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文档简介

1、脂肪酸的-氧化实验十六目的要求（1）了解脂肪酸的-氧化作用。（2）掌握测定-氧化作用的方法和原理。实验原理在肝脏中，脂肪酸经-氧化作用生成乙酰辅酶A。2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成，也可还原生成-羟丁酸。乙酰乙酸、-羟丁酸和总称为酮体。本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的碱性条件下，与碘生成碘仿。反应式如下：2NaOH +I2 NaOI +NaI +H2O在CH3COCH3 +3NaOI CHI3（碘仿）+CH3COONa+2NaOH剩余的碘，可以用标准硫代硫酸钠滴定。NaOI +NaI +2HCl I2 +2NaCl +2H2OI2 +2Na2S2O3 Na2S4O6

2、+2NaI根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差，可以计算由丁酸氧化生成的量。试剂和器材试剂1.1g/L淀粉溶液；9g/L氯化钠溶液；150g/L三氯乙酸溶液；100g/L氢氧化钠溶液；10盐酸溶。2.0.5mol/L丁酸溶液：取5氧化钠溶液中。mL丁酸溶于100mL0.5mol/L氢3.0.1mol/L碘溶液：称取12.7g碘和约25g碘化钾溶于水中，稀释到1000 液标定。mL，混匀，用标准0.05mol/L硫代硫酸钠溶4.标准0 . 01 mol/L硫代硫酸钠溶液： 临用时将已标定的0.05mol/L硫代硫酸钠溶液稀释成0.01mol/L。5.1/15mol/LpH7.6磷

3、酸盐缓冲液：1/15mol/L磷酸氢二钠溶液86.8mL与1/15mol/L磷酸二氢钠溶液13.2mL混合。材料新鲜猪肝。操作方法一、肝糜的制备称取肝组织5g置于研钵中。加少量0.9%氯化钠 溶液，研磨成细浆。再加入0.9%氯化钠溶液至总体 积为10mL。二、-氧化作用取2个50mL锥形瓶，各加入3mL 1/15mol/L pH7.6磷酸盐缓冲液。向其中一个锥形瓶中加入2mL 正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。然后各加入2mL肝组织糜。混匀，置于37恒温水浴中保温。二、沉淀蛋白质保温1.5小时后，取出锥形瓶，各加入3mL15% 三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加2mL正丁酸，混匀， 静置15

4、分钟后过滤。将滤液分别收集在2个试管中。三、酮体的测定吸取2种滤液各2mL分别放入另2个锥形瓶中， 再各加3mL0.1mol/L碘溶液和3mL100g/L氢氧化钠溶 液。摇匀后，静置10分钟。加入3mL10%盐酸溶液中 和。然后用0.01mol/L标准硫代硫酸钠溶液滴定剩 余的碘。滴定至浅黄色时，加入3滴淀粉溶液作为 指示剂。摇匀，并继续滴到蓝色消失。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠溶液的毫升数，并按下式计算样品中的含量。四、计算肝 脏 中 的Na2S2O31/6含 量 （ mmol/g）=（A-B）C式中：A为滴定对照所消耗的0.01mol/L硫代硫酸钠溶液的mL数；B为滴定样品所消耗的0.01mol/L硫代硫酸钠溶液的mL数。C为Na2

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