手足口病预防控制指南(2009版)

手 足 口 病 预 防 控 制 指 南 （ 2009 版 ） 手 足 口 病 （ Hand-foot-mouth Disease, HFMD） 是 由 多 种 人 肠 道 病 毒 引 起 的 一 种 儿 童 常 见 传 染 病 ， 是 我 国 法 定 报 告 管 理 的 丙 类 传 染 病 。 大 多 数 患 者 症 状 轻 微 ， 以 发 热 和 手 、 足 、 口 腔 等 部 位 的 皮 疹 或 疱 疹 为 主 要 症 状 。 少 数 患 者 可 出 现 无 菌 性 脑 膜 炎 、 脑 炎 、 急 性 弛 缓 性 麻 痹 、 神 经 源 性 肺 水 肿 和 心 肌 炎 等 ， 个 别 重 症 患 儿 病 情 进 展 快 ， 可 导 致 死 亡 。 手 足 口 病 常 出 现 暴 发 或 流 行 ， 为 指 导 各 地 做 好 手 足 口 病 的 预 防 控 制 工 作 ， 制 定 本 指 南 。 一 、 目 的 （ 一 ） 指 导 医 疗 机 构 、 疾 病 预 防 控 制 机 构 开 展 疫 情 报 告 与 监 测 。 （ 二 ） 指 导 疾 病 预 防 控 制 机 构 开 展 流 行 病 学 调 查 、 病 原 学 监 测 。 （ 三 ） 指 导 疾 病 预 防 控 制 机 构 、 医 疗 机 构 开 展 重 点 场 所 及 公 众 预 防 控 制 工 作 。 二 、 疾 病 概 述 （ 一 ） 病 原 学 。 引 起 手 足 口 病 的 病 毒 属 于 小 RNA 病 毒 科 肠 道 病 毒 属 ， 包 括 柯 萨 奇 病 毒 A 组 （ Coxasckievirus A, CVA） 的 2、 4、 5、 7、 9、 10、 16 型 等 ， B 组 （ Coxasckievirus B, CVB)的 1、 2、 3、 4、 5 型 等 ； 肠 道 病 毒 71 型 （ Human Enterovirus 71, EV71） ； 埃 可 病 毒 （ Echovirus, ECHO） 等 。 其 中 以 EV71 及 CVA16 型 较 为 常 见 。 肠 道 病 毒 适 合 在 湿 、 热 的 环 境 下 生 存 与 传 播 ，75%酒 精 和 5%来 苏 不 能 将 其 灭 活 ， 对 乙 醚 、 去 氯 胆 酸 盐 等 不 敏 感 ； 对 紫 外 线 和 干 燥 敏 感 ， 各 种 氧 化 剂(高 锰 酸 钾 、 漂 白 粉 等 )、 甲 醛 、 碘 酒 以 及 56 30 分 钟 可 以 灭 活 病 毒 。 病 毒 在 4 可 存 活 1 年 ， -20 可 长 期 保 存 ， 在 外 环 境 中 可 长 期 存 活 。 （ 二 ） 流 行 病 学 。 1 传 染 源 。 人 是 人 肠 道 病 毒 的 唯 一 宿 主 ， 患 者 和 隐 性 感 染 者 均 为 本 病 的 传 染 源 ， 隐 性 感 染 者 难 以 鉴 别 和 发 现 。 发 病 前 数 天 ， 感 染 者 咽 部 与 粪 便 就 可 检 出 病 毒 ， 通 常 以 发 病 后 一 周 内 传 染 性 最 强 。 2 传 播 途 径 。 肠 道 病 毒 可 经 胃 肠 道 （ 粪-口 途 径 ） 传 播 ， 也 可 经 呼 吸 道 （ 飞 沫 、 咳 嗽 、 打 喷 嚏 等 ） 传 播 ， 亦 可 因 接 触 患 者 口 鼻 分 泌 物 、 皮 肤 或 粘 膜 疱 疹 液 及 被 污 染 的 手 及 物 品 等 造 成 传 播 。 尚 不 能 明 确 是 否 可 经 水 或 食 物 传 播 。 3 易 感 性 。 人 对 人 肠 道 病 毒 普 遍 易 感 。 不 同 年 龄 组 均 可 感 染 发 病 ， 以5 岁 及 以 下 儿 童 为 主 ， 尤 以 3 岁 及 以 下 儿 童 发 病 率 最 高 。 显 性 感 染 和 隐 性 感 染 后 均 可 获 得 特 异 性 免 疫 力 ， 产 生 的 中 和 抗 体 可 在 体 内 存 留 较 长 时 间 ， 对 同 血 清 型 病 毒 产 生 比 较 牢 固 的 免 疫 力 ， 但 不 同 血 清 型 间 鲜 有 交 叉 免 疫 。 4 流 行 特 征 。 该 病 流 行 无 明 显 的 地 区 性 ， 全 年 均 可 发 生 ， 一 般5-7 月 为 发 病 高 峰 。 托 幼 机 构 等 易 感 人 群 集 中 单 位 可 发 生 暴 发 。 肠 道 病 毒 传 染 性 强 、 隐 性 感 染 比 例 大 、 传 播 途 径 复 杂 、 传 播 速 度 快 ， 控 制 难 度 大 ， 容 易 出 现 暴 发 和 短 时 间 内 较 大 范 围 流 行 。 （ 三 ） 临 床 表 现 。 手 足 口 病 潜 伏 期 为 2-10 天 ， 平 均 3-5 天 ， 病 程 一 般 为 7-10 天 。 急 性 起 病 ， 发 热 ， 口 腔 粘 膜 出 现 散 在 疱 疹 ， 手 、 足 和 臀 部 出 现 斑 丘 疹 、 疱 疹 ， 疱 疹 周 围 可 有 炎 性 红 晕 ， 疱 内 液 体 较 少 。 可 伴 有 咳 嗽 、 流 涕 、 食 欲 不 振 等 症 状 。 部 分 患 者 无 发 热 ， 仅 表 现 为 皮 疹 或 疱 疹 。 