消毒效果检测方法

1、医院清洗消毒灭菌效果监测方法进展,概述,医院消毒灭菌效果监测用设施设备仪器和器材 医院消毒效果监测方法 其他监测方法 医疗器械清洗消毒灭菌效果监测结果 医院环境微生物污染和消毒效果监测 结果,一、消毒灭菌效果监测用设施设备仪器和器材,实验室和主要监测用仪器设备 常用消毒灭菌效果监测器材,（一）实验室和常用仪器设备,1.百级洁净实验室 2.微生物实验室 3.空气采样器 4.紫外线测定仪 5.细菌过滤器 6.ATP检测仪 7.温度/压力记录仪 8.温度记录仪 9.温度/相对湿度记录仪 10.干热温度测试仪,1. 100级洁净实验室,基本设施设备：缓冲间、风淋设备、百级净化设备，全不锈钢桌台面、传递

2、窗、紫外线灯等 用于灭菌物品的无菌检验 各种灭菌物品、一次性使用卫生用品和一次性使用医疗用品。,100级洁净实验室要求,2. 微生物实验室,基本设施设备：实验台、洗手池、洗眼器、紫外灯、二级生物安全柜、电冰箱、培养箱、压力蒸汽灭菌器、微波炉、恒温水浴箱等。 用途：各种常见条件致病菌的检测、细菌总数的检测、消毒灭菌效果的检测。,3.六级筛孔空气撞击式采样器,组成：六级筛孔采样器、真空泵、流量计、定时器 用途：用于室内空气中细菌总数检测和消毒效果监测,六级筛孔空气撞击式采样器,六级筛孔空气撞击式采样器指标,第一级：7.0m 孔径1.18mm 第二级：4.7m7.0m 孔径0.91mm 第三级：3.

3、3m4.7m 孔径0.71mm 第四级：2.1m3.3m 孔径0.53mm 第五级：1.1m2.1m 孔径0.34mm 第六级：0.65m1.1m 孔径0.25mm 测量范围内捕获率98%,4.三联细菌过滤器,组成：真空抽气泵、滤器、0.45微米的滤膜 用途：用于内镜消毒效果检测,细菌过滤装置,5.ATP检测仪 ATP荧光素酶结合，在荧光素酶的结合作用Mg+参与反应发出荧光降解成ADTAMP,三磷酸腺苷（ATP）方法用于清洗效果的检测,在生物化学中，三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate, ATP）是一种核苷酸（又叫腺苷三磷酸），作为细胞内能量传递的“分子通货”，储存和传递化

4、学能。ATP在核酸合成中也具有重要作用。 ATP是三磷酸腺苷的英文名称缩写。ATP分子的结构是可以简写成A-PPP，其中A代表腺苷，P代表磷酸基团，代表一种特殊的化学键，叫做高能磷酸键，高能磷酸键断裂时，大量的能量会释放出来。,进行ATP检测,污染物的ATP含量,医疗器械使用后会受到体液、血液、组织细胞以及微生物等污染。 体液和血液中有大量的体细胞，每个体细胞的ATP含量大约为1x10-15mol ATP，每个细菌细胞中大约含有210-18mol ATP 单个体细胞ATP含量大约是单个细菌细胞的500倍,细菌ATP检测试剂盒,细菌ATP裂解剂,ATP标准品,ATP检测液,细菌外ATP消去剂,试

5、剂盒检测细菌的原理,每个细菌中含有 210-18mol的ATP,基于荧光素酶催化的化学发光原理，首先利用细菌外ATP消除剂排除非细菌产生的ATP干扰，再利用细菌ATP裂解剂将细菌裂解，通过ATP检测液检测总细菌ATP的发光量，达到检测细菌的目的,light,Oxyluciferin+AMP+Pyrophosphate+,6. 新型多点紫外线辐照仪,六大创新,多点监测，能同时监测5个紫外灯管并一起打印保存。 手持遥控，主机与探头分离，室外监测，彻底避免紫外辐射伤害。 即时打印，可保存原始记录。 数据线USB端口与电脑相连，可在电脑里编辑储存监测记录。 专用盲管紫外线传感技术，避免其它波段紫外线干

6、扰，监测数据更为精确。 余弦修正技术，不受角度误差影响。,7.双通道温度/压力数据记录器,外壳材质：不锈钢，硅橡胶 铠装探针：探针长40mm，直径 3mm 探针材质：英科镍合金 温度记录范围：0150 ，精度： 0,1C 压力传感器： 压电电阻,带温度补偿 压力范围：1 毫巴 4000 毫巴 压力精度： 10毫巴 记录容量：100,000个数据 温度传感器：铂电阻PT1000 温度记录容量：100,000个数据 记录间隔：1秒24小时任意设定 防护等级：IP68（全密封防水） 承压：20公斤，电池：耐高温锂电池，寿命2年 主机尺寸： 46 mm x 24 mm，主机重量：70,功能： 完成1个

7、点温度、1个点压 力与时间的检测、记录 附加无线发送信号功能,8.单通道主机/探针一体温度记录器,外壳材质：不锈钢，硅橡胶 探针材质：不锈钢探针 长100mm 直径 3mm 温度记录范围：-85400 精度：0.5 （-85 -40） 0.2 （-40 0） 0.1（0 +140） 0.2 （+140 +250） 0.5（+250 +400) 温度传感器：铂电阻PT1000 温度记录容量：100,000个数据 记录间隔：1秒24小时任意设定 防护等级：IP68（全密封防水）,完成1个点的温度与 时间检测、记录 附加无线发送信号 功能,单通道主机/探针一体温度记录器,外壳材质：不锈钢，硅橡胶 铠

