直抗阳性和免疫溶贫

直接抗人球蛋白实验阳性和免疫溶血性贫血抗球 蛋白 试验 - 检测 IgG通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集。可分为直接和间接抗球蛋白试验。直接抗球蛋白试验 检查受检者红细胞在机体内是否被抗体致敏 产生直抗阳性的条件自身免疫溶血性贫血溶血性输血反应新生儿溶血病间接抗球蛋白试验 证实红细胞在体外被抗体结合的试验是检查血清中 IgG抗体特异性或红细胞抗原的重要手段 可用于未知抗体的检出与确认交叉配合试验确认抗原间接抗球蛋白试验 步骤 1：致敏 步骤 2：洗涤 步骤 3：加入抗人球蛋白试剂（ AHG）增强介质可以增强反应性和减少孵育时间 LISS 电解质增加溶液的介电常数，减弱了抗原抗体的静电作用。降低离子强度可以显著增加抗原抗体结合率 Polybrene 碱性高分子物质，有效中和红细胞表面负电荷，降低 zeta电位，缩短红细胞之间的距离 PeG 极强的亲水性，减少红细胞与抗体周围的水分 22 Bovine albumin Enzymes增强介质 柱凝集（ Column agglutination） 固相技术（ Solid-phase technology） 复合方法Red blood cells panelPlasma or serumScreen DiluentNanoLysAnti-Human Globulin (AHG) 2. Incubation 20 at 37C3. Shake and Magnetize in the same time12 l of serum or plasma ScreenLysH1 H2 H3NanoLys60 l of NanoLys15 l of Hemascreen1,2,3ScreenDiluent60 l of Screen Diluent抗体筛选方法1.DispensingMAGNET抗体筛选方法MAGNETMAGNET MAGNETDAT阳性血液标本的收集 EDTA抗凝血 提供红细胞DAT测定，定型，洗脱，自身吸收 不抗凝血 提供血清抗体筛选，抗体鉴定DAT阳性血清学研究 多特异性抗球蛋白，抗 IgG，抗 C3测定附着在红细胞上的免疫球蛋白的类型 血清抗体筛选与鉴定自身抗体，同种抗体自身同种抗体 放散试验确认附着抗体的特异性 直抗（ IgG）阳性，而血清与洗脱液皆无反应需进一步研究：药物处理细胞， A和 B细胞，酶处理细胞红细胞鉴定 定型ABO/Rh，磷酸氯奎放散，收集网织红细胞 DATIgG， C3 放散阴性： A和 B细胞，酶处理，药物处理细胞阳性：同种抗体，自身抗体，同种自身 自身吸收血清抗体鉴定 阳性自身抗体 温抗体，冷抗体同种抗体 特异性鉴定自身吸收鉴定同种抗体 阴性IgG抗 A，抗 B抗体酶处理细胞药物依赖抗体抗体放散方法方法 用途 要点Lui freeze-thaw ABO HDFN 快速； 红细 胞用量少；其它抗体 难 放散Heat(56 0C) ABO HDFN；IgM凝集抗体容易； IgG同种和自身抗体 难 放散酸放散 试剂盒温自身和同种抗体 容易；当高效价的抗体存在 时 放散液有假阳性洋地黄皂苷酸 温自身和同种抗体 洗 涤 消耗 时间乙 醚 放散 温自身和同种抗体红细胞疾病 红细胞增多 红细胞减少红细胞生成减少红细胞破坏过多（溶血性贫血）红细胞丢失过多溶血性贫血 红细胞内在缺陷遗传性红细胞增多症红细胞酶缺乏的贫血珠蛋白生成障碍性贫血异常血红蛋白病阵发性睡眠性血红蛋白尿症 红细胞外来因素免疫溶血性贫血机械性溶血性贫血其它因素引起的溶血性贫血免疫溶血性贫血的分类 自身免疫溶血性贫血 （ AIHA）Warm AIHA (WAIHA)Cold Agglutinin Syndrone (CAS)Mixed-type AIHAParoxysmal Cold Hemoglobinura (PCH)DAT-negative AIHA 同种免疫溶血性贫血Hemolytic Transfusion ReactionHemolytic Disease of the Fetus and Newborn (HDFN) 药物诱发的免疫溶血性贫血Drug-dependentDrug-independent自身免疫溶血性贫血的血清学特征WAIHA CAS Mixed-type AIHA PCHDAT IgGIgG+C3C3C3 only IgG+C3C3C3 only免疫抗体类型IgG IgM IgG,IgM IgG放散液 IgG抗体 没有反应 IgG抗体 没有反应血清 IAT；在 20 C，35%未凝集 IgM凝集抗体，4 C效价 1000 (60%)IgG IAT-反 应 抗体和 IgM凝集抗体在 DLT试验 中IgG双相溶血特异性 广范 围 反 应 ；多种特异性 报 道 通常 为 抗 I 通常未知 抗 P温抗体型自身免疫溶血性贫血 (WAIHA) 发病率1/80000，女性比男性高，年龄多数 40 病因分类网状内皮细胞肿瘤 慢性淋巴瘤 ;霍奇金病 ;非霍奇金淋巴瘤病胶原病 系统性红斑狼疮 ;类风湿性关节炎等免疫性疾病 免疫缺陷综合症 ;低球蛋白血症等胃肠道疾病某些良性肿瘤WAIHA 发病机制免疫调节紊乱 免疫器官对自身红细胞失去识别能力 红细胞膜损伤，改变膜的抗原性WAIHA 诊断标准 临床表现起病慢，数月后才发现贫血，表现为全身虚弱及头昏。各有 1/3患者皮肤粘膜苍白及黄胆，半数以上有脾肿大。 实验室检查1.贫血：程度不一，可暴发急性溶血现象。外周血涂片上可见多量球形细胞及数量不等的幼红细胞，；2.骨髓涂片：呈幼红细胞增生象；3.再生危象：网织红细胞极度减少，骨髓象呈细胞再生障碍，血象呈全细胞减少；4.DAT试验阳性，为抗 IgG和抗 C3型。WAIHA 诊断依据 直抗阳性患者近 4个月无输血或特殊药物服用史，结合临床表现和实验室检查，可诊断为 温抗体型自身免疫溶血性贫血。 直抗阴性但临床表现较符合本病症状，肾上腺皮质激素或切脾术有效，其它溶血性贫血除外，可诊断为抗球蛋白蛋白试验阴性的温抗体型自身免疫溶血性贫血。WAIHA 疗效标准 缓解患者临床症状消失 部分缓解患者临床症状基本消失。血红蛋白量在 80g/L以上，网织红细胞数在 5以下，血清总胆红素测定1000；4.DAT试验阳性，为 C3型PCH 发病机制 以全身或局部受寒冷刺激后突然发生大量血管内溶血和血红蛋白尿为特征，罕见 原发性发病者极为罕见 继发性主要由梅毒特别是先天性梅毒及晚期梅毒静止期所引起，现在此病大多出现于某些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、传染性单核细胞增多症等传染病之后，以儿童居多PCH 诊断标准 临床表现患者多数受寒后即有急性发作，表现为寒战、发热