第八节 肉毒梭菌中毒症 修改后

肉毒梭菌中毒症肉毒梭菌中毒症 【病原及流行病学病原及流行病学】: 病原病原 肉毒梭菌(Clostridium Botulinum)是一种专性厌氧菌，革兰氏阳性，有 鞭毛，能运动，两端钝圆，长46m，宽O.91.2m，单个或成双排列，在 不利的条件下能形成芽孢，芽孢位于菌体的次极端，比菌体粗。有时形成长丝 状或链状，有时能见到舟形、带把柄的柠檬形、蛇样线状、染色较深的球茎状， 这些属于退化型。当菌体开始形成芽胞时，常常伴随着自溶现象，可见到阴影 形。肉毒梭菌具有48根周毛性鞭毛，运动迟缓；没有荚膜。在固体培养基表 面上，形成不正圆形，大约3mm的菌落。菌落半透明，表面呈颗粒状，边缘不 整齐，界线不明显，向外扩散，呈绒毛网状，常常扩散成菌苔。在血平板上， 出现与菌落几乎等大或者较大的溶血环。在乳糖卵黄牛奶平板上，菌落下培养 基为乳浊，菌落表面及周围形成彩虹薄层，不分解乳糖；分解蛋白的菌株，菌 落周围出现透明环。肉毒梭菌的生化性状很不规律，即使同性，也常见到株问 的差异。 肉毒梭菌发育最适温度为2535，培养基的最适的酸碱度为 pH6.08.2。新鲜培养基的革兰氏染色为阳性，产生剧烈细菌外毒素，即肉毒 毒素。病原为肉毒梭菌，其产生的毒素有A、B、Ca、Cb、D、E、F、G等8型。 A型毒素经602min加热，差不多能被完全破坏，而B、E二型毒素要经70 2min才能被破坏；C、D二型毒素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过902min 曲口热才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1min或75加热510min，毒素都 能被完全破坏。 肉毒素有耐酸、耐胃蛋白酶和胰酶的作用，80时30min或煮沸520min 才被破坏，在动物尸体、骨骼、腐烂植物、青贮饲料和发霉饲料及发霉的毒甘 草中，毒素能保存多月。若存在于固体食物里，需煮沸2h才能降解。 根据所产生的神经毒素的抗原性差异可将该菌分为A、B、C(C和C)、 D、E、F和G7型。A型毒素见于肉、鱼和罐头食品；B型毒素见于各种肉类及其 制品。犬、猫对A型毒素易感性低，对C型毒素最敏感。 流行病学流行病学 该病发生于世界各地。犬、猫发病主要因摄食腐肉、垃圾中的 动物尸体、腐败饲料和被毒素污染了的饲料、饮水而引起。存在于动物消化道 内的肉毒梭菌及其芽孢一般对动物没有危害，但在特定的条件下也可能产生毒 素。动物摄人毒素量少时可不发病，大群发病者亦不多见。健康易感动物与患 病动物直接接触亦不会受到传染。食品在制作过程巾被肉毒梭菌芽孢污染，制 成后未彻底灭菌，芽孢在厌氧环境中发育繁殖产生毒素，加之食前又未经加热 烹调，人食人已产生的毒素而发生中毒。易含肉毒毒素的主要食物有罐头、香 肠、腊肠、发酵豆制品及甜面酱等。 肉毒梭菌的芽胞广泛存在于自然界，土壤、水、空气、动物肠道、粪便、 腐尸、腐败饲料、各种植物以及发酵食物、变质肉品、变质罐头中都含有本菌， 因此，人和动物的感染多来自自然界。肉毒中毒一年四季均可发生。 肉毒梭菌在自然界的分布上具有某种区域性差异，显示出生态上的差别倾 向。A、B型的分布最广其芽胞广泛分布于自然界，各大洲的许多国家均有检出； C、D型的芽胞一般多存在于动物的尸体中，或在腐尸附近的土壤中；E型菌及 其芽胞存在于海洋的沉积物、水产品的肠道内，E型菌及其芽胞适应于深水的 低温，使E型菌在海洋地区的广泛分布。