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实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察,一、实验原理:,当用适当浓度的TritonX-100处理时,可将细胞内蛋白质破坏,但细胞骨架系统的蛋白质却被保存,后者用考马斯亮兰R250染色,可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。,二、材料与试剂,1、洋葱鳞茎 2、M-缓冲液:50m mol/L咪唑 50m mol/L KCL 0.5m mol/L Mgcl2 1m mol/L EGTA 0.1m mol/L EDTA 1m mol/L巯基乙醇。,三、实验步骤,1、撕取洋葱鳞茎的内表皮细胞(约1cm2大小若干片)置于装有pH6.8磷酸缓冲液的青霉素小瓶中使其下沉。 2、吸去磷酸缓冲液(PBS),用1%TritonX-100处理30分钟。 3、吸去TritonX-100,用M-缓冲液洗三次,每次6分钟。 4、用3%戊二醛固定30分钟。 5、pH6.8PBS洗三次,每次6分钟。 6、0.2%考马斯亮兰R250染色15分钟。 7、用蒸馏水洗2次,细胞置于载玻片上,加盖玻片,用显微镜观察。,
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