南医大微免实验二.ppt

1、实验内容 录像：淋转、E花环 介绍：免疫学检测技术（书229） 示教：淋转、E花环 单扩、双扩、火箭电泳 操作：对流免疫电泳、玻片凝集,淋巴细胞转化试验 转化百分率正常值为70%左右 分裂相：即染色体型 母细胞：大4-5倍；核质疏松，有1-3个核仁；核周透明区；胞浆有空泡 过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡 小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少,示教片,E玫瑰花环试验 T细胞表面有绵羊红细胞受体，可在自然情况下与绵羊红细胞结合，形成E玫瑰花环，由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞。,示教片,一、抗原抗体反应的原理 1、基础：抗原决定簇抗体的互补决定区 2、特点：特异性 可逆性 比例性 阶段性,二、

2、抗原抗体反应的影响因素 1、电解质 2、温度 3、酸碱度,三、抗原或抗体的检测方法 凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术,凝集反应 概念：抗原 + 抗体 凝集团块 直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体 凝集团块 玻片法、试管法,间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体 凝集团块 反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原 凝集团块 协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原 凝集团块,沉淀反应 概念：可溶性抗原 + 抗体 沉淀物 单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向） 双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、 抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向）,单向琼脂扩散 单向

3、琼脂扩散试验是一种定量试验。 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在适当位置打孔，将抗原加入孔中扩散，与板中抗体相遇，在比例合适处呈现白色沉淀环，环的直径与抗原含量成正比。 主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量,单向定量免疫电泳（火箭电泳） 将一定量已知抗体混于琼脂中，制板，在板的一端打一排小孔，加入待检样品，置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰，状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。 敏感度与单扩相仿，但需时较短。,双向琼脂扩散 在琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相应孔中，二者自由向四周扩散，在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体

4、系统，可出现多条沉淀线。 可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分,对流免疫电泳,材料 电泳仪 缓冲液 琼脂板1块/2人，打孔器2个/组， 抗AFP血清 已知Ab AFP阳性血清 阳性Ag 对照阴性血清 阴性Ag 待检血清：标本1 未知Ag 标本2 未知Ag,对流免疫电泳 打孔：金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距离为4毫米至5毫米。 加样：抗AFP血清加于抗体孔内；病人血清、AFP阳性血清、阴性对照血清分别加于抗原孔内。 电泳：将琼脂板置电泳槽，抗原孔置阴极端。板两端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电30分钟。 观察：在相应抗原、抗体孔间出现沉淀线。,对流免疫电泳,方法 打孔 加样 电泳35min,Ag,Ab,Ag,Ab,45mm,45mm,5mm,5mm,阴性,阳性,标1,阴性,标2,阳性,对流免疫电泳,结果判定： 在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。,直接凝集反应玻片凝集,材料：玻片1张/1人，1号、2号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环 方法：取生理盐水34环，菌落12环，后加血清2环 轻摇玻片，12分钟后观察 结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应 *玻片扔在后面的玻片缸里 *消毒水泡手,生理盐水 1