猪伪狂犬病的pcr诊断_第1页
猪伪狂犬病的pcr诊断_第2页
猪伪狂犬病的pcr诊断_第3页
猪伪狂犬病的pcr诊断_第4页
猪伪狂犬病的pcr诊断_第5页
已阅读5页，还剩16页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验七 猪伪狂犬病 PCR诊断实验目的：1、了解 PCR反应的原理、方法及操作步骤；2、掌握猪伪狂犬病毒 PCR检测的方法；实验内容：1、讲述 PCR反应的原理、方法及操作步骤，2、猪伪狂犬病毒 PCR检测。什么是 PCR？ 聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性 DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。一、 PCR反应的原理、方法及操作步骤PCR原理PCR是一种选择性扩增 DNA或 RNA的方法，其基本原理是依据体内细胞分裂中的 DNA半保留复制机理，以及在体外 DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链 DNA变成单链；单链 DNA与人工合成的引物退火，以及在 dNTP存在下，耐高温的 DNA聚合酶使引物沿单链模板延伸成为双链 DNA。高温变性，低温退火，适温延伸等步反应循环进行，使目的 DNA得以迅速扩增。PCR原理 PCR技术在模板 DNA、 dNTP、 Mg2+、合适Buffer等条件下，用耐热的 Taq聚合酶代替 DNA聚合酶，用合成的 DNA引物代替 RNA引物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸 3个步骤的反复循环 （ 2530次）过程，使目的 DNA呈指数 扩增 。反应程序 变性： 93-94 2min 变性： 93-94 30s 复性： 55-65 30s 延伸： 72 30s 延伸： 72 2min35个循环PCR原理Sample denaturatationPrimer annealingPrimer extensionPCR product标准的 PCR反应体系 10扩增缓冲液 10ul4种 dNTP混合物 各 200umol/L引物 10 100pmol模板 DNA 0.1 2ugTaq DNA聚合酶 2.5uMg2+ 1.5mmol/L加双或三蒸水至 100ul酶及其浓度 目前有两种 Taq DNA 聚合酶供应 天然酶：从栖热水生杆菌中提纯 基因工程酶：大肠菌合成 一个典型的 PCR反应约需酶量 2.5U（ 指总反应体积为 100 ul时） 浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少引物 引物是 PCR特异性反应的关键 PCR 产物的特异性取决于引物与模板 DNA互补的程度 理论上，只要知道任何一段模板 DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，用 PCR就可将模板 DNA在体外大量扩增引物在线设计网址： /cgi-bin/primer/primer3_www.cgiPCR产物分析凝胶电泳分析法 可用琼脂糖（ Agrose）或聚丙烯酰胺（ PAGE）凝胶电泳检测 PCR扩增产物的大小。同时应以标准 DNA分子量作平行对照，凝胶中加入溴化乙锭，电泳后，紫外检测仪下观察结果并拍照。二 猪伪狂犬病毒感染 PCR检测 -
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 辅导培训

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论