食品工程毕业论文蘑菇多糖的提取

毕业论文毕业论文论 文 题 目 : 蘑菇多糖的提取 所 在 学 院 ： 食品工程分院 专 业 班 级 ： 学 生： 指 导 教 师 ： 二 0 一五年 四 月目 录题目 .摘要及关键词 .1 前言 .12 材料与方法 .12.1 试验材料与试验方法 .12.2 主要仪器与试剂 .12.2.1 测定方法 .12.2.2 蘑菇多糖的提取流程 .23.结果与分析 .23.1 热水法提取蘑菇多糖的方案 .23.1.1 提取的方法 .23.1.2 提取的步骤 .33.2 多糖提取率的计算 .34.讨论 .34.1 正交实验确定最佳提取工艺 .34.1.1 正交实验确定微波辅助热水提法最佳提取工艺 .34.2 结论 .4参考文献 .5致谢 .6蘑菇多糖的提取摘 要 :蘑菇多糖是从蘑菇子实体中提取的水溶性蛋白多糖，是其主要活性成分，蘑菇多糖是提高人体免疫力的首选营养品。蘑菇多糖的主要药理活性有：有较强的抗癌活性，是“三高”人群和癌症患者的理想营养品。关键词 :蘑菇多糖，提取The mushroom polysaccharide extractionAbstract: mushroom polysaccharide from mushroom polysaccharide extracted from fruit body of water-soluble protein, is the main active ingredient, mushroom polysaccharide is to improve the immunity of choice for nutrition. Mushroom polysaccharides of the main pharmacological activities: strong anticancer activity, is the “three high“ crowd ideal nutrition and cancerKeywords：Mushroom polysaccharide and extract11 前 言蘑菇多糖对正常机体并无免疫促进作用，但能使荷瘤式或感染后的机体的免疫应答得以提高。其制剂在动物体内筛选试验中未见直接抗癌效果，却明显促进体外淋巴细胞培养物的转化作用。曾经发现胸腺切除的动物注射抗淋巴细胞血清后，可削弱蘑菇多糖的抗肿瘤活性，且它的作用还能被巨噬细胞抑制剂角叉菜胶和硅胶所削弱。所以说，蘑菇多糖是一种胸腺依赖型 T 细胞导向并有巨噬细胞参与的特殊免疫佐剂。它能识别脾脏及肝脏中抗原的巨噬细胞，促进淋巴细胞活化因子的产生，释放各种辅助性 T 细胞因子，增强宿主腹腔巨噬细胞吞噬率，当宿主机体注射蘑菇多糖数小时后，一些具生理活性的血清因子如急性期蛋白诱导因子、血管扩张和出血诱导因子、IL-1生成诱导因子、IL3 和集落刺激因子的水平达到峰值。这些因子作用于淋巴细胞、肝细胞、血管内皮细胞后，产生许多有效免疫应答，同时导致胸腺内的前体 T 细胞趋于成熟、分化、增殖并向释放。2材料与方法2.1 试验材料与试剂原料：蘑菇试剂：蒸馏水，葡萄糖，苯酚，铝片，3NaHCO 固体，浓硫酸，95%乙醇稀盐酸，PH 试纸，复合酶（木瓜蛋白酶：纤维素酶=2：1）2.2 主要仪器与设备设备和仪器：100ml 容量瓶，6 个 50ml 容量瓶，玻璃棒，蒸馏装置（温度计、沸石、三口烧瓶、 冷凝管） ，烧杯若干，锥形瓶若干，棕色瓶一个，抽滤瓶，1、2、5、10ml吸液管，电子天平，真空干燥箱，恒温水浴锅，紫外分光光度计，粉碎机，40、60、80、100 目的筛子， DL700-0.551.5 超高压等静压机（上海大隆高压设备厂） ，真空泵，THZ-82A 台式恒温振荡器，台式离心机2.2.1 测定方法1、标准葡萄糖溶液的配制 精密称取 105干燥至恒重的葡萄糖 100.0mg，加蒸馏水溶解并定容于 100ml 容量瓶中，摇匀，配成浓度为 1mg/ml 标准葡萄糖溶液备用。 2、5%苯酚试剂的配制。 苯酚水浴加热溶解后称取 100g，加铝片 0.1g(先用 1：6 的盐酸除去铝片表面氧化铝后，再称量使用)，加入碳酸氢钠 30g，蒸馏，收集 178-182的馏分，取馏出液 7.5g，加入蒸馏水 150mL，得 5.0的苯酚溶液，置于棕色瓶中备用。 3、标准曲线绘制 以葡萄糖作为标准品，采用苯酚硫酸比色法，用紫外分光光度计测定多糖含量。 