第四章 植物主要组织培养技术（ 5 学时）.pdf

华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授第四章植物主要组织培养技术（5学时）教学目的与要求：掌握植物组织培养的主要技术，特别是茎尖脱毒原理，花药培养获得单倍体以及幼胚培养技术的应用。第一节、植物脱毒及快速繁殖技术一、概念与意义意义：能够有效地保持优良品种的特性；生产无病毒种苗，防止品种退化；快速繁殖新品种，使优良品种迅速应用；节约耕地，提高农产品的商品率；便于运输。目前受病毒危害严生产的有：大物：、。：、大、。：、。花：、种花、currency1、currency1茎、“茎繁殖的物，fifl一产品要用种。：大：种产的”一。：种产的一。：种产的一。、植物的脱毒技术1本原理病毒植物体的有性理：(1)、能病毒植物细胞时DNA要大的能，生组织细胞本，DNA是提能，病毒的要植物提能，得够的能，病毒的。(2)、病毒植物体的主要是的，生组织中，组织，病毒生组织的。(3)、生组织中，生细胞高，滞病毒的侵入或者病毒的。(4)、酶缺乏1969fl，Stace-Smith提出，可能病毒的要的酶系统生组织中缺乏或没建立，病毒无法生组织中。(5)、子1976fl，Martin-Tanguy提出子，认生组织中存华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授有某种子。茎尖脱毒是控植物病毒的有效途径(1)、药物防治病毒病效率低，(2)、抗病毒育种步履艰难(3)、组织培养的高效隔离防治病毒的再侵染2植物脱毒的技术规程*体植株的选择预处理体的选择：欲脱毒材料的品种典型性；外植体康程度选择。预处理：ABC无损伤脱毒区热致死区3840C条件下经两个月处理可除去病毒。花3538C的条件下处理60可使病毒失。37C条件下处理1020能除去卷叶病毒。速衰病毒、黄化病毒40C/30C条件下处理712周。“皮病毒要40C/30C条件下处理8周。啐叶病毒要50C条件下处理322小时。亚洲青病毒50C条件下处理3040钟。*茎尖生组织培养再生植株茎尖生组织培养有两个概念：shoottipshootapex；apicalmeristemapicaldome.生区热处理区生长温度高温华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授*脱毒效检测指示植物鉴定(testplants)所谓指示植物是指有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。血清鉴定(serologictest)试沉淀反应；免疫双扩散；酶联免疫吸附测定(ELISA)。*脱毒苗的保存与繁殖脱毒苗的离体保存与繁殖建立脱毒种苗生产繁殖网络体系木本植物建立隔离的脱毒苗本园3脱毒效的*体材料病毒侵染的程度*起始培养的茎尖大小离体茎尖大小的脱毒效的茎尖(mm)叶原数小植株数脱毒植株数脱毒率（）0.1215024480.272421842.90.646400*外植体的生理状态、离体无性繁殖(propagationinvitro)1离体繁殖的一般技术无菌培养物的建立培养物的增殖:腋芽增殖；定芽增殖；胚状体增殖；愈伤组织增殖生培养生产用苗的培植2离体繁殖的使用范围用于速某难繁殖或繁殖速度低的植物，或某要要速繁殖的特型，花、优良、芽离、工程植株。用于繁殖染病毒的植物，、。用于有性繁殖范围大条件下无性繁殖的植物，洲、花、。华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授3离体繁殖的有：外生节品种典型性的数与增殖的理选择第节、花药及花培养一、概念及意义1概念花药培养外植体是植物性生殖的一，培养法技术讲，于培养的范。花培养的精定义是：处于一定育的花花药中离出，再以离体培养。有时花培养小子培养(microsporeculture)。培养法技术讲，currency1于细胞培养的范。2单倍体植物的特所谓单倍体(haploid)是指有“子体染体数的子体(植物个体)。diploid植物haploidmonoploidfi2n=2x=20n=x=10fl2n=2x=24n=x=122n=2x=18n=x=9tetraploid植物haploiddihaploid2n=4x=48n=2x=24地2n=4x=52n=2x=26hexaploid植物haploidtriploid小2n=6x=42n=3x=21octoploid植物haploidtetraploid2n=8x=56n=4x=28单倍体植物与currency1的倍体，有个的特：体细胞染体数”；生育，体小、小；“子严育，有的能入有性。3单倍体的应用迅速获得型材料，育种fl华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授获得育种中材料与育种可以提高率与细胞，使一育种途径有应用意义工程受体有效用的个Utilizationofhaploidcellline、花药培养花药培养获得单倍体植株的是度学者GuhaMaheshwari(1964,1966)。目前有250种植物花药培养。目前，花药培养获得单倍体的技术途径本物、物、花物的育种中应用。花药培养的本程是：外植体选择外植体(花)预处理外植体毒花药种培养化培养HaploidcelllineMutationinductionandselectionofcellsCellhabridizationGeneticengineeringRegenerationofplantsUtilizationofnewformsinbreedingandcropimprovement华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授1外植体的选择：试材料的试材料的生理状态花的育时四体小子单花双花Sunderland(1971)花育时的培养反应：花育时胚状体率()数0单14单40双552、花药预处理大试，花药培养前一定的低处理是要的。、子35C72小时fl10C10143C5104C48小时低处理的用：可以花细胞产生两个，是一个养一个生殖；保持高的生花，时体细胞组织的衰；花产生原胚；促使细胞步。3培养及培养条件培养花药培养常用的本培养：MS（Murashigc&Skoog，1962）；Nitsch(Nitsch，1969)；N6(朱清，1974)；B5(Gamborgetal.，1976)。附：糖；。花药培养糖浓度的反应糖浓度2346101317率510121825458花药培养常用的有：细胞类：BA6-benzyladenineKTkinetin华中农业大学创建国家精品课程细胞工程学文本教案(第四章)主讲教师：柳俊博士、教授Zeatin生类：NAAnaphthaleneaceticacidIAAindole-3-aceticacid2,4-D2,4-dichlorophenoxyaceticacid2,4高秀云子的：MS2,4-D0.5mgl-1KT1mgl-1n93.8%2n6.2%MS2,4-D2mgl-1KT1mgl-1n64,1%2n35.9%高浓度的2,4-D主要花药愈伤组织，能胚状体，增倍体细胞育的机会。培养条件度光照度：植物度的要求，：20C以下，完能胚状体，且愈伤组织亦少，度提高2125C时便会有胚状体，度提高26以上时完能胚状体。油若种后的花药30条件下培养23，可著提高花胚的率，小33C条件下培养35，可提高愈率绿苗率。光照：后4花药培养中单倍体的途径花药的构：花药壁(2n)、药隔(2n)、花粒(n)培养初花育的途径据Sunderland,、WicksNorreel的，可以把的花育类：(1)、单正常一个生殖、一个养。以后或一个生殖育，或一个养育，或者育。(