但是，越来越多的调查结果表明，除G 型菌之外，其他各型菌的分布都是相当广泛的。 【症状症状】： 犬、猫中毒后的症状及其严重程度取决于摄入毒素量及其动物的敏感性。 潜伏期数小时至数天，症状出现越早，说明中毒越严重。病初，犬、猫出现进 行性、对称性麻痹，多先发于两后肢，进而发展到两前肢，随后四肢瘫痪，俯 卧在地，呼唤时尾巴尚可摆动。 猫反射性机能下降，肌肉张力降低，全身发软，下颌下垂，吞咽困难，流 涎，但体温正常，意识清醒。严重病例，眼睑反射迟钝，两耳下垂，瞳孔散 大，呼吸闲难，心悸，心律不齐。中毒较严重的犬、猫大多数以死亡告终，轻 微病例 l2周后可逐渐康复。 病理变化: 肉毒梭菌毒素主要作用于神经一肌肉结合点，动物死后剖检一 般无特征性病理变化。有些病例在咽喉及会厌部黏膜有灰黄色黏液性覆盖物， 黏膜上有出血点。胃肠黏膜有卡他性炎症和小出血点。心内外膜有出血点。有 时肺部充血、淤血、水肿。中枢和外周神经系统一般无肉眼可见病变。 肉毒梭菌生长和产毒的最适温度是2530，而在人的体温条件下细菌表 现为丝状，几乎不能产毒、芽胞也不会发芽。 肉毒中毒是由于误食含有肉毒毒素的食品而引起的纯粹的细菌毒素食物中 毒。该病的轻重和食人的量成正比，潜伏期几小时或数天，症状出现的越早说 明中毒越严重。病的症状为进行性发展，病初可见有呕吐、吐沫，发展为肢体 对称性麻痹。一般由后肢向前肢延伸，进而引起四肢瘫痪。人和各种动物中毒 后的症状有所不同，主要表现为： 重症患者，如果不及时治疗和抗毒素特异治疗，多在24d死亡。 病犬一般体温不高、神志清醒、反射机能下降、肌肉张力降低；出现明显运 动神经机能障碍。由于咬肌麻痹，下颌下垂、流涎、咀嚼吞咽困难、两耳下垂、 眼睑反射较差、视觉障碍、瞳孔扩大。严重的犬可见膈肌张力降低，出现呼吸 困难、心功能紊乱，死亡率很高。临床上有最急性、急性和慢性3种类型。 1最急性型 不表现任何症状而突然发生死亡； 2急性型 突然发生吞咽困难，卧地不起，头向侧弯，颈部、腹部和大腿 肌肉松弛。以后食欲及饮食消失，舌尖露于口外，口流黏性唾液，多数发生便 秘。但体温正常，知觉和反射活动仍存在，病情发展快者，1d之内死亡，慢者 可延至45d。 3慢性型 除有急性型的症状外，常并发肺炎，最后常因极度消瘦而死亡。 各型病例死亡率都很高，尸体剖检时，无特征性眼观变化。但也有少数自 愈的。 【诊断诊断】 除了根据特殊的麻痹症状以外，应特别灌意肉毒梭菌及毒素检查。因为只 有通过肉毒梭菌及毒素的实验室检查，才能最后得到确诊。 1肉毒梭茵的检验与分离鉴定程序 (1)前增菌样品分别接种于疱肉培养基、TPGYF培养基，并分别与35、 26培养7d。 (2)分离培养7天后，染色、镜检，观察菌的形态是否为典型的肉毒梭菌。取 12ml。培养物加等量的酒精混合(或80加热10min，)后在室温下培养1h，非 蛋白分解型的肉毒梭菌，因其芽胞不耐热，不要采取热处理的方法。用接种环 涂划酒精处理液或热处理的培养物于小牛肝卵黄琼脂或厌氧卵黄琼脂平板上， 厌氧培养48h，35。 典型菌落是隆起或扁平，光滑或粗糙，在卵黄培养基上用斜光检验时，菌落 表面通常出现虹晕色(iridescence)，此光区称为“珍珠层”，C、D、E型菌通常有 24mm黄色沉淀区围绕，A、B型菌通常显示较小的沉淀区。