精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml 置于 6 个 50ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀。精密吸取 2ml，分别加入 5%苯酚溶液 1ml，摇匀，迅速加入 5ml 浓硫酸，振摇 5min，置沸水浴上加热 15min，然后置冷水浴中冷却 30min，以溶剂蒸馏水为空白作对照，在2400600nm 内扫描，最大吸收波长为 490nm。 在 490nm 处，测吸光值，以浓度为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线，得出葡萄糖标准品浓度 Y（ug/ml）与吸光值X 的回归方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。在 2.515.0 ug/ml 范围内呈线性关系2.2.2 蘑菇多糖的提取流程蘑菇多糖属于极性大分子化合物，其特定的结构与免疫活性密切相关。一般认为:增加多糖溶解度有利于提高其生理活性;中等相对分子质量多糖的活性超过过高的或过低的相对分子质量多糖;可溶于热水的多糖被证实有抗肿瘤活性。目前蘑菇多糖的提取多采用热水及稀碱溶液，避免在强酸、碱溶液中进行，否则极易造成多糖中糖苷键断裂及构象变化。常用的分离纯化方法大致经过沸水浸提、乙醇沉淀、透析及柱层析等步骤。2.2.2.1 成分功能蘑菇多糖是从优质蘑菇子实体中提取的有效活性成分，蘑菇多糖中的活性成分是具有分支的 - (1-3)-D-葡聚糖，主链由 -(1-3)-连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由 -(1-6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。研究表明蘑菇的活性多糖成分-(1-3)-D- 葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有效。分子式:(c6h10o5)n ，分子量:4080 万。蘑菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸，还含有大量的可转变为维生素 D 的麦角甾醇和菌甾醇，经热水提取的蘑菇多糖可调节人休内有免疫功能的 T 细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤 180 的抑制率为 97.5%，对艾氏癌的抑制率为80%。蘑菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病毒能力。功能主治:不能手术或复发性胃癌、肝癌、膀胱癌，使用本品能缓解症状，提高病人免疫功能，纠正微量元素失调。蘑菇含有水溶性鲜味物质，可用作食品调味品，其主要成分是 5-乌苷酸等核酸成分。香味成分主要蘑菇酸分解生成的香菇精(lentionione)。所以蘑菇是人们重要的食用、药用菌和调。3结果与分析3.1 热水法提取蘑菇多糖的方案 原料：蘑菇。 试剂：0.5%NaOH，95%乙醇，蒸馏水。 设备和仪器：烧杯（若干） ，玻璃棒，温度计，锥形瓶（若干） ，漏斗，水浴锅，称量天平，THZ-82A 台式恒温振荡器,台式离心机，紫外线分光光度计。 3.1.1 提取的方法：1、粉碎度对提取率的影响 分别称取 40、60、80、100 目的蘑菇粉 5g，放入到250mL 的锥形瓶中，加入蒸馏水 100ml，混合均匀后置于 90水浴锅中，水浴提取32h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取 2ml 滤液分别加入 5%苯酚溶液 1ml，摇匀，迅速加入 5ml 浓硫酸，振摇 5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却 30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在 490nm 处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。 