细胞培养液的配制

细胞培养液的配制 培养基的选择依据 : 经验、文献、尝试常用 : RPMI1640、 DMEM 培养基的来源市售干粉培养基 -自己配制液体培养基 -直接使用 (注意有效期 ) 培养基的除菌方法过滤除菌 : (1) 正压过滤 -效率高(2) 负压过滤 -效率低高压蒸气灭菌 : 不含谷氨酰胺，灭菌后另外添加 培养基附加成分的添加按使用说明或实验要求添加配制时加 : 碳酸氢钠、抗生素、血清等临用前加 : 生物活性因子如 EGF、 FGF、 NGF、 PDGF等 RPMI1640培养液配制过程 准备物品(1) 不锈钢过滤器 , 滤膜 (0.45m,0.22m), 磁力搅拌器 ,天平 ,烧杯 ,量筒 ,盐水瓶(2) 培养粉 ,1N HCl,NaHCO3,青霉素 ,链霉素 ,胎牛血清 ,新鲜三蒸水 消毒物品滤器中放置 0.45m 和 0.22m 滤膜 , 包装 , 高压蒸气消毒配制步骤 (1) 10.4g/包培养粉溶至 1L三蒸水中 , 磁力搅拌 20min(2) 加 2g NaHCO3/L, 继续搅拌 10min(3) 加青霉素 100U/mL(80万 U溶至 4ml三蒸水 , 取 0.5ml)链霉素 100U/mL(100万 U溶至 5ml三蒸水 , 取 0.5ml)(4) 加 1N HCl约 3mL, 调 pH至 7.2, 继续搅拌(5) 按要求加血清 （血清一般需经 56 ，30min灭活）例如 : 10%胎牛血清无血清培养液 900ml灭活胎牛血清 100ml(6) 正压过滤除菌 (气压适当 , 防止滤膜破裂 )(7) 分装 ,贮存于 4 ， 2周内用完。(8) 无菌试验 : 取样 , 37 放置 24 72h, 无细菌、霉菌污染方可使用注意事项 谷氨酰胺在溶液中很不稳定， ，分解，放置两周以上时，根据需要添加谷氨酰胺。配制 母液（ 200 mmol/L, 即 29.22g/L） , 每 100ml加入 0.5 2 ml母液，终浓度 1 4 mmol/L 抗生素在 37 稳定性维持 3 4d, 可控制轻度污染。防污染重在无菌操作 培养液配制过程（以 RPMI1640为例）1. 物品准备(1）滤器、 微孔滤膜、磁力搅拌器、天平、烧杯、量筒、 pH计、贮液瓶等。(2) 培养粉、 NaHCO3、 1N HCl、青霉素、链霉素、血清、 新鲜制备的三蒸水2. 滤器消毒准备取 孔径为 0.45m 和 0.22m 滤膜各一张，浸入三蒸水中 将浸湿后的滤膜光面向上依次置于滤器上将装有滤膜的滤器包装后高压蒸气消毒3.液体配制 将培养粉倒入容器中 加入 新鲜制备的三蒸水 磁力搅拌器 充分 搅拌 按照实验的具体要求分别加入 NaHCO3和青链霉素（青霉素 100U/mL： 80万 U溶至 4ml三蒸水 , 取 0.5ml； 链霉素100U/mL： 100万 U溶至 5ml三蒸水 , 取 0.5ml) 按要求加入一定比例的血清（血清一般需经56 ， 30min灭活） 例如 : 配制含 10%胎牛血清的 RPMI1640培养液 1升，应加入无血清培养液 900ml灭活胎牛血清 100ml 加入 1N HCl约 3mL,调整 pH至 7.2 7.4磁力搅拌器 充分搅拌准备过滤 无菌条件下装好滤器，检查气体以及液体管道是否通畅。 (一般使用氧气。注意