细菌革兰氏染色

实验二细菌革兰氏染色一、实验目的n 学习微生物制片、染色的基本技术n 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术n 进一步观察细菌的基本形态C.Gram（ 革兰）于 1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。二、实验原理革兰氏染色1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行 初染2、用碘溶液进行 媒染 ，其作用是提高染料和细胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。3、用乙醇或丙酮冲洗进行 脱色 。在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行 复染 。例如沙黄，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色三、实验材料1、菌种：大肠杆菌（ E.C）、枯草杆菌（ B.S）2、染料：结晶紫、复红、碘液等3、材料： 95%酒精等n 涂片 风干 固定 初染 水洗 媒染 水洗 脱色 水洗 复染 水洗 干燥 镜检四、实验方法（一）革兰氏染色菌悬液菌悬液 涂片涂片 干燥干燥滴加无滴加无菌水菌水固定固定取菌苔取菌苔涂片涂片Smear preparation Heat fixingcrystal violet stain wash with water StainingCounterstain with Safranin 注意事项：（ 1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。（ 2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。（ 3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。（ 4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。五、思考题1、讲述革兰氏染色的原理，并指出 E.C和 B.S分别属于革兰氏阳性或阴性？2、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色成败的关键一步是什么？3、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色技术和结果的正确性？实验三真菌形态观察及微生物菌落形态比较 一、实验目的n 学习自制水浸片观察真菌形态的方法n 观察丝状真菌和酵母菌的形态n 比较细菌、真菌和放线菌的菌落形态二、实验原理二、实验原理真菌形态结构比细菌复杂。习惯上，真菌可分为酵母菌和霉菌。霉菌由粗大、有隔或无隔分支状菌丝构成，菌丝分为基内菌丝、气生菌丝。气生菌丝特化结构上产生多种无性、有性孢子，孢子着生部位、排列方式以及孢子形态可作为真菌鉴定的重要依据。1、根霉、根霉 菌丝特化形成假根等特化菌丝菌丝特化形成假根等特化菌丝1、根霉 孢囊孢子（无性繁殖）2、曲霉、青霉 分生孢子（无性繁殖）3、犁头霉 接合孢子（有性繁殖）4、酵母菌 酵母菌是单细胞构造，个体形态多为卵圆形、圆柱形，但有时某些酵母菌可形成假菌丝。酵母菌无性繁殖以出芽方式生殖。微生物的菌落形态微生物的菌落形态菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉眼可见的群体。区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可通过这些特征差异区分和识别。特征描述： 形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等 。微生物在固体培养基上的群体生长细菌菌落特征：细菌菌落特征：凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合不紧密，易挑取，正反颜色一致。酵母菌菌落特征（与细菌相似酵母菌菌落特征（与细菌相似 ) ：比细菌大而厚，不透明，表面光滑、湿润、粘稠，易用针挑起。多呈乳白色 。放线菌菌落特征放线菌菌落特征 :致密、坚硬、多皱、不易用针挑起，不透明。孢子成熟后，表面粉末状，干燥 (常有土腥味 )。三、实验材料1、制片观察：曲霉、根霉、青霉、犁头霉、酿酒酵母2、菌落观察：（ 1）霉菌：曲霉、根霉、青霉、犁头霉（ 2）酵母菌：红酵母、酿酒酵母（ 3）细菌：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（ 4）放线菌： S11、 S14（平板一套可打开用于显微观察，一套不用打开用于菌落形态观察）四、实验方法四、实验方法（一）水浸片观察真菌形态（一）水浸片观察真菌形态1、根霉、曲霉、青霉和犁头霉、根霉、曲霉、青霉和犁头霉 在载玻片上滴加一滴蒸馏水，用接种针以无菌操作方式挑取少