0914;李卓—孙小俊;李卫忠;检验结核分枝杆菌及结果分析

检验结核分枝杆菌及结果分析 【摘要】目的 对结核分枝杆菌进行检验，并对检验结果进行分析。方法 挑 选疾病预防控制中心的肺结核痰液标本 60 例，60 例痰液标本均来自本市医院 在 2014 年 1 月2015 年 6 月期间收治的肺结核患者，同时选取同一时间段的非 肺结核肺部疾病患者 60 例痰液标本，将 120 例痰液标本涂片，进行抗酸染色镜 检，采用罗氏培养法对结核杆菌进行培养，在痰液接受碱前处理后，在半个小 时内完成接种，并进行荧光定量 PCR 试验。结果 60 例肺结核患者经荧光定量 PCR 检验的阳性率为 58.33%（35/60），明显高于涂片法的阳性率 23.33%（14/60）及培养法的阳性率 30.00%（18/60），差异存在统计学意义 （即 P0.05）。60 例非肺结核患者三种检验均无阳性患者。结论 荧光定量 PCR 检验结核分枝杆菌具有很大的优势，其阳性率明显高于涂片法和培养法。 【关键词】结核分枝杆菌；涂片法；培养法；荧光定量 PCR；分析 肺结核是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，会侵及许多脏器，其中最为常 见的为肺部结核感染 【1】 。人体在感染结核杆菌后不一定发病，当抵抗力降低 或者细胞介导的变态反应增高时，才可能引起临床发病。如果结核杆菌携带者 能及时诊断并接受合理的治疗，大部分可痊愈 【2】 。所以临床诊断肺结核的准 确性对肺结核患者的预后有很大的影响。笔者就对结核分枝杆菌进行检验，并 对检验结果进行分析，内容如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 挑选疾病预防控制中心的肺结核痰液标本 60 例，60 例痰液标本均来自本市 医院在 2014 年 1 月2015 年 6 月期间收治的肺结核患者，且患者均经影像学检 查确诊为肺结核。同时选取同一时间段的非肺结核肺部疾病患者 60 例痰液标本， 其中 32 例来自肺炎患者，18 例来自支气管扩张患者，10 例来自肺癌患者。 1.2 检验方法 1.2.1 涂片法：将 120 例痰液标本直接涂片，进行抗酸染色镜检。 1.2.2 培养法：采用罗氏培养法对结核杆菌进行培养，在痰液接受碱前处理 后，在半个小时内完成接种。 1.2.3 荧光定量 PCR：根据患者痰液的不同性状，将 4 倍体积的氢氧化钠溶 液，浓度为 40g/L，将痰液液化半个小时，然后去 1ml 痰液进行离心 5 分钟， 转速为 4000r/min，倾出上清液，用生理盐水对沉淀物进行清洗，洗涤两次， 然后在沉淀物中加入 DNA 提取液 50ml，在 100 摄氏度的温度状态下水浴 10min，进行裂解，然后将 2ml 取出作为 PCR 的模板，放置于 93 摄氏度的状态 下 2min，进行预变性，然后 93 摄氏度 30 秒，55 摄氏度 1min，循环 40 次，进 行结果判定。当结果大于 1.0103拷贝时，可判定结果为阳性。 1.3 评价指标 记录三种检验方式肺结核患者痰液标本及非肺结核患者痰液标本的阳性率， 进行比较。 1.4 统计学方法 运用统计学软件包 SPSS16.0 分析处理本次研究中的所有数据，用百分比表 示患者阳性率等计数资料，用卡方检验组间比较，P 小于 0.05 代表差异存在统 计学意义。 2.结果 表 1 三种检验方法的检测结果 检验方法 例数 阳性例数 阳性率 涂片法 60 14 23.33 培养法 60 18 30.00 荧光定量 PCR 60 35 58.33% P 值 - 0.05 0.05 从上表看出，60 例肺结核患者经荧光定量 PCR 检验的阳性率为 58.33%（35/60），明显高于涂片法的阳性率 23.33%（14/60）及培养法的阳性 率 30.00%（18/60），差异存在统计学意义（即 P0.05）。60 例非肺结核患者 三种检验均无阳性患者。 表 2 三种检验结果的相关性 检验方法 例数 荧光定量 PCR+ 相符率 涂+培+ 8 8 100% 涂-培+ 10 10 100% 涂+培- 6 5 83.33% 涂-培- 36 12 33.33% 总计 60 35 58.33% 从上表可看出，涂片检验及培养检验均为阳性的痰液标本与荧光定量 PCR 的 相符率为 100%，涂片检验为阴性但培养检验为阳性的痰液标本与荧光定量 PCR 的相符率为 100%，涂片检验为阳性，培养检验为阴性的痰液标本与荧光定量 PCR 的相符率为 83.33%，涂片检验及培养检验均为阴性的痰液标本与荧光定量 PCR 的相符率为 33.33%。 3.讨论 肺结核患者主要有低热、盗汗、乏力、消瘦、纳差、咳嗽、咯血、胸痛等临 床症状，严重影响患者的生活质量。临床一般对患者的痰液进行检验，以区分 鉴别其他肺部疾病 【3】 。早期临床一般采用涂片、集菌的方法，进行抗酸染色 检出阳性玢病菌，也可进行结核菌的培养、动物接种，但所需要的时间较长。 临床发现，直接涂片进行抗酸染色检验的敏感性，仅为 30%左右，阳性率较 低，检验结果可靠性差，涂片法只对抗酸杆菌菌体的敏感性较强，但对于死菌 还是活菌比较难鉴别。而罗氏培养法，需要的时间长，一般为 8 至 12 周，且需 要活菌才能生长，与现代的快速检验不符，但罗氏培养法依然可以做菌种鉴定、 药物敏感性等试验 【4】 。 荧光定量 PCR 试验是通过荧光染料或者荧光标记的特异性探针，对放大扩增 的 DNA 分子进行标记跟踪，实时监控聚合酶链反应过程 【5】 。在扩增之前，将 荧光标记导入 DNA 分子内，在扩增过程中，每增加一条 DNA 链，就会出现一个 荧光分子标记物，当数量达到一定量时，阳性明显，所以荧光定量 PCR 具有较 高的阳性检出率。 本次研究结果显示，荧光定量 PCR 的阳性检出率明显高于涂片法及培养法， 说明荧光定量 PCR 试验在肺结核鉴别诊断中具有很大的应用价值。 参考文献 1徐三.结核分枝杆菌的检验与分型J.中国卫生产业,2012,09(7):34. 2梁汉彰.结核患者的结核分枝杆菌检验和分型J.中国实用医药,2013,8(17): 105-106. 3徐懿.检验结核分枝杆菌及结果分析J.