沙眼衣原体检测

1,生殖道沙眼衣原体感染的实验室诊断,朱参胜陕西省地方病防治研究所陕西省皮肤性病防治所,陕西西安,1,2,CT感染的发病机理、基因型别以及临床表现CT细胞内寄生，细胞内的网状体复制形态，细胞外的原体有感染性原体内化后定位于包涵体内，防止被溶酶体融合免疫反应相关的炎性反应通常不十分明显，多数表现为隐性感染CT诱导多种防御机制的修改和破坏，引起CT持续感染基因型A-C是眼部感染基因型D-K引起泌尿生殖道、直肠、咽喉和眼结膜感染，围产期孕妇感染CT可引起新生儿结膜炎、咽喉炎和肺炎多数直肠、咽喉感染，以及下生殖道感染均不表现出临床症状,3,女性CT感染下生殖道后，通过上行至上生殖道，可诱导慢性感染，导致盆腔炎，引起宫外孕和输卵管因素不孕不育症许多国家采取筛查措施，通过定期检测发现无症状的感染者，并治疗感染者和性伴基因型A-K感染通常局限于黏膜上皮而基因型L1、L2和L3则穿过上皮，通过淋巴扩散，引起侵袭性感染，称为性病淋巴肉芽肿（LGV)LGV存在于非洲、亚洲、南美和加勒比海部分地区的地方性疾病男男人群中，已经发生了数起基因型L2的爆发,4,生殖道沙眼衣原体感染特点,5,高流行无症状感染严重并发症依赖实验室诊断,病原体检测: 镜检, 培养抗原检测: 快速, EIA核酸检测: PCR,5,生殖道沙眼衣原体感染特点,6,感染后：约70女性和50男性为无症状86的女性和55的男性感染者持续感染时间为1年以上。 不寻求治疗.,6,7,生殖道沙眼衣原体感染特点近年来研究： 引起活动性关节炎，与动脉硬化、冠心病有关 与HIV感染的促进作用 沙眼衣原体感染已成为全世界范围的公共卫生问题!,7,生殖道沙眼衣原体实验室检测方法,8,1.免疫学方法（抗原检测） ELISA 免疫荧光法（IFA） 胶体金法2.细胞培养法,3.核酸检测： PCR (Roche), LCR ( Abbott), SDA (ProbeTec BD), TMA (Aptima Gene Probe) 荧光-PCR,8,标本的采集（同淋球菌培养标本的采集）,9,男性患者尿道 用男用取材拭子插入尿道 23cm，稍用力转动，保留数秒钟再取出， 以采集到粘膜上皮细胞。女性患者尿道 用同男性相似的上述方法取材。,9,标本的采集（同淋球菌培养标本的采集）,10,宫颈 仔细检查阴道壁和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的宫颈粘液。将一取样拭子插入宫颈管内12cm，稍用力转动，保留1030秒后取出。直肠 将取样拭子插入肛门23cm，从紧靠肛环边的隐窝中取材。避免接触粪便。,10,11,酶联免疫吸附试验（ELISA） 原理：AbAgAb-酶 底物显色方法：加入标本（孵育后洗板） 酶标抗体（孵育后洗板） 底 物（孵育） 终止液判读结果。,11,12,酶联免疫吸附试验（ELISA）结果判读cutoff阴性对照？阳性：OD the cutoff value 灰区（Gray Zone）: 略低于 the cutoff阴性：低于灰区,12,13,酶联免疫吸附试验（ELISA）结果判读阳性结果的确证2002年美国 CDC推荐：所有非培养阳性结果应用另一种方法确证为真正阳性。EIA 阳性：可进一步将样本进行DFA、“blocking” assay 或基因诊断确证。,13,酶联免疫吸附试验（ELISA）,评 价敏感性和特异性与直接免疫荧光法相似 敏感性：7997 高 特异性: 9799 高 试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故,14,14,酶联免疫吸附试验（ELISA）,优 点快速、方便自动化程度高，可同时检测大批量标本结果判断客观性强缺 点在低感染率的人群中敏感性差与其它微生物可有交叉反应，出现假阳性结果,15,15,酶联免疫吸附试验（ELISA）,16,临床应用 适宜用于检测沙眼衣原体高流行率的人群 临床和健康体检 沙眼衣原体感染的筛查,16,抗原快速检测,1.原理： 2.方法：拭子I液8010分冷5分滴加5滴15分读结果,17,17,抗原快速检测,结果判断阳性标本在结果窗见一条细线。另外，无论标本为阳性或阴性，都应在质控窗显示一条细线，表明试剂质量合格，试验步骤正确,18,18,抗原快速检测,19,优 点简易，方便，快速，尤其适用于基层单位缺 点标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果,19,20,结论：女性尿道拭子：敏感性32.8%, 特异性99.2% 女性宫颈拭子：敏感性49.7%,特异性97.9% 结果显示特异性较好，而较低的敏感性，提示有较高的漏检率。,20,21,沙眼衣原体快速检测试剂的现场评估,敏感性50%49.7%32.8%,特异性93.5%97.8%99.2%,试剂1,试剂2,标本男性尿道拭子宫颈拭子阴道拭子,沙眼衣原体快速检测方法的评价,21,核酸扩增技术,22,22,核酸扩增法:测定CT最敏感,首选，金标准国外抗原检测法 (EIA、DFA和 RDT):不再推荐实时荧光PCR+自动化的核酸提取仪瑞典的变异CT株E/SW2，目标序列在发生缺失突变感染2种以上的CT株时，可能发生基因重组双目标检测是NAAT改进的重要标志美国CDC已经不再推荐对阳性结果进行确认但当用于性虐待的评估时，阳性结果必须用检测另一个目标区域的第二种NAAT试验确认,CT实验室检测的进展,23,NAAT适用的标本：尿道、宫颈、阴道、直肠、眼分泌物、初段尿液、精液或组织非侵入性的标本是首选，特别是对无症状者的筛查。初段尿：男性阴道