8、装探针：探针长250/500mm，直径 1,5mm 探针材质：英科镍合金 温度记录范围：-85400 精度：0.5 （-85 -40） 0.2 （-40 0） 0.1（0 +140） 0.2 （+140 +250） 0.5（+250 +400) 温度传感器：铂电阻PT1000 温度记录容量：100,000个数据 记录间隔：1秒24小时任意设定 防护等级：IP68（全密封防水） 承压：20公斤，电池：耐高温锂电池，寿命2年 主机尺寸： 46 mm x 24 mm，主机重量：70克,单温度探针；完成1个点的 温度与时间检测、记录铠装 探针可任意弯曲 附加无线发送信号功能,双通道主机/探针一体温度记

9、录器,外壳材质：不锈钢，硅橡胶 铠装探针：探针长500mm，直径 1,5mm 探针材质：英科镍合金 温度记录范围：-85400 精度：0.5 （-85 -40） 0.2 （-40 0） 0.1 （0 +140） 0.2 （+140 +250） 0.5 （+250 +400) 温度传感器：铂电阻PT1000 温度记录容量：100,000个数据 记录间隔：1秒24小时任意设定 防护等级：IP68（全密封防水） 承压：20公斤，电池：耐高温锂电池，寿命2年 主机尺寸： 46 mm x 24 mm，主机重量：70克,完成2个点的温度与时间 检测、记录铠装探针可 任意弯曲 附加无线发送信号功能,硅橡胶隔

10、热盒,智能数据交换平台,专用电源、天线 配套软件(光盘) 中文软件操作说明 功能： 编程及读取数据 同时为4个数据记录器编程、读取4个记录器记录数据, USB 接口，彩色背景信号,附加无线接收信号功能,9.无线温度/相对湿度实时监测仪,无线主机探针一体温度/湿度记录器,温度范围及精度:1085 0.1 温度记录容量：8,000个数据 湿度范围及精度：0%100%RH 湿度记录容量：8,000个数据 电池：AA锂电池（可更换） 尺寸：直径22mm高117mm （直径相当于一元硬币) 完成1个点的温度与时间及1个湿度点的检测、记录；可同步显示实时温度数值,MPIII主机探针一体温度/湿度记录器,温

11、度范围及精度:1085 0.1 温度记录容量：81085,000个数据 湿度范围及精度：0%100%RH 2%RH v记录容量：8,000个数据 电池：纽扣电池（可更换） 尺寸：直径18mm高66mm 单通道无线温度探针；完成1个点的温度与时间检测、记录；同步显示实时温度数值；用于消毒灭菌过程的检测,MPRF无线主机探针一体温度记录器,工作站 智能微机信号转换器（实时传输）配套软件(光盘)，可兼容以上系列产品信息处理完成数据编程和读取； 可实时传输数据。,10.干热温度测试仪,LH-X多路温度测试仪主要参数,传感器：标配（K型）热电偶2米 测温范围： -1001000；精度：0.5级 0-10

12、00 (读数值0.5%+1) -100-0 (读数值0.5%+2) 机箱尺寸：260（宽）160（高）360（深）(mm) 温度信号输入通道数：8路、16路、24路、32路、40路、48路、56路、64路可选 重量约6.0Kg,LH-X多路温度测试仪工作原理,LH-X多路温度测试仪是由两条不同金属连接着一个灵敏的电压计所组成，金属接点在不同的温度下，会在金属的两端产生不同的电压差，电压差非常微小，故需灵敏的电压计才能测的，由电压计的度数便可反应温度值。,（二）常用消毒灭菌效果监测器材,1.化学指示物 2.生物指示物 3.灭菌过程验证装置（PCD） 4.消毒剂浓度测试卡 5.中和剂 6.采样液

13、7.规格板（5.05.0cm） 8.采样用棉拭子,1.化学指示物 chemical indicator（CI）,定义： 显示由暴露于某一灭菌过程中的物理和（或）化学条 件的改变导致的一个或多个预定过程变量变化的系统。,分类,第1类 过程化学指示卡（ process indicators） 用于单个物品或包装，指示物品是否经过了灭菌过 程，以区分灭菌或未灭菌物品，例如 化学指示胶带，化 学指示标签及用于单一器械灭菌过程指示的器材指示卡。,第2类 特殊检测化学指示卡 （ indicators for use in specific tests ） 用于灭菌器或灭菌标准的特效实验操作，例如，各种 B

14、-D试纸，用于监测在133135预真空灭菌器： 冷空气排出效果 饱和蒸汽穿透效果 漏气情况,Class 2 Indicator,Class 2 Indicator,反复使用的B-D测试装置,可反复使用15次 成本节省30%,判断B-D测试结果简便,设备正常：颜色完全由蓝色变为黑色。,设备不正常：指示试纸的中心区域呈蓝色到灰色，表明有残留空气或者蒸汽穿透不完全。,第3类 单一参数化学指示卡Single-parameter indicators 用于灭菌过程中单一关键参数的测试，例如：温度 指示卡（剂）、气体浓度指示卡（EO、甲醛）等。,第4类 多参数化学指示卡(Multi-parameter i

