DB32T 3889-2020 河滩冬青组织培养技术规程

1、ICS65.020.20B 61DB32江苏省地方标准DB 32/T 38892020河滩冬青组织培养技术规程Technical regulation for tissue culture of Ilex metabaptista 2020 - 10 - 13发布2020 - 11 - 13实施江苏省市场监督管理局发布DB32/T 38892020前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由江苏省林业局提出并归口。本标准由江苏省林业科学研究院起草。本标准主要起草人：张敏、陈庆生、周鹏、黄婧、郝明灼、李飞。IDB32/T 38992020河滩冬青组织培养技术规程1 范围本标准规

2、定了河滩冬青组织培养的母株选择、外植体选择与处理、初代培养、继代增殖、瓶外生根培养、增殖苗扦插、插后管理和记录。本标准适用于河滩冬青的组培快繁。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。LY/T 18822010 林木组织培养育苗技术规程3 母株选择选择河滩冬青优树株系或无性系分株。4 外植体选择与处理4.1 选择在4月6月，选择连续3 d 以上的晴天，从母株上剪取生长健壮无病虫害的当年生萌芽条作为外植体，截取部位以萌芽条的中、下部为

3、宜，规格以长度10 cm 15 cm、直径3 mm左右为宜。4.2 灭菌用中性洗洁精洗净外植体，并用自来水冲洗10 min 15 min。在超净工作台上，用75 %乙醇溶液消毒外植体30 s，无菌水冲洗2次；再用10 %次氯酸钠溶液浸泡外植体8 min 10 min，无菌水漂洗2次，每次5 min，随后置于灭菌处理过的滤纸上吸去表面水分。5 初代培养5.1 培养基诱导培养基：MS+ 0.2 mg/L ZT +2.0 mg/L 6-BA + 0.5 g/L 活性炭，pH5.7。培养基制备按照LY/T 18822010的规定进行。5.2 诱导培养将经灭菌处理的外植体剪去接触灭菌液的伤口部位，切成约

4、1.0 cm带芽茎段，接种在含有诱导培养基的培养瓶中，培养温度为24 26，光照强度为1500 lx 3000 lx，光照时间为12 h15 h。培养30 d，长成6 cm 8 cm高的无菌试管苗。6 继代增殖6.1 培养基继代培养基：MS+ 4.0 mg/L ZT + 0.2mg/L IBA + 活性碳0.5 g/L，pH5.7。培养基制备按照LY/T 18822010的规定进行。6.2 继代培养将诱导培养的试管苗剪成1 cm 2 cm带芽茎段垂直接种于继代培养基。培养温度为24 26，光照强度为1500 lx 3000 lx，光照时间为12h15h。每隔50 d继代1次。7 瓶外生根培养7

5、.1 设施宜在温室进行培养。7.2 容器宜采用塑料穴盘，穴孔呈倒锥形，口径约4.5 cm，高约5 cm。旧穴盘需清洗消毒后才可使用。7.3 基质基质选用pH 6.2 pH 6.8的草炭。7.4 基质的消毒处理用0.2%高锰酸钾和0.2%多菌灵交替喷洒扦插基质至完全湿润，用薄膜覆盖堆捂，待使用前2 d 3 d揭膜晾晒，装入容器后即可扦插。8 增殖苗扦插8.1 插条处理选择生长健壮的增殖苗，剪去芽苗根部膨大部分，清水清洗根部，按单株剪下，每株剪成3 cm4 cm带芽茎段作为插条。8.2 扦插插条基部采用500 mg/L IBA浸泡30 min，处理后用镊子将组培苗基部插入基质，深度为0.8 cm 1.0 cm。8.3 覆膜扦插后浇透水，在穴盘上覆盖保鲜膜，保温保湿。9 插后管理9.1 环境控制置于温度2030、光照 2 000 lx 2 500 lx、光周期 16 h/d、湿度80%的环境条件下培养，2周 3周后揭膜。9.2 水肥管理每隔 3 d 浇一次水，每两周喷一次叶面肥，喷施浓度为0.1 % 0.3 % 的尿素溶液。9.3 病害防治每月喷一次杀菌剂，宜采用0.1%的多菌