一 般 预 后 良 好 ； 少 数 病 例 ， 特 别 是 EV71 感 染 患 儿 ， 可 出 现 脑 膜 炎 、 脑 炎 、 脑 脊 髓 炎 、 神 经 源 性 肺 水 肿 、 循 环 障 碍 等 ， 病 情 凶 险 ， 可 致 死 亡 或 留 有 后 遗 症 。 （ 四 ） 治 疗 原 则 。 目 前 无 特 异 性 治 疗 方 法 ， 以 支 持 疗 法 为 主 ， 绝 大 多 数 患 者 可 自 愈 。 目 前 尚 无 特 异 性 的 疫 苗 。 病 例 的 治 疗 方 法 参 考 卫 生 部 手 足 口 病 诊 疗 指 南 （ 2008 年 版 ） 。 三 、 病 例 定 义 （ 一 ） 临 床 诊 断 病 例 。 在 流 行 季 节 发 病 ， 常 见 于 学 龄 前 儿 童 ， 婴 幼 儿 多 见 。 1 普 通 病 例 ： 发 热 伴 手 、 足 、 口 、 臀 部 皮 疹 ， 部 分 病 例 可 无 发 热 。 2 重 症 病 例 ： 出 现 神 经 系 统 受 累 、 呼 吸 及 循 环 功 能 障 碍 等 表 现 ， 实 验 室 检 查 可 有 外 周 血 白 细 胞 增 高 、 脑 脊 液 异 常 、 血 糖 增 高 ， 脑 电 图 、 脑 脊 髓 磁 共 振 、 胸 部X 线 、 超 声 心 动 图 检 查 可 有 异 常 。 2 极 少 数 重 症 病 例 皮 疹 不 典 型 ， 临 床 诊 断 困 难 ， 需 结 合 实 验 室 检 测 做 出 诊 断 。 若 无 皮 疹 ， 临 床 不 宜 诊 断 为 手 足 口 病 。 （ 二 ） 实 验 室 确 诊 病 例 。 临 床 诊 断 病 例 符 合 下 列 条 件 之 一 者 ， 即 可 诊 断 为 实 验 室 确 诊 病 例 ： 1 自 咽 拭 子 或 咽 喉 洗 液 、 粪 便 或 肛 拭 子 、 脑 脊 液 、 疱 疹 液 、 血 清 以 及 脑 、 肺 、 脾 、 淋 巴 结 等 组 织 标 本 中 分 离 到 人 肠 道 病 毒 （ 指 包 括 CVA16 和 EV71 等 有 明 确 证 据 表 明 可 以 导 致 手 足 口 病 的 人 肠 道 病 毒 ）。 2 自 咽 拭 子 或 咽 喉 洗 液 、 粪 便 或 肛 拭 子 等 标 本 中 检 测 到CVA16 或 EV71 特 异 性 核 酸 ， 或 从 脑 脊 液 、 疱 疹 液 、 血 清 以 及 脑 、 肺 、 脾 、 淋 巴 结 等 组 织 标 本 等 标 本 中 检 测 到 人 肠 道 病 毒 （ 指 包 括CVA16 和 EV71 等 有 明 确 证 据 表 明 可 以 导 致 手 足 口 病 的 人 肠 道 病 毒 ） 的 特 异 性 核 酸 。 3 血 清 标 本 人 肠 道 病 毒 型 特 异 性 中 和 抗 体 滴 度 1 256， 或 急 性 期 与 恢 复 期 血 清 肠 道 病 毒 特 异 性 中 和 抗 体 有4 倍 或 4 倍 以 上 的 升 高 。 （ 三 ） 聚 集 性 病 例 。 1 周 内 ， 同 一 托 幼 机 构 或 学 校 等 集 体 单 位 发 生5 例 及 以 上 手 足 口 病 病 例 ； 或 同 一 班 级 （ 或 宿 舍 ） 发 生2 例 及 以 上 手 足 口 病 病 例 ； 或 同 一 自 然 村 发 生 3 例 及 以 上 手 足 口 病 病 例 ； 或 同 一 家 庭 发 生 2 例 及 以 上 手 足 口 病 病 例 。 四 、 疾 病 监 测 （ 一 ） 疫 情 报 告 。 1 个 案 报 告 。 各 级 各 类 医 疗 机 构 应 按 照 中 华 人 民 共 和 国 传 染 病 防 治 法 和 传 染 病 信 息 报 告 管 理 规 范 的 有 关 规 定 ， 对 符 合 病 例 定 义 的 手 足 口 病 病 例 进 行 报 告 。 如 为 重 症 病 例 ， 请 在 “重 症 患 者 ”处 选 择 “是 ”； 如 为 实 验 室 诊 断 病 例 ， 请 在 “实 验 室 结 果 ”处 选 择 相 应 的 肠 道 病 毒 病 原 学 分 型 信 息 。 实 行 网 络 直 报 的 医 疗 机 构 应 于 24 小 时 内 进 行 网 络 直 报 ， 未 实 行 网 络 直 报 的 医 疗 机 构 应 于24 小 时 之 内 寄 送 出 传 染 病 报 告 卡 。 2 聚 集 性 病 例 报 告 。 托 幼 机 构 和 学 校 、 医 疗 机 构 发 现 手 足 口 病 聚 集 性 病 例 时 ， 应 以 最 快 的 方 式 向 县 （ 区 ） 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 报 告 。 3. 突 发 公 共 卫 生 事 件 报 告 。 局 部 地 区 或 集 体 单 位 发 生 流 行 或 暴 发 时 ， 按 照 突 发 公 共 卫 生 事 件 应 急 条 例 、 全 国 突 发 公 共 卫 生 事 件 应 急 预 案 、 突 发 公 共 卫 生 事 件 与 传 染 病 疫 情 监 测 信 息 报 告 管 理 办 法 及 有 关 规 定 ， 及 时 进 行 突 发 公 共 卫 生 事 件 信 息 报 告 。 （ 二 ） 病 原 学 监 测 。 