15、ndicators) 具有两个或以上关键参数，例如，环氧乙烷灭菌指 示卡，设定值为900mg/L，60min 根据ISO15882-2003提供的上下限值，相对湿度大于 30%，时间至少45min，环氧乙烷浓度为675mg/L时，指 示卡可达到终点，相对湿度小于30%，指示卡不能达到 终点。,0,时间,温度 (oC),121,134,多参数化学指示剂（第4类）,两个或以上 关键参数 和生物不完 全一致 误差：宽,第5类综合性化学指示卡（ integgrating indicators） 是一种专用于对各灭菌过程中规定范围内的所有评价 参数起作用的指示卡，其设定值需达到灭活值，该灭活 值是通过参

16、考设定的试验菌的D值和Z值确定的。,第 5类 综合指示卡,50,20,10,5,2,1,0.5,Time (Min.),Temperature ,121,134,Integrating Indicator Accept Points (SVs),G. stearothermophilus Thermal Death Time,Class 5 Integrating Indicator,第6类 模拟化学指示卡 emulating indicators 用于对各灭菌周期规定的范围内所有评价参数起作 用的指示卡， 其设定值以所选的灭菌程序设置值为依 据。,Class 6 Emulating Indi

17、cators,第6类的允许指示最严格的，因此此类化学指示卡的对特 定灭菌过程中关键参数指示的可信度最高。 例如，蒸汽灭菌指示卡 设定值：134 维持时间：3.0min 依据ISO15882-2003的要求（温度，时间） 暴露条件，温度132， 时间2.75min ， 可接受的指 示卡应显示失败 暴露条件时间134， 时间3.0min ， 可接受的指示卡 应显示通过,6类指示物美国ST79:2010规范,在1-6类指示物中，只有6类指示物可以作为周期验证指示物，有能力监测灭菌过程中各项评价参数是否达到了预期的设定值。 根据灭菌周期不同，6类指示物派生了不同灭菌周期参数的产品 例如分别有监测134

18、 3.5分钟、18分钟，或者132 4分钟，10分钟，15分钟和20分钟的产品。可以根据需要选择不同参数的产品。 第六类指示物可用于监测越来越常见的复杂外科器械的延长循环。,ANSI/AAMI ST79:2010/A3:2012 ISO 11140-1 2005,Class 4, 5, and 6 CIs,Pass/Fail Testing Steam Class 4, 5, and 6 Indicators Pass Condition Stated Value Fail Condition S.V. Minus Values from Standard Class TimeTemperat

19、ure 4 25%2C 6 6%1C 5(3 Temperatures15， 1C ),应用,包外化学指示卡 包外化学指示卡的作用是区分已处理和未处理的物品， 而不是鉴别是否达到了适当的灭菌参数，主要包括第1类过 程指示卡。所有需进行灭菌的设备，其包装上都应附有或印 有灭菌指示带、指示卡、指示图。所有执行灭菌操作的包装 上也应附有或印有指示卡。在灭菌后和使用前均应对这些指 示带、指示卡或指示图进行验证，以确保物品已经过了灭菌 处理。,包内化学指示卡 化学指示卡用于进行灭菌处理的包裹、托盘、容器 内部时，可反映这些特定位置的关键参数达成情况，例 如，填充物、填充方式、打包技术及灭菌器故障等诸多

20、因素对关键参数的达成造成的影响。 化学指示卡应放置在包裹、托盘、容器内灭菌剂可 渗入的区域，该区域可以是包裹、托盘、容器或灭菌器 空腔的中心，对于未包装的物品，至少应在需要灭菌的 物品的托盘上放置一个化学指示卡。包内化学指示卡通 常在3、4、5、6类化学指示卡种选择。还可配合灭菌过 程验证装置（PCD）使用。,特殊监测指示卡 用于蒸汽渗入或空气排出测试，需要在空的灭菌器 中进行，测试包装可以是用户提供的、事先制造的，一 次性的或使用次数有限的。这些设备的使用要参考厂家 的技术说明书。,2.灭菌效果监测生物指示物,定义： 含有对特定的灭菌过程具有确定抗力的可存活微生 物的测试系统。 分类：按制作

21、工艺结构分类 普通型生物指示剂 嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示物通过 2496小时培养，以颜色变化判断结果 快速型生物指示剂双重监测系统（快速酶荧光生物指示剂或者快速读出生物指示剂）,Bacillus atrophaeus the spore in EO BI,Geobacillus stearothermophilus the spore in the steam BI,生物指示剂变色原理,pH值敏感的溴甲酚紫 pH 颜色变化,嗜热脂肪杆菌芽孢中葡萄苷 酶代替细菌芽孢 快速: 机器测荧光 常规: 肉眼判断 快速和常规结果完全吻合,荧光激发器 荧光阅读器 底物 酶被催化产生可发荧光的物质在机器口通

22、过荧光激发器（紫外线）荧光阅读器判断通过或失 败,快速读出技术（酶反应） 14小时提供生物监测结果，指示剂结果为阴性后方可 放行 荧光出现在132135下排气时为1小时 荧光出现在132135预真空或者121下排气时为3小时 也可通过48小时进一步培养通过颜色变化进行,菌悬液指示物 含有嗜热脂肪杆菌芽孢的安甁 Prospore Ampoule,属于自含式生物指示剂 用于指示较长时间液体灭菌效果监测 也适用于非液体负载灭菌效果监测 菌片 含有保护剂的染菌载体,生物指示剂的应用：,灭菌过程监测方法中最严格的方法，灭菌效果监测、生物 监测、装载控制 压力蒸汽灭菌器常规BI监测 美国医疗中心服务专业人