3.1.2 提取的步骤：2、料液比对提取率的影响称取 80 目的蘑菇粉 5g 六份，放入到 250mL 的锥形瓶中，分别加入蒸馏水 75、100、125、150、175、200ml，混合均匀后置于 90水浴锅中，水浴提取 2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取 2ml滤液分别加入 5%苯酚溶液 1ml，摇匀，迅速加入 5ml 浓硫酸，振摇 5min，置沸水浴上加热 15min，然后置冷水浴中冷却 30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在 490nm 处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。3、提取温度对提取率的影响 称取 80 目的蘑菇粉 5g，放入到 250mL 的锥形瓶中，加入蒸馏水 100ml，混合均匀后置于 65、75、80、85、90、95、100水浴锅中，水浴提取 2h，提取两次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取 2ml 滤液分别加入 5%苯酚溶液 1ml，摇匀，迅速加入 5ml 浓硫酸，振摇 5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却 30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在 490nm 处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。 4、提取时间对提取率的影响 称取 80 目的蘑菇粉 5g 五份，放入到 250mL 的锥形瓶中，加入蒸馏水 100ml，混合均匀后置于 90水浴锅中，水浴提取2、3、4、5、6h，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取 2ml 滤液分别加入 5%苯酚溶液 1ml，摇匀，迅速加入 5ml 浓硫酸，振摇 5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却 30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在 490nm 处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。 5、提取次数对提取率的影响 称取 80 目的蘑菇粉 5g 四份，放入到 250mL 的锥形瓶中，加入蒸馏水 100ml，混合均匀后置于 90水浴锅中，水浴提取 2h，提取1、2、3、4 次，提取结束，冷却至室温，将两次提取液混合后过滤，取 2ml 滤液分别加入 5%苯酚溶液 1ml，摇匀，迅速加入 5ml 浓硫酸，振摇 5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却 30min，即以溶剂蒸馏水为空白作对照，在 490nm 处用分光光度计测吸光值，计算多糖提取率，得到粉碎度与提取率的关系。3.2 多糖提取率的计算多糖=总糖-还原糖多糖提取率（%）=多糖量/子实体干重*100%4.讨论44.1 正交实验确定最佳提取工艺4.1.1 正交实验确定微波辅助热水提法最佳提取工艺影响微波辅助热水提取蘑菇多糖提起率的因素主要料液化比、提时间、微波处理时间、提温度等，以下采用正交法确定微波辅助热水提取蘑菇多糖的最适条件，结果见表 1。通过以下正交实验可以得出微波辅助热水提法最佳提取工艺条件。表 1 微波辅助热水提取蘑菇多糖正交实验结果如图表 1 由极差分析结果，影响蘑菇多糖提取率因素的主次顺序为：DCBA,即提温度 微波处理时间 提时间液化比，最优水平为 A3B2C2D2微波辅助提取蘑菇多糖最佳提取条件为：料液比 1：25，提温度 80，提时间3H，在此条件下蘑菇多糖提取得率可达 7.70%。4.2 结论通过微波辅助热水提取法提蘑菇多糖的单因素实验表明，当提的料液比为1:20-1:30，提时间为 3h-5h,提温度为 80-85，微波辅助时间为 3min-4min，提取次数为 1 次时，蘑菇多糖的提取效果较好。在此基础上，对料液比、提时间、微波处理时间、提温度 4 个因素在 3 个水平上进行了实验。结果表明，微波辅助提取蘑菇多糖最佳提取条件为：料液比 1：25，提温度 80，提时间 3H，在此条件下蘑菇多糖提取得率可达 7.70%。5参考文献1李珺;钟耀广;刘长江;蘑菇 多糖的分离纯化方法研究进展 J;北方园艺;2008 年 12 期.2蒋志国;杜琪珍;盛利燚;制备型高速逆流色谱分离纯化蘑菇多糖J; 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