各 省 区 市 卫 生 行 政 部 门 要 组 织 医 疗 卫 生 机 构 开 展 病 原 学 监 测 ， 了 解 病 原 动 态 分 布 变 化 。 所 有 重 症 和 死 亡 病 例 均 需 采 样 。 此 外 ， 以 县 （ 区 ） 为 单 位 ， 每 月 最 少 需 采 集5 例 首 次 就 诊 的 普 通 病 例 标 本 ； 当 月 县 （ 区 ） 病 例 总 数 少 于5 例 时 ， 全 部 采 样 。 以 省 （ 区 、 市 ） 为 单 位 ,在 手 足 口 病 流 行 年 份 中 每 年 至 少 采 集 20 对 EV71 和 10 对 CVA16 感 染 的 手 足 口 病 患 儿 的 双 份 血 清 ,以 阐 明 和 分 析 EV71 和 CVA16 感 染 后 IgG 和 IgM 抗 体 的 动 态 变 化 ， 评 价 血 清 学 抗 体 试 剂 盒 的 敏 感 性 和 特 异 性 。 以 省 （ 区 、 市 ） 为 单 位 ， 每 月 至 少 从 手 足 口 病 病 例 中 分 离10 株 毒 株 并 做 血 清 型 别 鉴 定 ， 鉴 定 完 成 后 并 将 毒 株 及 鉴 定 结 果 于 5 个 工 作 日 内 报 送 至 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 。 具 备 测 序 条 件 的 省 份 ， 可 开 展VP1 基 因 序 列 测 定 和 分 析 ， 进 行 基 因 定 型 ， 序 列 测 定 完 成 后 将 序 列 结 果 于5 个 工 作 日 内 报 送 至 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 ； 不 具 备 测 序 条 件 者 ， 将 毒 株 送 至 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 进 行 序 列 测 定 ， 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 要 于28 个 工 作 日 内 反 馈 基 因 定 型 结 果 。 所 有 病 例 的 采 样 均 由 医 疗 机 构 完 成 ， 及 时 送 至 县 （ 区 ） 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 或 指 定 的 检 测 机 构 检 测 。 检 测 机 构 将 实 验 室 检 测 结 果 于 24 小 时 内 反 馈 给 县 （ 区 ） 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 ； 县 （ 区 ） 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 接 到 结 果 后 ， 于24 小 时 内 对 检 测 病 例 的 传 染 病 报 告 卡 信 息 进 行 订 正 ， 将 其 病 例 类 型 订 正 为“实 验 室 诊 断 ”， 并 在 “实 验 室 结 果 ”处 补 填 肠 道 病 毒 病 原 学 分 型 信 息 。 各 种 标 本 采 集 和 检 测 方 法 详 见 手 足 口 病 标 本 采 集 及 检 测 技 术 方 案 （ 附 件 1） 。 （ 三 ） 监 测 信 息 分 析 与 反 馈 。 3 各 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 要 每 日 对 网 络 直 报 系 统 进 行 浏 览 ， 及 时 对 报 告 的 病 例 进 行 审 核 、 查 重、 订 正 等 工 作 ， 定 期 对 监 测 数 据 进 行 分 析 ， 判 断 发 病 趋 势 ， 发 现 异 常 升 高 或 病 例 呈 聚 集 性 分 布 或 出 现 重 症 及 死 亡 病 例 时 ， 要 及 时 核 实 并 向同 级 卫 生 行 政 部 门 及 上 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 报 告 ， 并 定 期 向 下 级 疾 病 预 防 控 制 机 构 和 医 疗 机 构 反 馈 疫 情 分 析 信 息 。 五 、 预 防 控 制 （ 一 ） 现 场 调 查 处 置 。 发 现 手 足 口 病 聚 集 性 病 例 、 重 症 或 死 亡 时 ， 县 （ 区 ） 级 及 以 上 疾 病 预 防 控 制 机 构 要 立 即 组 织 开 展 现 场 调 查 处 置 。 1 流 行 病 学 调 查 。 （ 1） 聚 集 性 病 例 调 查 ： 了 解 聚 集 性 病 例 的 临 床 表 现 、 流 行 特 征 ， 以 分 析 流 行 因 素 ， 为 采 取 防 控 措 施 提 供 依 据 。 要 对 首 发 或 指 示 病 例 开 展 流 行 病 学 调 查 ， 填 写 手 足 口 病 个 案 调 查 表 （ 附 件 2） 。 （ 2） 重 症 或 死 亡 病 例 调 查 ： 详 细 了 解 病 例 的 基 本 信 息 、 临 床 症 状 、 发 病 就 诊 治 疗 过 程 、 感 染 传 播 情 况 、 病 原 检 测 结 果 ， 以 分 析 重 症 及 死 亡 病 例 的 主 要 危 险 因 素 ， 填 写 手 足 口 病 重 症 或 死 亡 病 例 个 案 调 查 表 （ 附 件 3） 。 