23、员协会规定每天进行BI监测，植 入物每锅进行监测，生物监测结果为阴性后方可放行。 美国手术室注册护士协会/医疗器械促进委员会规定每周进 行BI监测，推荐每天监测。对植入物要求每锅进行监测， 生物监测结果为阴性后方可放行。,作为植入物放行的依据 根据AAMI ST79，2006之规定，只有在生物监测结果出 来，并为阴性后，方可对植入物的灭菌放行。 快速灭菌不应该用于植入物，如果出现紧急情况需要使 用快速灭菌方法进行植入物的处理时，必须使用快速生 物指示剂和第五类化学指示剂进行监测。直到快速生物 监测结果为阴性后，方可放行。 配合灭菌过程验证装置（PCD）使用。,中华人民共和国卫生行业标准 WS

24、310.32009中对生物监测的使用,应每周监测一次。 紧急情况灭菌植入型器械时，可在生物PCD中加用5类化学指示物。5类化学指示物合格可作为提前放行的标志，生物监测的结果应及时通报使用部门。 采用新的包装材料和方法进行灭菌时应进行生物监测。 小型压力蒸汽灭菌器因一般无标准生物监测包，应选择灭菌器常用的、有代表性的灭菌包制作生物测试包或生物PCD，置于灭菌器最难灭菌的部位，且灭菌器应处于满载状态。生物测试包或生物PCD应侧放，体积大时可平放。 采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一支生物指示物，置于空载的灭菌,干热灭菌生物指示物,ISO11138-4：2006 医疗保健产品灭菌生物指 示剂

25、第四部分 干热灭菌用生 物指示物 160，D值2.5min 菌株枯草杆菌黑色变种 (ATCC9372)芽胞 菌数1106cfu/单位,3.灭菌过程验证装置 （PCD）,定义： 对某一灭菌过程构成特定的抗力，用于评价该灭 菌过程有效性的装置。,分类,根据包裹分类： 对于压力蒸汽灭菌，根据抗力或灭菌因子穿透难度 的不同,包裹可以分为下列几类： （1）实体器材（solid goods ） 指实心而没有孔洞的器材 （2）布包/敷料包/多孔物品（porous goods） 如，标准测试包 美国4kg ，欧洲7kg （）化学指示卡测试包（美国 3M）,欧洲标准包美国标准包,一次性使用标准测试包,螺旋型灭菌

26、过程验证装置，由一个不锈钢管和一个在一端与其相连的含有化学指示卡的金属舱组成。,Line Pickerell 螺旋,S.J. Line and J.K. Pickerell (1973) Journal of Clinical Pathology 26, 716-720 不锈钢管道 内径为3.0mm (0.118 in.) 长为4.55米(15 ft.) 长/内径比为1500:1 内部体积为32ml（测试囊腔为0.85ml）,聚四氟乙烯型低温蒸汽甲醛螺旋型PCD,DIN 58946, 第13章甲醛气体灭菌器性能测试 特富龙管腔 2mm内径 1.5米长 盲端结构（ Dead end lumen）

27、,蒸汽灭菌批量监测PCD,由一个聚四氟乙烯管和一个在一端与其相连的含有化学指示卡的金属舱组成,长度为1.5米，直径2mm 用于灭菌过程的批量监测,紧凑型灭菌过程验证装置（compact-PCD） 构成 ： 内部为金属管，金属管一端和一个含有化学指示条的 金属容器相连, 外部为人造材料保护外舱,根据PCD内所放置的指示物分类 化学PCD 一片第五类CI 生物PCD 一支BI或一支含酶BI 生物和化学混合PCD 一支BI和一片第五类CI或一支BI和一支含酶CI,化学PCD 将第五类化学指示物置入PCD夹子内,生物PCD将菌片置入PCD夹子内的过程,3.按不同灭菌方法的效果监测进行分类 压力蒸汽灭菌

28、 环氧乙烷灭菌 低温甲醛蒸汽灭菌 低温等离子体灭菌,压力蒸汽灭菌PCD,空腔负载试验的过程挑战装置（PCD） 空腔负载试验的过程挑战装置PCD 由管盖、连接器、指示物固定器、软管组成。 化学指示物应符合GB18282.1 的要求，制造商提供化学指示物的选择和使用方法。 过程挑战装置符合如下要求： 材料：聚四氟乙烯（）； 管壁厚度：（0.50.025 ）mm； 管内直径：（2.00.1 ）mm；,软管长度：（150015 ）mm； 密封舱重量：（10.00.1 ）g； PCD 内部自由容积：装置内部总容积减去指示物固定器容积的（）% 注：可使用其它证实等同性的材料。当使用其它材料时，壁厚与指示物

29、固定器重量可相应改变。,环氧乙烷PCD不锈钢型,根据EN1422制作，适用于环氧乙烷灭菌的批量监测和设备的验证。 PCD的长度是4.55米，管腔的直径是3mm。,环氧乙烷PCD 高分子/不锈钢型,根据EN1422制作，适用于环氧乙烷灭菌器的过程监测和效果验证。采用不锈钢和高分子材料，用于批量监测。管腔长1.5米。直径2mm。 难度略低于前面的全不锈钢装置,低温蒸汽甲醛灭菌PCD,符合EN14180和15424的规定 用于低温蒸汽甲醛灭菌的批量监测和验证。,过氧化氢气体等离子体低温灭菌PCD,将染菌不锈钢针载体（长度：4cm、直径：0.5mm）放置于聚四氟乙烯材质导管（长度2000mm，内径：1

