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文档简介
1、2009级生物技术 制药工程实验,可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量,实验一,一、目的要求 1、掌握用分光光度法测定药物中总黄酮含量。 2、掌握可见分光光度计的使用方法。,二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成,主要功能为开胃消食,其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。 黄酮类化合物具有邻二酚羟基,或3,5位羟基结构,可与铝盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应,生成有色配合物,可用可见分光光度法测定其含量。 本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中,与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物(max=510nm),从而用可见分光光度法(比色法)测定大山楂丸中总黄酮的含量。,三、仪
2、器与试药 1、可见分光光度计、分析天平、回流提取器。 2、乙醇(A.R)、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。 3、芦丁(中国药品生物制品检定所)。 4、大山楂丸(市售品)。,四、操作步骤 1、标准液的配制: 精密称取芦丁对照品20mg,置100ml容量瓶中,加95%乙醇50ml使溶解,然后加50%乙醇稀释至刻度,即得0.2mg/ml的对照品溶液。,2、标准曲线的制备: 精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分别置于10ml容量瓶中,各加50%乙醇溶液使成5ml,精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6分钟,加入10%硝酸铝溶液
3、0.3ml,摇匀,再放置6分钟,加入1%氢氧化钠溶液4ml,分别用50%乙醇稀释至刻度,摇匀,放置15分钟。以第一瓶作空白,用可见分光光度计在510nm处测其吸收度,作A-C标准曲线(或计算其回归方程)。,3、样品液的制备: 精密称取干燥的大山楂丸9.0g,置回流提取器中,用95%乙醇125ml回流提取1.5小时,提取两次,合并两次滤液,减压浓缩至150ml即得。 4、含量测定: 精密量取提取液1ml,按上述标准曲线制备方法进行测定,并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。,5、芦丁的定性反应: 取上述提取溶液2ml,加少许镁粉,再加5滴浓盐酸,注意观察颜色变化。,五、注意事项 1、实验证明,提取时间为1.5小时,提取两次,基本能提尽样品中黄酮。 2、实验证明,样品显色后,在30分钟内测定总黄酮含量,无明显改变,超过30分钟,含
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