调 查 结 束 后 ， 各 省 级 疾 病 预 防 控 制 中 心 应 将 结 果 录 入 统 一 数 据 库 ， 报 送 中 国 疾 病 预 防 控 制 中 心 。 （ 3） 专 题 调 查 ： 根 据 当 地 手 足 口 病 疫 情 特 点 及 流 行 特 征 ， 可 开 展 专 题 调 查 ， 以 了 解 当 地 的 主 要 传 播 方 式 以 及 感 染 危 险 因 素 等 ， 为 制 定 干 预 措 施 提 供 依 据 。 专 题 调 查 的 方 案 及 其 内 容 ， 应 根 据 调 查 目 的 专 门 设 计 。 （ 4） 医 疗 机 构 要 协 助 疾 病 预 防 控 制 机 构 对 病 例 进 行 流 行 病 学 调 查 。 2 传 染 源 的 管 理 。 患 儿 应 及 时 就 医 ， 并 遵 医 嘱 采 取 居 家 或 住 院 方 式 进 行 治 疗 。 居 家 患 儿 ， 家 长 或 监 护 人 应 在 社 区 （ 村 ） 医 生 的 指 导 下 ， 密 切 关 注 患 儿 的 病 情 变 化 ， 如 发 现 神 经 系 统 、 呼 吸 系 统 、 循 环 系 统 等 相 关 症 状 时 ， 应 立 即 送 医 院 就 诊 ， 同 时 ， 要 尽 量 避 免 与 其 他 儿 童 接 触 。 住 院 患 儿 应 在 指 定 区 域 内 接 受 治 疗 ， 防 止 与 其 他 患 儿 发 生 交 叉 感 染 。 管 理 时 限 为 自 患 儿 被 发 现 起 至 症 状 消 失 后 1 周 。 乡 镇 卫 生 院 /社 区 卫 生 服 务 中 心 、 村 卫 生 室 /社 区 卫 生 服 务 站 等 负 责 本 辖 区 居 家 治 疗 的 手 足 口 病 患 儿 的 随 访 工 作 ， 掌 握 居 家 治 疗 患 儿 的 病 情 进 展 情 况 。 3 标 本 采 集 和 检 测 。 （ 1） 所 有 重 症 和 死 亡 病 例 均 要 采 集 标 本 ， 可 以 采 集 咽 拭 子 、 粪 便 或 肛 拭 子 、 疱 疹 液 、 脑 脊 液 、 血 清 等 ， 死 亡 病 例 还 可 采 集 脑 、 肺 、 肠 淋 巴 结 等 组 织 标 本 。 聚 集 性 病 例 至 少 要 采 集2 例 病 例 标 本 开 展 病 原 学 检 测 。 （ 2） 医 疗 机 构 负 责 样 本 采 集 ， 疾 病 预 防 控 制 机 构 应 指 导 医 疗 机 构 进 行 相 关 生 物 学 标 本 的 采 集 。 （ 3） 疾 病 预 防 控 制 机 构 根 据 本 地 的 技 术 能 力 ， 对 采 集 的 标 本 开 展 核 酸 检 测 、 病 毒 分 离 ； 不 具 备 技 术 条 件 时 ， 及 时 送 上 级 机 构 进 行 检 测 （ 附 件 1） 。 4 消 毒 措 施 。 病 家 、 托 幼 机 构 和 小 学 的 消 毒 应 在 当 地 疾 病 预 防 控 制 机 构 的 指 导 下 ， 由 单 位 及 时 进 行 消 毒 ， 或 由 当 地 疾 病 预 防 控 制 机 构 负 责 对 其 进 行 消 毒 处 理 。 医 疗 机 构 的 消 毒 由 医 疗 机 构 安 排 专 人 进 行 。 消 毒 方 法 参 见 消 毒 技 术 规 范 （ 2002 版 ） 和 手 足 口 病 疫 源 地 消 毒 指 南 （ 附 件 4） 。 5 健 康 教 育 。 各 级 医 疗 卫 生 机 构 应 在 政 府 领 导 下 ， 与 当 地 教 育 、 宣 传 、 广 电 等 部 门 密 切 合 作 ， 充 分 利 用12320 公 共 卫 生 公 益 热 线 、 广 播 、 电 视 、 报 纸 、 网 络 、 手 机 短 信 、 宣 传 单/宣 传 画 等 多 种 方 式 ， 开 展 手 足 口 病 防 治 知 识 的 宣 传 工 作 ， 使5 岁 以 下 儿 童 家 长 及 托 幼 机 构 工 作 人 员 等 了 解 手 足 口 病 的 临 床 症 状 ， 掌 握 最 基 本 的 预 防 措 施 ， 强 调 保 持 良 好 的 个 人 卫 生 习 惯 及 环 境 卫 生 措 施 对 于 有 效 预 防 手 足 口 病 的 重 要 性 ， 动 员 托 幼 机 构 老 师 和 管 理 人 员 、 儿 童 家 长 成 为 手 足 口 病 防 控 工 作 的 主 动 参 与 者 ， 形 成 群 防 群 控 。 与 重 症 或 死 亡 病 例 发 病 前1 周 或 发 病 后 有 共 同 生 活 、 居 住 史 的 5 岁 以 下 儿 童 ， 要 对 其 家 长 或 监 护 人 进 行 健 康 教 育 ， 做 好 儿 童 的密 切 观 察 ， 出 现 症 状 要 及 时 就 诊 和 治 疗 。 （ 二 ） 重 点 人 群 及 重 点 机 构 的 预 防 控 制 措 施 。 为 降 低 人 群 手 足 口 病 的 发 病 率 ， 减 少 聚 集 性 病 例 ， 避 免 医 院 感 染 ， 各 地 要 做 好 以 散 居 儿 童 为 主 的 重 点 人 群 和 以 托 幼 机 构 、 医 疗 机 构 为 主 的 重 点 场 所 的 预 防 控 制 工 作 。 