30、mm；）中间，整个聚四氟乙烯材质导管用过氧化氢等离子体专用包装袋包装。 2.放置于不锈钢导管（长度500mm，内径：1mm；）中间,过氧化氢气体等离子体灭菌效果监测用PCD,PCD在灭菌过程监测中的应用 PCD的选择 PCD的选择与灭菌的方法、灭菌器类型和灭菌物品的种类有关，目前没有适用于所有灭菌器及灭菌方法的万能PCD，不同的灭菌物品，如： 中空物、（烧杯、容器、管状物） 多孔物（包布，衣物、纺织品） 无孔物（手术器械或实心物品） 应使用相应的PCD。,PCD的放置位置,用于日常监测 灭菌过程的验证相当于性能和运行的再确认，应使 用确认时的检测方法。因为PCD可以很容易、方便、快 捷的使用，

31、故可以用于日常监测。 不同类型PCD的应用 16条手术巾生物验证（挑战）测试包及一次性使用化 学指示卡测试包，可用于对织物类包裹和实心器械灭菌 效果的监测。,紧凑型PCD主要用于实心器材、简单的腔体器材和辅料类物品灭菌效果的监测 螺旋型PCD主要用于低温灭菌技术中对管腔类物品灭菌效果的监测,卫生部医院消毒供应中心灭菌效果监测标准（已通过专家评审）中规定： 灭菌管腔类器械宜进行管腔PCD监测； 生物监测每周一次可使用生物PCD或一次性标准生物测试包; 小型灭菌器因无标准生物测试包，可使用PCD。,4. 消毒剂浓度测试卡,戊二醛浓度浓度测试卡 含氯消毒剂浓度测试卡 过氧乙酸浓度测试卡 二氧化氯浓度

32、测试卡 邻苯二甲醛浓度测试卡（强生、键之素牌）,2%戊二醛浓度测试卡,适用于1.8%-2.2%戊二醛消毒剂最低有效浓度的检测。 根据接触规定浓度的戊二醛后测试卡是否由白色变为均匀的黄色来检测戊二醛的含量。 国内首家研制生产，有包装专利。（单片独立真空包装，避免交叉污染）。,有效氯浓度试纸,适用于含氯消毒剂有效氯含量的检测。 测试范围有效氯含量为20mg/L-1000mg/L。 根据接触规定浓度的有效氯，试纸变色情况，检测含氯消毒剂的有效氯含量。,过氧乙酸浓度测试卡,浓度范围0.52000mg/L,二氧化氯浓度测试卡,标准比色卡范围：5ppm-10ppm -30ppm-50ppm-100ppm-

33、200ppm -300ppm-500ppm二氧化氯残留浓度范围：0.2-10ppm反应颜色为浅蓝蓝色 深蓝蓝黑-到黑色 反应颜色容易比对。,邻苯二甲醛浓度检测卡,美国强生公司Cidex OPA浓度测试条 健之素牌邻苯二甲醛浓度检测卡I型 北京长江脉医药科技有限责任公司,5. 中和剂,定义： 在微生物杀灭试验中，用以消除试验微生物与消毒剂的混悬液中和微生物表面上残留的消毒剂，使其失去对微生物抑制和杀灭作用的试剂。,中和剂鉴定试验方法,中和剂对消毒剂的中和作用,中和剂鉴定试验的目的,在消毒剂杀菌试验中,消毒剂除对微生物具有杀灭作用外，也具有一定抑制作用,为了正确判断其杀菌效果,必须排除残留消毒剂对

34、微生物的抑制作用, 从而使其在复苏培养基中生长繁殖，获得正确试验结果。,理想的中和剂的条件,1. 能有效地中和相应的消毒剂。 2.中和作用迅速。 3.中和剂及其与消毒剂的中和产物对微生物无不良影响。 4.中和剂与消毒剂不应有协同杀菌作用。 5.对培养基中的营养成分无破坏作用，不与培养基形成对微生物有害的产物，不影响培养基的透明度。,常用中和剂配方,季铵盐 类消毒剂的中和剂 吐温80 30ml 皂角苷 1g 组氨酸 1g 色氨酸 1g 0.03moLPBS 至 1L,常用中和剂配方,葡萄糖酸氯己定类消毒剂的中和剂 吐温80 30ml 卵磷脂 3g 组氨酸 1g 0.03moLPBS 至 1L,常

35、用中和剂配方,PVP碘伏或含氯类消毒剂的中和剂 吐温80 30ml 卵磷脂 3g 组氨酸 1g 硫代硫酸钠 1g 牛血清白蛋白 lyophilized 1g 0.03moLPBS 至 1L,常用中和剂配方,酚类消毒剂的中和剂 吐温80 30ml 卵磷脂 3g 组氨酸 1g 硫代硫酸钠 5g 0.03moLPBS 至 1L,6. 采样液,含0.1%吐温80的0.03mol/L磷酸盐缓冲液 含0.1%吐温80的生理盐水 含相应中和剂的0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水 压力蒸汽灭菌后备用,7. 规格板和棉拭子,规格板 内框面积为55cm的不锈钢框 棉拭子 脱脂棉缠牢竹棒，脱脂棉直径大于0.5

36、cm，长度大于2. 0 cm,二、医院消毒灭菌效果监测方法,采样方法:直接用平板采样、用棉签采样、用冲洗过滤器采样 培养方法：培养基、接种方法、培养温度时间、结果记录、结果评价,（一）采样方法（主要依据GB15982-2012医院消毒卫生标准）,器材 1.采样器：选择六级撞击式空气采样器 2.平板：普通营养琼脂平板(90mm) 3.规格板:内框面积为55cm的不锈钢框 4.保温箱：内有制冷剂的保温箱 5.采样液或洗脱液： 无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水或含相应中和剂的0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水,（一）采样方法,6.棉拭子：脱脂棉缠牢竹棒，脱脂棉直径 大于0.5cm，

