脱毒苗培育【知识浅析】

1、脱毒苗培育,1,行业学习,一、病毒病对作物的危害 无性繁殖作物一旦感染病毒，代代相传，体内不断积累，严重影响植株生育。病毒病不能采用杀菌剂和抗生素防治，生产上尚无法根治。,蕙兰嵌纹病毒病 Cymbidium Mosaic Virus,一串红病毒病,苹果花叶病毒 Apple mosaic virus,2,行业学习,脱毒苗指通过物理、化学、生物技术等方法去除已知某些特定病毒的苗木。 （1）脱毒苗只是相对而言，许多植株含有多种已知病毒及尚未鉴定的未知病毒，通过茎尖培养的幼苗，经过鉴定只能说出去了已知的主要病毒，因此称之为“无特定病毒苗”更为合理。 （2）脱毒苗并不具有病毒病抗性，在今后种苗繁育过程中

2、有可能重新感染病毒病。,马铃薯脱毒苗,3,行业学习,二、脱毒苗培育方法 （一）热处理脱毒 1. 原理：病毒受热以后不稳定性，使病毒钝化，失去活性，高温可以延缓病毒扩散速度和抑制其增殖。 2. 方法：热水浸泡-接穗在50热水中浸泡数分钟或数小时。 高温空气处理-旺盛生长植物在3340条件下生长发育，热处理之后立即把茎尖切下来嫁接到无病砧木上。 3. 局限性：只对球状、线状病毒有效，对杆状病毒不起作用。,4,行业学习,（二）茎尖培养脱毒 1. 原理 病毒在植物体内的分布是不均匀的。老叶片及成熟的组织和器官病毒含量较高，而幼嫩的及未成熟的组织或器官病毒含量较低，生长点（0.11.0 mm区域）则几乎

3、不含或含病毒很少。 在植物体内，病毒易于通过维管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统，病毒在细胞间移动的另一途径是通过胞间连丝，但是速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。 在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制。 在分生组织中病毒钝化系统比其它区域都具有更高的活性，因而分生组织不受侵染。 在茎尖中存在高水平的内源生长素，可以抑制病毒的增殖。,5,行业学习,2. 方法 （1）材料的准备 一般说来，带有叶原基的茎尖易于培养，成苗快，培养时间短，要获得无病毒植株，理论上茎尖越小越好，实际应用时，根据病毒种类不同切取0.11mm大小的生长点，即可获得无病毒植株，外植体越小，培养难度

4、越大，或者时间越长。,6,行业学习,（2）材料消毒 流水冲洗5 min-洗涤剂-流水冲洗30min-70%酒精35min-升汞810min-无菌水冲洗34次 （3）茎尖分生组织分离 如果进行普通茎尖培养，外植体形大些为好，一般切取0.51cm长的茎尖或整个芽；若进行茎尖分生组织脱毒培养，外植体应该尽量小些，通常在解剖镜下剥掉细叶及叶原基，将生长点暴露，然后切取0.11mm长的部分作为培养材料。,7,行业学习,3. 接种与培养 以MS培养基为基本培养基，White、B5、Morel等培养基也常用于茎尖培养，蔗糖浓度一般为3%，过高或过低会抑制生长，应提高K+与NH4+含量，促进茎尖生长。 细胞分

5、裂素可促进细胞分裂和分化，诱导不定芽形成，有助于解除顶端优势，促进腋芽萌发。常用的有BA、KT，前者用于油菜、豌豆、菜心等蔬菜快繁，后者多用于莴苣。,8,行业学习,生长素类物质如IAA、IBA、NAA、2，4-D等具有促进新梢生长的显著作用，并可诱导外植体产生愈伤组织和生根。往往低浓度的生长素与细胞分裂素配合可以达到促进芽增殖，提高繁殖效果的作用。 百合 MS+BA 0.51.0mg/L+NAA 0.5mg/L 苹果 MS+BA 0.51.0mg/L+GA3 0.10.5mg/L +IBA 0.20.5mg/L,9,行业学习,（三）热处理结合茎尖培养脱毒 （四）微体嫁接脱毒 微体嫁接是组织培养

6、与嫁接方法相结合来获得无病毒苗木的一种技术。它是将0.10.2mm的茎尖作为接穗，嫁接到由试管中培养出来的无菌室生砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的植株。 （五）愈伤组织培养脱毒 （六）抗病毒药剂脱毒-抗病毒醚,10,行业学习,三、脱毒苗鉴定方法 （一）指示植物法 利用病毒在其他植物上出现的症状特征，作为鉴定病毒种类的标准，这种专用于产生症状的寄主植物称为指示植物。 指示植物分类：（1）接种后产生系统症状，并扩展到非接种部位；（2）只在接种部位产生局部病斑、坏死或褪绿环状病斑。 指示植物要求：常年栽培，较长时间内保持对病毒敏感性，易于接种。 常见的指示植物有苋色藜、千日红和多种烟草。,千

7、日红 Gomphrena globosa,烟草 Nicotiana tabacum,11,行业学习,方法：从待测植株上取13g幼叶，加入少量pH7.0的0.1mol/L磷酸缓冲液，研成匀浆，吸取少量涂抹在500600目金刚砂擦伤表皮的指示植物叶片上，5min后用清水冲洗叶面，将接种植物放在防虫罩内，2025条件下培养数天至数周后观察症状。,12,行业学习,（二）电镜显微检测法 直接观察病毒微粒的存在与否，以及病毒的大小、形态结构和种类，可以显示细胞与组织中病毒的精确定位。,TMV杆状病毒,13,行业学习,（三）抗血清鉴定法 植物病毒也是一种抗原，能引起动物产生抗体，由于不同病毒产生的抗血清（含有抗体的血清）都具有特异性，用特定病毒的抗血清拉鉴定病毒具有高度的专一性，但是制备抗原和免疫过程比较复杂。,14,行业学习,（四）酶联免疫测定法（E