1 散 居 儿 童 的 预 防 控 制 措 施 。 （ 1） 饭 前 便 后 、 外 出 回 家 后 要 用 肥 皂 或 洗 手 液 等 给 儿 童 洗 手 ； 看 护 人 接 触 儿 童 前 、 替 幼 童 更 换 尿 布 、 处 理 粪 4 便 后 均 要 洗 手 ； （ 2） 婴 幼 儿 的 尿 布 要 及 时 清 洗 、 曝 晒 或 消 毒 ； 注 意 保 持 家 庭 环 境 卫 生 ， 居 室 要 经 常 通 风 ， 勤 晒 衣 被 ； （ 3） 婴 幼 儿 使 用 的 奶 瓶 、 奶 嘴 及 儿 童 使 用 的 餐 具 使 用 前 后 应 充 分 清 洗 、 消 毒 ； 不 要 让 儿 童 喝 生 水 、 吃 生 冷 食 物 ； （ 4） 本 病 流 行 期 间 不 宜 带 儿 童 到 人 群 聚 集 、 空 气 流 通 差 的 公 共 场 所 ； 避 免 接 触 患 病 儿 童 ； （ 5） 儿 童 出 现 发 热 、 出 疹 等 相 关 症 状 要 及 时 到 医 疗 机 构 就 诊 ； （ 6） 居 家 治 疗 的 患 儿 避 免 与 其 他 儿 童 接 触 ， 以 减 少 交 叉 感 染 ； 父 母 要 及 时 对 患 儿 的 衣 物 进 行 晾 晒 或 消 毒 ， 对 患 儿 粪 便 及 时 进 行 消 毒 处 理 。 2 托 幼 机 构 预 防 控 制 措 施 。 （ 1） 每 日 进 行 晨 检 ， 发 现 可 疑 患 儿 时 ， 要 采 取 立 即 送 诊 、 居 家 观 察 等 措 施 ； 对 患 儿 所 用 的 物 品 要 立 即 进 行 消 毒 处 理 ； （ 2） 出 现 重 症 或 死 亡 病 例 ， 或 1 周 内 同 一 班 级 出 现 2 例 及 以 上 病 例 ， 建 议 病 例 所 在 班 级 停 课 10 天 ； 1 周 内 累 计 出 现 10 例 及 以 上 或 3 个 班 级 分 别 出 现 2 例 及 以 上 病 例 时 ， 经 风 险 评 估 后 ， 可 建 议 托 幼 机 构 停 课10 天 ； （ 3） 教 育 、 指 导 儿 童 养 成 正 确 洗 手 等 良 好 的 卫 生 习 惯 ； 老 师 要 保 持 良 好 的 个 人 卫 生 状 况 ； （ 4） 教 室 和 宿 舍 等 场 所 要 保 持 良 好 通 风 ； 定 期 对 玩 具 、 儿 童 个 人 卫 生 用 具 （ 水 杯 、 毛 巾 等 ）、 餐 具 等 物 品 进 行 清 洗 消 毒 ； （ 5） 定 期 对 活 动 室 、 寝 室 、 教 室 、 门 把 手 、 楼 梯 扶 手 、 桌 面 等 物 体 表 面 进 行 擦 拭 消 毒 ； （ 6） 托 幼 机 构 应 每 日 对 厕 所 进 行 清 扫 、 消 毒 ， 工 作 人 员 应 戴 手 套 ， 工 作 结 束 后 应 立 即 洗 手 ； （ 7） 托 幼 机 构 应 配 合 卫 生 部 门 采 取 手 足 口 病 防 控 措 施 。 3 医 疗 机 构 的 预 防 控 制 措 施 。 （ 1） 各 级 医 疗 机 构 应 加 强 预 检 分 诊 ， 专 辟 诊 室 （ 台 ） 接 诊 发 热 、 出 疹 的 病 例 。 增 加 候 诊 及 就 诊 等 区 域 的 清 洁 消 毒 频 次 ， 室 内 清 扫 时 应 采 用 湿 式 清 洁 方 式 ； （ 2） 医 务 人 员 在 诊 疗 、 护 理 每 一 位 病 例 后 ， 均 应 认 真 洗 手 或 对 双 手 消 毒 ， 或 更 换 使 用 一 次 性 手 套 ； （ 3） 诊 疗 、 护 理 手 足 口 病 病 例 过 程 中 所 使 用 的 非 一 次 性 仪 器 、 体 温 计 及 其 他 物 品 等 要 及 时 消 毒 ； （ 4） 对 住 院 患 儿 使 用 过 的 病 床 及 桌 椅 等 设 施 和 物 品 必 须 消 毒 后 才 能 继 续 使 用 ； （ 5） 患 儿 的 呼 吸 道 分 泌 物 和 粪 便 及 其 污 染 的 物 品 要 进 行 消 毒 处 理 。 附 件 ： 1 手 足 口 病 标 本 采 集 及 检 测 技 术 方 案 2 手 足 口 病 个 案 调 查 表 3 手 足 口 病 重 症 或 死 亡 病 例 个 案 调 查 表 4 手 足 口 病 疫 源 地 消 毒 指 南 5 附 件 1 手 足 口 病 标 本 采 集 及 检 测 技 术 方 案 一 、 采 集 标 本 的 种 类 、 保 存 和 运 输 （ 一 ） 粪 便 标 本 。 采 集 病 人 发 病 3 日 内 的 粪 便 标 本 ， 用 于 病 原 检 测 。 粪 便 标 本 采 集 量5-8g/份 ， 采 集 后 立 即 放 入 无 菌 采 便 管 内 ，外 表 贴 上 带 有 唯 一 识 别 号 码 的 标 签 ， 4 暂 存 12 小 时 内 送 达 实 验 室 ， -20 以 下 低 温 冷 冻 保 藏 ， 需 长 期 保 存 的 标 本 存 于-70 冰 箱 。 （ 二 ） 咽 拭 子 标 本 。 采 集 病 人 发 病 3 日 内 的 咽 拭 子 标 本 ， 用 于 病 原 检 测 。 