37、长度大于1. 0 cm 压力蒸汽灭菌后备用 7.无菌注射器:100ml注射器 8.无菌试管：18180mm 9.无菌吸管 1ml、5ml、10ml 10.三角烧瓶 250ml、500ml,采样操作方法1.空气采样,（1）采样时间 类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；、类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。 （2）采样方法 类环境选择空气采样器法，采样时，将六级撞击式空气采样器置于室内中央0.8m1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。房间大于10m2者，每增加10m2增设一个采样点。然后盖上平皿盖，立即放入保温箱，及时送检。,1.空气采样（续

38、）,、类环境采用平板暴露法：室内面积30m2 ，设内、中、外对角线3点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积30m2，设 4 角及中央 5 点，4角的布点部位应距墙壁1m处。将普通营养琼脂平板(90mm)放置各采样点，采样高度为距地面0.8m1.5m；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间，类环境暴露15min，、类环境暴露5min，然后盖上平皿盖，立即放入保温箱，及时送检。,2. 物体表面采样,（1）采样时间 潜在污染区、污染区消毒后采样。清洁区根据现场情况确定。 （2）采样面积 被采表面100cm2，取全部表面；被采表面100cm2，取100cm2。 （3）采样方法 用5cm5cm灭菌

39、规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样14个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应使用含相应中和剂的采样液。,3.医务人员手卫生采样,（1）采样时间 手卫生后，在接触病人或从事医疗活动前采样。 （2）采样面积 取双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次，按一只手涂擦面积平均约30cm2 （3）采样方法 将浸有采样液（若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂）的棉拭子

40、一支在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次，并随之转动采样棉拭子，然后以无菌操作方式，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管内，立即放入保温箱，及时送检。,4.医疗器材采样,（1）采样时间 在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样 （2）采样面积 可用破坏性方法取样的，如一次性输液（血）器、注射器和注射针等按照中华人民共和国药典无菌检查法采样 不可用破坏性方法取样的，不能用破坏性方法取样的医疗器材，取全部表面或不少于100cm2；,（3）灭菌医疗器材采样方法,可用破坏性方法取样的，如一次性输液（血）器、注射器和注射针等按照中华人民共和国药典无菌检查法进行。 对不能用破坏性方法取样的，

41、应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹，采样取全部表面或不少于100cm2；然后以无菌操作方式，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管内，立即放入保温箱内，及时进行无菌检查（消毒技术规范2.1.9.2） 。,（4）牙科手机采样： 应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，将每支手机分别置于含20mL25mL采样液的无菌大试管（内径25mm）中，液面高度应大于4.0cm，于旋涡混合器上洗涤震荡30s以上，及时进行无菌检查（消毒技术规范2.1.9.2）。,

42、（5）消毒医疗器材采样 可整件放入无菌试管的，用洗脱液浸没后振荡30s以上。 可用破坏性方法取样的，在100级洁净工作台称取1g 10g样品，放入装有10mL采样液的试管内进行振荡洗脱。 对不能用破坏性方法取样的医疗器材，在100级洁净实 验室或工作台，用浸有采样液的棉拭子在被检物体表面涂 抹采样，全部表面（小于100cm2）或取100cm2 （大于 100cm2） ，然后以无菌操作方式，剪去手接触部位，将棉 拭子放入装有10mL采样液的试管内进行振荡洗脱。,（6）消毒后内镜采样 取清洗消毒后内镜，用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，以无菌操作方式，从活检口注入冲洗内镜管路，用100

43、ml大试管在活检通道出口全量收集洗脱液振荡混匀，然后进行检测。,（7）使用中的消毒液染菌量检查采样方法 采样时间 正在使用的消毒剂 用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL使用中的消毒剂，加入到含9mL相应中和剂的试管中。,（8）医院污水采样方法按GB 18466 规定 采样时间 消毒前后 采样量 至少500ml 用灭菌刻度量杯接取污水500ml加入到2个500ml灭菌三角瓶中，若样品为经过氯消毒的污水，应在采样后立即加入终浓度为0.1硫代硫酸钠溶液充分中和余氯，立即放入保温箱，及时送检。,（二）接种与培养方法,用平板采样的，或自含式生物指示物直接放入培养箱培养。 用棉签采样的，分别取1ml振荡

44、洗脱后样液，以倾注法接种2个平皿，放入培养箱培养。 直接采的液体样品（如医院污水等），振荡混匀，分别取1ml样液，以倾注法接种2个平皿，放入培养箱培养。 需要过滤的，用细菌过滤器过滤后，将滤膜有菌面朝上，贴于平板表面。 对灭菌效果进行无菌检验，按消毒技术规范2.1.9.2 无菌检验试验进行。,无菌检验,实验器材：需氧-厌氧菌培养基 无菌试验用真菌培养基 无菌检验用洗脱液 实验室要求：百级洁净实验室或百级层流洁净台。 对室内地板、桌面和实验台面擦拭消毒，将试验用的培养基、洗脱液、供试品及其他需用器材 摆放好后，开启紫外线灯消毒1h。 人员要求：穿戴无菌隔离衣，无菌帽子、口罩、鞋，用75%乙醇消毒

