静脉、后腔静脉、右肝静脉下方，夹住右主动脉下方的线头拉出；然后一个同学将心脏提起，另一个同学进行结扎。,第2次结扎：结扎左右肺静脉、前腔静脉,4.第三次结扎： 在左右肝静脉和后腔静脉下穿线在右肝静脉（或左肝静脉、或后腔静脉）上用眼科剪剪一斜口用

3、加有任氏液的蛙心套管静脉插管插入剪口结扎固定（远离静脉窦） 然后马上用任氏液灌入静脉插管中，吸管吹吸，防止凝血，可见心脏膨大，然后红色逐渐变浅。,第3次结扎：左右肝静脉后腔静脉,5. 第四次结扎： 在左主动脉下穿线在动脉上剪一斜口蛙心套管动脉插管插入动脉（不要插入动脉球内）结扎固定 在静脉插管中灌入任氏液，可见液体从动脉插管端泵出， 并且直至心脏颜色变成黄白浅色，血液全部泵出后进行离体。,6. 蛙心离体： 剪断右主动脉剪断左主动脉剪断静脉插管 再将多余的长线头剪断提起第二次结扎的线头、 动脉插管、静脉插管及心脏 小心将蛙心离体。 将与蛙心套管静脉插管和动脉插管的离体蛙心固定在铁架台上,离体蛙心

4、循环回路,静脉插管,动脉插管,橡胶连接管,实验步骤,7.用蛙心夹在心室舒张时夹住心尖约1mm，用丝线将蛙心夹与张力换能器相连。 8.在动脉套管与静脉套管之间放置记滴电极，记录滴数。,受滴-刺激-两用电极,蛙心灌流装置安装,通道1,受滴信号线,RM6240记录系统,点击“实验”菜单，选择“蛙心灌流”，系统进入信号记录状态。 仪器参数：通道，时间常数：直流；滤波频率10Hz；灵敏度3g，采样频率400Hz，扫描速度1s/div。,实验项目,1.正常蛙心收缩曲线和每搏心输出量记滴（最大收缩力、心率、心输出量）。 2.向套管的任氏液中加2%CaCl21滴，观察并记录心搏曲线的变化。,实验项目,3.当心

5、脏恢复正常时，向套管内加入2滴2%KCl溶液，观察心搏变化频率和幅度，当曲线出现明显变化时，立即更换任氏液。 4.当心脏恢复正常时，向套管内加入1滴0.01%肾上腺素溶液，观察心搏变化频率和幅度，当曲线出现明显变化时，立即更换任氏液。 5.当心脏恢复正常时，向套管内加入1滴0.01%乙酰胆碱溶液，观察心搏变化频率和幅度，当曲线出现明显变化时，立即更换任氏液。,实验要求,每一项实验记录出一段有代表性的曲线，包括连续三部分: (1)正常对照 (2)加药后的反应 (3)更换灌流液后恢复至正常状态。,注意事项,每次换液时液面应保持一定的高度。 每次换液或滴加试剂时应打标记。 每个试剂瓶的滴管不能混淆。 心脏表面随时滴加任氏液。 待心跳恢复正常后进行下一项实验。,同学最容易犯的错误是第二次结扎:要让一个同学将蛙心提起来，然后另一个同学进行结扎，以免将蛙的静脉窦结扎进去。 做插管时，静脉插管不能太深以免插进静脉窦中；动脉插管不能太深以免插入动脉瓣中。 静脉插管弄完后，一定马上要灌任氏液，防止凝血，可见