用 专 用 采 样 棉 签 ， 适 度 用 力 拭 抹 咽 后 壁 和 两 侧 扁 桃 体 部 位 ， 应 避 免 触 及 舌 部 ； 迅 速 将 棉 签 放 入 装 有 3-5ml 保 存 液 （ 含 5%牛 血 清 维 持 液 或 生 理 盐 水 ， 推 荐 使 用 维 持 液 ） 的 15ml 外 螺 旋 盖 采 样 管 中 ， 在 靠 近 顶 端 处 折 断 棉 签 杆 ， 旋 紧 管 盖 并 密 封 ， 以 防 干 燥， 外 表 贴 上 带 有 唯 一 识 别 号 码 的 标 签。 4 暂 存 并 在 12 小 时 内 送 达 实 验 室 ， -20 以 下 低 温 冷 冻 保 藏 ， 需 长 期 保 存 的 标 本 存 于-70 冰 箱 。 （ 三 ） 血 清 标 本 。 各 省 （ 区 、 市 ） 在 手 足 口 病 流 行 年 份 中 均 应 采 集EV71 和 CVA16 感 染 的 手 足 口 病 患 儿 的 双 份 血 清 。采 集 急 性 期 （ 发 病 0-7d） 和 恢 复 期 （ 发 病 14-30d） 双 份 配 对 血 清 用 于 阐 明 和 分 析 EV71 和 CVA16 感 染 后 IgG 和 IgM 抗 体 的 动 态 变 化 ， 评 价 血 清 学 抗 体 试 剂 盒 的 敏 感 性 和 特 异 性 。静 脉 采 集 3-5ml 全 血 ， 置 于 真 空 无 菌 采 血 管 中 ， 自 凝 后 ， 分 离 血 清 ，将 血 清 移 到 2ml 外 螺 旋 的 血 清 保 存 管 中 ， 外 表 贴 上 带 有 唯 一 识 别 号 码 的 标 签 。将 血 清 置 于 -20 以 下 冰 箱 中 冷 冻 保 存 。 （ 四 ） 疱 疹 液 。 在 手 足 口 病 的 实 验 室 诊 断 中 ， 从 疱 疹 液 中 分 离 到 病 毒即 可 确 诊 该 病 毒 为 病 因 ， 可 同 时 采 集 多 个 疱 疹 作 为 一 份 标 本 。 先 用 75%的 酒 精 对 疱 疹 周 围 的 皮 肤 进 行 消 毒 ， 然 后 用 消 毒 针 将 疱 疹 挑 破 用 棉 签 蘸 取 疱 疹 液 ， 迅 速 将 棉 签 放 入 内 装 有3- 5ml 保 存 液 （ 含 5%牛 血 清 维 持 液 或 生 理 盐 水 ， 推 荐 使 用 维 持 液 ） 的 采 样 管 中 ， 在 靠 近 顶 端 处 折 断 棉 签 杆 ， 旋 紧 管 盖 并 密 封 ， 采 样 管 外 表 贴 上 带 有 唯 一 识 别 号 码 的 标 签。 所 采 集 标 本 4 暂 存 立 即 （ 12h 内 ） 送 达 实 验 室 ， 20 以 下 低 温 冷 冻 保 藏 ， 需 长 期 保 存 的 标 本 存 于 70 冰 箱 。 （ 五 ） 肛 拭 子 标 本 。 采 集 病 人 发 病 3 日 内 的 肛 拭 子 标 本 ， 用 于 病 原 检 测 。 用 专 用 采 样 棉 签 ， 从 患 儿 肛 门 轻 轻 插 入 ， 适 度 用 力 弧 型 左 右 擦 拭 数 下 ， 拔 出 后 ,迅 速 将 棉 签 放 入 装 有 3 5ml 保 存 液 （ 含 5%牛 血 清 细 胞 维 持 液 ） 的 15ml 外 螺 旋 的 采 样 管 中 ， 采 样 管 外 表 贴 上 带 有 唯 一 识 别 号 码 的 标 签 。 在 靠 近 顶 端 处 折 断 棉 签 杆 ， 旋 紧 管 盖 ， 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。 （ 六 ） 尸 检 标 本 。 采 集 脑 、 肺 和 肠 淋 巴 结 等 重 要 组 织 标 本 ， 每 一 采 集 部 位 分 别 使 用 单 独 的 消 毒 器 械 。 每 种 组 织 应 多 部 位 取 材 ， 每 部 位 应 取 2-3 份 约 5-10g 的 组 织 ， 淋 巴 结 2 个 ， 分 别 置 于 15ml-50ml 无 菌 的 有 外 螺 旋 盖 的 冻 存 管 中 ， 采 样 管 外 表 贴 上 带 有 唯 一 识 别 号 码 的 标 签 。 （ 七 ） 脑 脊 液 标 本 。 出 现 神 经 系 统 症 状 的 病 例 ， 可 采 集 脑 脊 液 标 本 ， 进 行 病 毒 分 离 或 核 酸 检 测 。 采 集 时 间 为 出 现 神 经 系 统 症 状 后 3 天 内 ， 采 集 量 为 1.0-2.0ml。 采 集 后 立 即 装 入 无 菌 带 垫 圈 的 冻 存 管 中 ，4 暂 存 立 即 (12h 内 )送 达 实 验 室 ， 20 以 下 低 温 冷 冻 保 藏 ， 需 长 期 保 存 的 标 本 存 于 70 冰 箱 。 但 EV71 感 染 神 经 系 统 时 ， 很 难 在 脑 脊 液 中 检 测 到 EV71 病 原 。 临 床 标 本 在 运 输 和 贮 存 过 程 中 要 避 免 反 复 冻 融 。 标 本 采 集 后 要 全 程 冷 藏 或 冷 冻 保 存 和 运 输 ，12 小 时 内 送 达 实 验 室 。 依 照 人 间 传 染 的 病 原 微 生 物 名 录 ， 肠 道 病 毒 或 潜 在 含 有 肠 道 病 毒 的 标 本 按 B 类 包 装 ， 置 于 冷 藏 保 存 盒 内 运 输 ， 尽 量 缩 短 运 输 时 间 。 