45、双手，戴无菌手套。,无菌检验采样方法,辅料、手术衣等非管道类样本，取两个包装，于不同部位剪取1cm3cm的样片21片，每片放于一支含40ml培养基的试管中； 输液（血）器等管腔类样本，在7个最小包装中各选1支为样本，以无菌注射器吸取510ml洗脱液注入管腔内，往返摇荡5次，作为试验样本； 注射针、针灸针、缝合针、棉签等样本直接放入试管中； 注射器吸取采样液，将注射器芯拉到全程，振摇5次； 其他样本用无菌棉试子涂抹法采样，涂采面积不少于25cm2,无菌检验,以上样本各接种5支需氧-厌氧菌培养基试管中和2支真菌培养基试管中，5ml以上注射器和辅料类的培养基为40ml，其余样本均为15ml，在其中一

46、支需氧-厌氧菌培养管中加入1ml金黄色葡萄球菌作为阳性对照。 试验开始前，取需氧-厌氧菌培养管和真菌培养管各1支，打开试管帽置实验台上直至实验完毕，作为阴性对照。 将阴性、阳性对照与试验样品一同培养，需氧-厌氧菌培养管置30-35培养5d，真菌培养管20-25培养7d；除阳性对照管外，样本管、阴性对照管均无菌生长为灭菌合格。,内镜消毒洗脱样品的接种,将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至4045的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20mL，摇匀，凝固后放361恒温箱培养48h，计数菌落数（cfu/件）。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜（0.45m）过滤，将滤膜有菌面朝上接种于凝固

47、的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），置 361温箱培养 48h，计数菌落数。,内镜室用水污染情况,多酶洗液清洗后 EOW消毒后 “无菌水”冲洗后,培养基、培养温度和培养时间,培养基 对细菌繁殖体和芽孢，使用胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）或普通营养琼脂培养基用于消毒效果监测；胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）或营养肉汤用于灭菌效果监测。 对真菌，使用沙堡琼脂培养基 或沙堡液体培养基 。 对嗜热脂肪杆菌芽孢，使用溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基。,培养温度和培养时间,对细菌繁殖体，监测消毒效果，温度361，分别培养48h 对枯草杆菌黑色变种芽孢，监测消毒或灭菌效果，温度361，分别培养72h或7天

48、对真菌，监测消毒效果，温度251，培养7天 （GB15979-2002一次性使用卫生标准） 对嗜热脂肪杆菌芽孢，监测灭菌效果56，培养7天。 对自含式生物指示物，按厂家说明书进行。,结果的判定空气消毒效果评价标准,医务人员手消毒评价标准,卫生手消毒后医务人员手表面的菌落总数应10cfu/cm2 外科手消毒后医务人员手表面的菌落总数应 5cfu/cm2,医疗器材消毒灭菌效果评价,高度危险性医疗器材应无菌。 中度危险性医疗器材的菌落总数应20cfu/件 （cfu/g或cfu/100cm2），不得检出致病性微生物。 低度危险性医疗器材的菌落总数应200cfu/件 （cfu/g或cfu/100cm2）

49、，不得检出致病性微生物。,使用中的消毒剂微生物污染测定,使用中消毒液的有效浓度应符合使用要求；连续使用的消毒液每天使用前应进行有效浓度的监测。 灭菌用消毒液的菌落总数应为0cfu/mL； 皮肤黏膜消毒剂的菌落总数为：完整皮肤的消毒剂菌落总数应50cfu/mL；霉菌和酵母菌10cfu/mL；不得检出致病菌。破损皮肤的消毒剂应无菌。 其他使用中消毒液的菌落总数应100cfu/mL，不得检出致病性微生物。,医院污水处理,污水排放应符合GB 18466 要求。 医疗机构污水排放标准值,三、其他监测方法,（一）使用各种指示物和测定仪监测灭菌效果的方法（二）紫外线强度检测方法 （三）ATP的检测方法 （四

50、）使用各种消毒剂有效浓度测试卡检测消毒剂浓度的方法,（一）使用各种指示物和测定仪监测灭菌效果的方法WS310.3-2009医院消毒供应中心第3部分：清洗消毒及灭菌效果监测标准,1. 压力蒸汽灭菌的监测 物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。温度波动范围在3以内，时间满足最低灭菌时间的要求，同时应记录所有临界点的时间、温度与压力值，结果应符合灭菌的要求。,化学监测法 应进行包外、包内化学指示物监测。具 体要求为灭菌包包外应有化学指示物，高度危险性物品包内应放置包内化学指示物，置于最难灭菌的部位。如果透过包装材料可直接观察包内化学指示物的颜色变化，则不必放置包外化

51、学指示物。通过观察化学指示物颜色的变化，判定是否达到灭菌合格要求。 采用快速压力蒸汽灭菌程序灭菌时，应直接将一片 包内化学指示物置于待灭菌物品旁边进行化学监测。,生物监测法 应每周监测一次，具体监测方法为：将生 物指示物置于标准试验包的中心部位。标准试验包由16条 41cm66cm的全棉手术巾制成。制作方法：将每条手术巾 的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成23cm 23cm15cm大小的测试包。经一个灭菌周期后，在无 菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄 糖蛋白胨水培养基中，经561培养7d(自含式生物指 示物按产品说明书执行)，观察培养结果。 结果判定: 阳性对照组

