微生物检验教学课件（扬州大学）第六节 链球菌检验

第六节 链球菌检验一、形态特性1、 本属细菌呈圆形或卵圆形，直径 0.51m， 呈链状排列，但菌链的长短与菌种及生长环境有关。 一般来说 固体培养基上多为短链、成对或聚集成丛似葡萄球菌样，而在液体培养基中常排列成长链状； 自败血症猪体分离的菌株多为成双或短链状；2、 G+， 但老龄培养物常转呈 G 。3、 均无芽胞；除 D群一些菌株外，也都无鞭毛不运动；4、 A、 B、 C、 D群中大多数菌株在血清培养基上的幼龄培养菌或病料中的菌体常见荚膜。二、分类链球菌分类，迄今尚没有统一，多以其 溶血性 、 生理生化特性 和 抗原结构 等加以分类。1、 根据链球菌对绵羊红细胞的溶血能力分为 ：（ 1） 溶血性链球菌 ：致病力弱，多引起局部化脓性炎症；（ 2） 溶血性链球菌 ：致病力强，常引起人和动物的各种链球菌病，大部分致病性链球菌属于此类；（ 3） 溶血性链球菌 ：一般不致病。2、根据生理生化特性分类： 伯吉氏系统细菌学手册 （ 1986，第 2卷），将本属细菌分为 六大类 29个正式种 ：兰 氏分群 种名A 化 脓链 球菌B 无乳 链 球菌C 停乳 链 球菌停乳 链 球菌 类马亚 种马链 球菌 马亚 种马链 球菌 兽 疫 亚 种R 猪 链 球菌 2型S 猪 链 球菌 1型3、根据抗原结构分类：（主要是Lancefield分类法 ） 根据链球菌细胞壁中的 多糖抗原 的不同，将链球菌分成 A、 B、 C、 D、 E、 F、 G、 H、 K、 L、M、 N、 O、 P、 Q、 R、 S、 T、 U、 V AH ， KV 等 20个血清群。 鉴于同血清群的不同种链球菌在生理生化特性上差异较大，因此在鉴定链球菌时， 不能单凭血清群的检查 ，还须结合生理生化特性综合判定。链球菌属分类的演变 原来属于链球菌属，在分类上属于 D群的肠球菌 肠球菌属 和 N群链球菌的乳球菌 乳球菌属。 根据链球菌在血平板上的 溶血现象 将其分类，以及 Lancefield血清学分类 等传统方法仍是临床实验室鉴定链球菌时常规使用的方法。三、培养特性 需氧 或 兼性厌氧 ，有些菌株为厌氧菌； 对 营养要求较高 ，在普通培养基上生长不良，需加有血液（或血清）、葡萄糖等才能生长良好。 最适生长温度为 37 ，最适生长 pH7.4-7.6； 在血清肉汤中形成 粘稠 或 絮状沉淀 ，上液清朗； 在血琼脂平板上，各种链球菌菌落基本相似，多呈细小或露滴状、灰白色、圆而微凸、表面光滑、边缘整齐、 半透明 或 不透明 的菌落，菌落直径大小 0.5-0.75mm。四、生化特性 能 发酵简单的糖类 ，产酸不产气，分解葡萄糖，但对乳糖、甘露醇、水杨酸、山梨醇等的分解，随菌株不同而不同。 链球菌一般 不分解菊糖 。胆汁溶菌试验 原理 胆盐 能通过活化 肺炎链球菌 的 自溶酶 而溶解肺炎链球菌，但不能溶解草绿色链球菌。这两个特性可用来鉴别肺炎链球菌与 溶血性链球菌。 试验方法 在 1mL待鉴定菌 1824h培养液中加入 2滴 10%去氧胆酸钠， 35 孵育 15min后鉴定管由 浑浊 变为 透明 为阳性。同时在另一管中加无菌生理盐水为阴性对照。CAMP试验 用于 B群的 无乳链球菌 的鉴定。 它能产生一种 CAMP因子，能增强金色葡萄球菌 溶血素的活性，在两菌划线接种邻近处出现 箭头状的扩大溶血区。链球菌金色葡萄球菌血平板重要的链球菌种u无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌u化脓链球菌u肺炎链球菌u马链球菌兽疫亚种u马链球菌马亚种猪链球菌病的病原 猪链球菌病 是世界各国常见的一种猪传染病，危害严重。 在我国也有流行， 1998年夏，江苏省等地暴发猪病引起大批生长猪死亡，与之接触的屠宰人员，也因伤口感染而发病死亡，经确诊为 猪链球菌病 ，从而再次引起人们对此病的关注。 引起猪链球菌病的病原，至少有三种：马链球菌兽疫亚种 、 猪链球菌 2型 、 猪链球菌 1型 等。 马链球菌兽疫亚种 ，过去又叫 兽疫链球菌 ，可致猪急性败血症及关节炎，该菌呈 溶血 ，兰氏血清学分群属 C群 ，对各种动物有致病性，人工感染可致死小白鼠，但未见感染人并致死的报道。 猪链球菌 不仅可致猪败血症、肺炎、脑膜炎、关节炎及心内膜炎，尤其是其中的 猪链球菌 2型 致病性最强，可感染特定人群并致死，是一种人畜共患病病原。 1998年江苏分离株即为此菌。根据兰氏血清学分群， 猪链球菌 2型 属于 R群， 1型 属于 S群。猪链球菌 2型的溶血性不甚典型，因条件而异，可表现为 溶血 或 溶血 。 虽然鉴定链球菌一般难度不大，但要确定是否为猪链球菌就比较困难，确诊要用专门实验室提供的猪链球菌 2型或 1型的抗血清作凝集试验等。近年来，分子生物学的手段已引入链球菌的鉴定。 3.8%柠檬酸钠溶液 成分成分 柠檬酸钠柠檬酸钠 3.8g 蒸馏水蒸馏水 100ml 121 ， 15min灭菌备用匹克氏肉汤u成分 含 1%胰蛋白胨 的 牛心浸液 200 ml 1： 25000结晶紫盐水溶液 10 ml 1： 800三氮化钠 溶液 10 ml 脱纤维兔血 （或羊血） 10 ml 将上述已灭菌的各种成分，用无菌手续依次混合，分装于无菌试管内，每管内约 2 ml，保存于冰箱内备用。检样： 25g（ ml） +225ml灭菌生理盐水葡萄糖肉浸液肉汤 或 匹克氏肉汤血平板血平板（分纯培养）链激酶试验 杆菌肽敏感试验 观察溶血 革蓝氏染色报告均为阳性链激酶 (溶纤维蛋白酶 )试验u 链激酶 能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。u 实验步骤 ：u 吸取 草酸钾血浆 0.2 ml，加 0.8 ml灭菌生理盐水，混匀，u 再加入 链球菌培养物 0.5 ml及0.25%氯化钙 0.25 ml，震荡混匀， 37 水浴 10 min，血浆混合物自行