可 采 用 陆 路 或 航 空 等 多 种 运 输 方 式 ， 但 在 运 输 过 程 中 应 采 取 保 护 措 施 ， 避 免 强 烈 震 动 、 重 力 挤 压 等 现 象 。 在 送 到 省 、 地 、 市 级 CDC 实 验 室 时 ， 包 装 盒 内 应 带 冰 且 包 装 完 整 。 在 上 送 标 本 的 同 时 ， 需 附 带 相 关 的 手 足 口 病 病 例 临 床 标 本 采 样 登 记 表 。 二 、 标 本 采 集 注 意 事 项 在 手 足 口 病 的 实 验 室 诊 断 中 ， 从 疱 疹 液 或 脑 脊 液 中 分 离到 病 毒 即 可 诊 断 该 病 毒 为 病 因 。 用 于 采 集 咽 拭 子 的 无 菌 拭 子 要 放 在 标 本 保 存 液 中 ， 如 含 5%牛 血 清 维 持 液 。 用 于 分 子 生 物 学 诊 断 的 标 本 采 集 与 病 毒 分 离 标 本 的 采 集 方 法 一 样 。 6 为 了 保 证 检 测 结 果 的 准 确 性 和 有 效 性 ， 标 本 应 在 病 例 发 病 后 尽 早 采 集 ， 尽 快 检 测 。 不 能 立 即 检 测 的 标 本 应 冷 冻 保存 。 对 于 血 清 学 诊 断 ， 急 性 期 血 清 应 该 在 发 病 后 尽 早 采 集 ， 恢 复 期 血 清 在 发 病 两 周 后 采 集 。标 本 保 存 液 的 配 置 见 下 表 ： 保 存 液 Eagles 液 (MEM) 80.5ml 3%L-谷 氨 酰 胺 200mM 1.0ml 胎 牛 血 清 5.0ml 7.5%NaHCO3溶 液 3.5ml 青 、 链 霉 素 （ 各 10000U/ml） 10ml 三 、 实 验 室 检 测 操 作 流 程 （ 一 ） 病 毒 分 离 。 1.试 剂 配 置 （ 1） 细 胞 的 生 长 液 、 维 持 液 的 配 制 见 下 表 ： 生 长 液 （ GM） 维 持 液 （ MM） Eagles 液 (MEM) 86.5ml 92.5ml 3%L-谷 氨 酰 胺 200mM 1.0ml 1.0ml 胎 牛 血 清 10.0ml 2.0ml 7.5%NaHCO3溶 液 2.5ml 3.5ml 青 、 链 霉 素 （ 各 10000U/ml） 1.0ml 1.0ml （ 2） 粪 便 标 本 和 肛 拭 子 的 处 理 液 完 全 PBS 液 中 加 入 P S 溶 液 ， 终 浓 度 为 青 霉 素 100 单 位 /ml， 链 霉 素 为 100g/ ml。 完 全 PBS 液 的 配 置 ： 取 以 下 1 份 B 液 和 1 份 C 液 加 到 8 份 A 液 中 即 为 完 全 PBS 工 作 液 。 A 液 ： 试 剂 品 名 加 入 量 NACL 8.00g KCL 0.20g Na2HPO4(无 水 ) 0.91g KH2PO4 0.12g 用 600 800ml 蒸 馏 水 溶 解 以 上 盐 类 ， 加 蒸 馏 水 补 至 1000ml， 10psi（ 70Kpa） 15 分 钟 高 压 灭 菌 ， 即 为 不 完 全 PBS 工 作 液 （ 不 含 钙 、 镁 离 子 ）。 B 液 ： 试 剂 品 名 加 入 量 MgCl2.6H2O 0.10g 溶 解 于 100ml 蒸 馏 水 中 ， 10psi（ 70Kpa） 15 分 钟 高 压 灭 菌 。 C 液 ： 试 剂 品 名 加 入 量 CaCl2 0.10g 溶 解 于 100ml 蒸 馏 水 中 ， 10psi（ 70Kpa） 15 分 钟 高 压 灭 菌 。 2 病 毒 分 离 细 胞 系 许 多 细 胞 系 可 支 持 人 肠 道 病 毒 （ 如 EV71、 CVA16） 生 长 。 对 于 检 测 手 足 口 病 的 病 原 来 说 ， 建 议 所 有 怀 疑 含EV71、 CVA16 等 肠 道 病 毒 感 染 的 标 本 均 需 接 种 到 以 下 两 种 细 胞 系 ： 7 RD细 胞 ， 来 源 于 人 横 纹 肌 肉 瘤 细 胞 。 HEp-2细 胞 ， 来 源 于 人 喉 癌 上 皮 细 胞 。 3 标 本 的 处 理 （ 1） 粪 便 标 本 和 肛 拭 子 的 处 理 操 作 步 骤 ： 1） 在 离 心 管 上 标 记 标 本 号 ； 2） 每 管 中 加 入 10ml PBS、 1g 玻 璃 珠 、 1ml 氯 仿 ； 3） 在 生 物 安 全 柜 中 将 每 一 份 粪 便 标 本 取 大 约 2g 加 入 标 记 好 的 离 心 管 中 （ 确 保 离 心 管 上 的 标 号 与 原 始 标 本 的 标 号 一 致 ） ； 肛 拭 子 为 2ml； 4） 剩 余 的 原 始 标 本 最 好 留 在 原 容 器 中 ， 冻 存 于 20 ； 5） 确 保 拧 紧 离 心 管 ， 用 机 械 震 荡 器 剧 烈 震 荡 20min； 6） 在 确 保 离 心 机 的 盖 子 盖 好 和 离 心 桶 密 封 的 情 况 下 ， 用 冷 冻 离 心 机 在1500g 条 件 下 离 心 20min； 7） 在 生 物 安 全 柜 中 将 每 1 份 标 本 的 上 清 液 分 别 吸 入 2 个 有 外 螺 旋 盖 的 冻 存 管 中 （ 如 果 上 清 液 不 清 澈 ， 应 再 用 氯 仿 处 理 1 次 ） ； 8） 1 管 粪 便 悬 液 冻 存 于 20 作 为 备 份 ， 另 1 管 存 于 4-8 以 备 接 种 。 （ 2） 疱 疹 液 标 本 的 处 理 疱 疹 液 标 本 通 常 直 接 用 于 RNA 提 取 或 病 毒 分 离 。 （ 3） 脑 脊 液 标 本 的 处 理 脑 脊 液 标 本 通 常 直 接 用 于 病 毒 分 离 。 （ 4） 咽 拭 子 标 本 的 处 理 咽 拭 子 要 在 标 本 运 输 （ 保 存 ） 液 中 充 分 搅 动 （ 至 少40 下 ） ， 以 洗 下 拭 子 上 粘 附 的 病 毒 及 含 有 病 毒 的 细 胞 等 ，用 于 病 毒 分 离 时 ， 需 要 冻 融 一 次 （ 防 止 多 次 冻 融 ）， 使 细 胞 破 裂 ， 释 放 病 毒 颗 粒 。 然 后 在 4 条 件 下 ， 10000 rpm 离 心 20min， 用 上 清 接 种 到 细 胞 上 或 直 接 提 取 RNA。 如 果 发 现 有 细 菌 污 染 ， 须 用 滤 器 过 滤 除 菌 。 4 接 种 和 观 察 （ 病 毒 分 离 ） （ 1） 通 常 使 用 ml 的 斜 面 试 管 培 养 细 胞 ， 传 细 胞 时 ， 每 管 加 细 胞 培 养 液1.5ml。 显 微 镜 下 观 察 单 层 细 胞 ， 以 确 保 细 胞 是 健 康 、 无 污 染 的 。 一 个 健 康 的 单 层 细 胞 会 在 传 代 后 48 小 时 左 右 形 成 ； （ 2） 倒 掉 生 长 液 （ GM） ， 换 上 1-1.2ml 的 维 持 液 （ MM） ； （ 3） 每 一 份 标 本 需 要 同 时 接 种 2 支 RD 细 胞 和 2 支 HEp-2 细 胞 ， 正 确 标 记 每 支 细 胞 培 养 管 （ 包 括 标 本 的 编 号 、 日 期 、 传 代 数 ）； （ 4） 每 一 种 细 胞 至 少 标 记 一 管 作 为 阴 性 对 照 ； （ 5） 每 支 试 管 接 种 0.2ml 的 标 本 悬 液 ， 培 养 温 度 要 求 36 。 （ 或 者 使 用 吸 附 的 方 法 接 种 病 毒 ： 接 种 标 本 前 ， 倒 掉 生 长 液 （GM） ， 每 支 试 管 接 种 0.2ml 的 标 本 悬 液 ， 培 养 温 度 为 36 ； 吸 附 1 小 时 后 ， 换 上 1.5ml 的 维 持 液 （ MM） 。 同 样 每 份 标 本 需 同 时 接 种 2 支 RD 细 胞 和 2 支 HEp-2 细 胞 。 （ 6） 使 用 倒 置 显 微 镜 每 天 观 察 细 胞 培 养 管 ， 以 观 察 有 特 征 性 的 肠 道 病 毒 致 细 胞 病 变 效 应 （CPE） 的 出 现 （ 如 细 胞 变 圆 ， 折 光 增 强 并 脱 离 管 壁 等 ）； （ 7） 记 录 接 种 管 和 对 照 管 细 胞 所 发 生 的 变 化 至 少 一 周 ， 记 录CPE（ 1+4+） 、 提 示 细 胞 受 毒 性 反 应 、 老 化 或 污 染 的 影 响 而 发 生 的 变 化 （ 1+， Ct 值 35.0 的 样 本 为 临 界 值 。 Ct 值 38.0 的 样 本 或 无 数 值 的 标 本 为 阴 性 。 （ 2） One Step Real-time PCR 法 同 时 检 测 EV71 和 CVA16 核 酸 （ 双 通 道 检 测 ） 双 通 道 可 以 同 时 检 测 EV71 和 CVA16 核 酸 ,在 提 取 核 酸 后 短 时 间 (2.5 小 时 )内 检 测 到 标 本 中 是 否 含 EV71 或 CVA16 核 酸 。 反 应 体 系 配 置 反 应 体 系 共 25 l， 模 板 量 可 根 据 样 本 情 况 自 行 决 定 （ 临 床 标 本 通 常 使 用5 l 模 板 量 ） ， 不 够 部 分 以 水 补 足 。 如 选 用 另 外 试 剂 盒 ， 反 应 体 系 及 条 件 随 之 变 化 。 a.先 将 试 剂 解 冻 ， 从 试 剂 盒 中 取 出 相 应 的 试 剂 ， 反 应 液 在 室 温 融 化 后 ， 瞬 时 离 心 ， 按n+1 配 置 25l 反 应 体 系 （ n=样 本 数 +1 管 阳 性 对 照 +1 管 阴 性 对 照 ）， 每 个 测 量 反 应 体 系 配 置 如 下 表 ： 14 b.将 下 述 反 应 液 混 匀 离 心 后 ， 按 照 每 管 20L 分 装 于 适 用 的 PCR 管 中 。 试 剂 组 成 1 份 样 品 的 量 荧 光 RT-PCR 反 应 液 12.5l 逆 转 录 酶 0.5l Taq 酶 0.5l 引 物 和 探 针 3l H2O 3.5l c.加 样 ： 将 提 取 好 的 样 本 RNA， 分 别 加 入 上 述 分 装 好 的 PCR 反 应 管 中 ， 模 板 量 可 根 据 样 本 情 况 自 行 决 定（ 临 床 标 本 通 常 使 用 5ul 模 板 量 ） ， 不 够 部 分 以 水 补 足 。 总 反