52、培养阳性，阴性对照组培养阴性，试 验组培养阴性，判定为灭菌合格。,紧急情况灭菌植入型器械时，可在生物PCD中加用5类化学指示物。5类化学指示物合格可作为提前放行的标志，生物监测的结果应及时通报使用部门。 B-D 试验 预真空（包括脉动真空）压力蒸汽灭菌器 应每日开始灭菌运行前进行。 B-D测试，B-D测试合格后，灭菌器方可使用。B-D测试失败，应及时查找原因进行改进，监测合格后，灭菌器方可使用。,2.干热灭菌的监测 物理监测法：每灭菌批次应进行物理监测。监测方法为将 多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内、中、外各点，关好柜门，由记录仪中观察温度上升与持续时间。温度在设定时间内均达到预置

53、温度，则物理监测合格。 化学监测法：每一灭菌包外应使用包外化学指示物，每一 灭菌包内应使用包内化学指示物，并置于最难灭菌的部位。对于未打包的物品，应使用一个或者多个包内化学指示物，放在待灭菌物品附近进行监测。经过一个灭菌周期后取出，据其颜色的改变判断是否达到灭菌要求。,生物监测法：应每周监测一次，将枯草杆菌芽孢菌片 分别装入无菌试管内（1片/管）。灭菌器与每层门把手 对角线内，外角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试 管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至80 时，加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下，加入普通 营养肉汤培养基（5ml/管），361培养48h，观察 初步结果，无菌生长管继续

54、培养至第7日。 结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴 性，若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清，判为灭菌合 格；监测方法见附录B。,3.环氧乙烷灭菌的监测 物理监测法：每次灭菌应连续监测并记录灭菌时的温 度、压力和时间等灭菌参数。灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求。 化学监测法：每个灭菌物品包外应使用包外化学指示 物,作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其是否达到灭菌合格要求。,生物监测法：每灭菌批次应进行生物监测，监测方法 为：用枯草杆菌黑色变种芽孢置于常规生物测试包内， 对灭菌器的灭菌质量进行监测。常规生物测试包放在灭 菌器最难

55、灭菌的部位（整个装载灭菌包的中心部位）。 灭菌周期完成后应立即将生物指示物从被灭菌物品中取 出，36 1培养7d(自含式生物指示物应遵循产品说 明)，观察培养基颜色变化。 结果判定：阳性对照组 培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判 定为灭菌合格,4.过氧化氢等离子灭菌的监测 物理监测法 每次灭菌应连续监测并记录每个灭菌周期 的临界参数如舱内压、温度、过氧化氢的浓度、电源输入和灭菌时间等灭菌参数。灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求。 化学监测法 每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物, 作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其是否达

56、到灭菌合格要求。 生物监测法 应每天至少进行一次灭菌循环的生物监测，监 测方法应符合国家的有关规定。,5.低温甲醛蒸汽灭菌的监测 物理监测法 每灭菌批次应进行物理监测。详细记录灭 菌过程的参数，包括灭菌温度、湿度、压力与时间。灭菌参数符合灭菌器的使用说明或操作手册的要求。 化学监测法 每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物 ,作为灭菌过程的标志；每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其是否达到灭菌合格要求。 生物监测法 应每周监测一次，监测方法应符合国家的 有关规定。,（二）紫外线强度检测方法,紫外线辐照强度检测时，对室内环境 的要求：电压为220V5V，温度为2025，

57、相对湿度为 60%。 辐射照度测定 使用中的灯管，可在原装置处进行测定。测定位置在灯管下方垂直距离1m 的中心处。使用中30W普通直管型紫外线灯管的辐射照度值应不低于 70 W/cm2，低于此值者应予更换。,可同时检测紫外线灯管,（三）ATP法测定方法1.清洗效果,使用后、清洗后和消毒后的采样液（50ml装在100ml的玻璃试管里），在手心拍打均匀，用移液器吸取50微升的样液，置入微试管中，然后吸入50微升裂解液，轻轻拍打，5-10s后加入400微升的荧光素酶，放入仪器中读值为M1，然后加入10微升的ATP标准品，读值为M2，由仪器自动计算出ATP的amol值。,样品ATP的计算,例如，ATP

58、标准品为1015amol，10微升的标准品中含有ATP量为1010amol（10151010-6=1010amol），对应的RLU(相对吸光度值)为100RLU。当测试的样品测得的吸光度值为50RLU时，对应样品中ATP的含量为： X1010 50100=X1010 X=0.51010 amol 注：amol=10-18mol,ATP检测试剂,关于清洗效果的合格标准,ATP 测定方法目前尚无标准，正在制定过程中 可能考虑为2000amol/件？,2.ATP法测定细菌含量 ATP消除剂,ATP水解酶,细胞裂解液 即水解酶稀释液,细菌外ATP消除剂,ATP消去剂（又称体细胞消去剂）能够裂解非细菌的

59、细胞， 并水解非细菌产生的游离ATP，消除细菌外ATP的干扰,待检测样品,器械表面可能残留含ATP的细菌、 细胞以及游离的ATP，用消去剂 消除细菌外的ATP对检测结果的影响,采样及并消除非细菌细胞产生的ATP,3、采样拭子放回试管，与ATP消除剂混合静置10分钟,1、试管中加细菌外ATP消除剂，并将润湿拭子,细菌ATP,ATP水解酶,细菌外ATP,采样及静置过程中，ATP消除剂裂解非细菌的细胞，并水解细菌外的游离ATP；细菌ATP受到细胞壁的保护，免受水解,细菌裂解,细菌裂解液,不含游离ATP的拭子,细菌ATP,失活的ATP水解酶,被消除剂处理后不含游离ATP的拭子用细菌裂解液浸润； 细菌裂解液在中和ATP水解酶同时，将细菌