挑取10个典型菌 落，分别接种于疱肉培养基、TPGYT培养基，并分别与35、26培养7d，再 取培养物按照肉毒毒素的检测方法即可。 生化反应试验，可以为鉴定做参考，以上肉毒梭菌的培养、分离、鉴定试验 力求迅速，不要长时间接触空气，最好在厌氧条件下操作。 2肉毒毒素的检测程序 (1)初步的定性试验(小白鼠腹腔注射法)检验样品(可疑食品、饲料及病死动 物的胃内容物等)经适当处理后取上清液，用明胶磷酸缓冲液稀释 (1：5、l：10、1：100三个稀释度)后各取O.5mL腹腔注射小白鼠；另取上清 液10010min加热后注射小白鼠；另取上清液经胰酶处理后注射小白鼠；每个 注射样注射2只小白鼠；注射后，定时观察小白鼠，连续观测48h；排除24h后死 亡的白鼠和无症状死亡的小白鼠；48h后，如果除了经热处理后再注射样品的小 白鼠未死亡，其余小白鼠均死亡的情况，重复试验，增加稀释倍数，计算最低 致死量。 如用鸡做试验，分别取上述液体注射于两侧眼睑皮下，一侧供试验用，另 一侧供对照，注射量均为0.10.2mL。如注射0.52h后，试验的眼睑发生麻痹， 逐渐闭合，试验鸡也于l0h之后死亡，而对照的眼睑仍正常，则证明有毒素。 豚鼠也可供试验用，取试验液体12mL给豚鼠注射或口服，同时取对照液 体以同样方法和用量接种其他豚鼠。如前者经34d出现流涎、腹壁松弛和后肢 麻痹等症状，最后死亡，而对照豚鼠仍健康，即可作出诊断。 有些病动物的血液中也有较多的毒素，所以在发病以后，也可用其抗凝血 液或血清0.51.0ml，注射于小鼠皮下，进行上述同样试验。 (2)中和试验可以为毒素定型。用无菌生理盐水溶解冻干的抗毒素，取 A、B、E、F 4种抗毒素注射于小白鼠体内；同时取未注射抗毒素的小白鼠做对 照；注射抗毒素30min或1h后，注射不同稀释度(覆盖10、100、1000倍最小致死 量)的含毒素样品，观察48h，如发现毒素未被中和，再取C、D型抗毒素和AF 多价抗毒素重复上述试验；如小白鼠死亡，应将含毒素样品稀释后再重复以上 试验。 另外用血凝抑制试验、免疫荧光试验、PER试验也可以鉴定毒素的型。 (3)评价方法典型的肉毒中毒，小白鼠会在46h内死亡，而且9899的 小白鼠会在12h内死亡；24h后的死亡是可疑的，除非有典型的症状出现。如果 小白鼠注射经l：2或l：5倍数稀释的样品后死亡，但注射更高稀释度的样品后未 死亡，这也是非常可疑的现象，一般为非特异性死亡。 食物中发现毒素，表明未经充分的加热处理，可能引起肉毒中毒。检出肉毒 梭菌，但未检出肉毒毒素，不能证明此食物会引起肉毒中毒。肉毒中毒的诊断 必须以检出食物巾的肉毒毒素为准。 确诊时，需在可疑饲料、病死动物尸体、血清及胃肠内容物内检测到肉毒 梭菌毒素。方法是采集胃肠内容物和可疑饲料，以1：2比例加人无菌生理盐水 或蒸馏水制成混悬液，置室温l2h，离心沉淀或过滤，取上清液或过滤液，分 为两份：一份加胰酶处理激活，供毒素试验用；另一份则加热至100 30min以 破坏其毒素，作为对照组用。第l组小鼠皮下或腹腔注射0.20.5ml上清液；第2 组注射加热过的上清液；第3组先注射多价肉毒抗毒素，然后注射小加热的上清 液。如果被检材料中有毒素存在，则第l组试验鼠l2d发病，有流涎、眼睑下垂、 四肢麻痹，呼吸困难等症状，最后死亡，而第2、3组正常。 除了上述方法外，患肉毒梭菌毒素中毒的动物血清对小鼠的毒性可达 20LD50/ml因此，以患病动物血清接种于小白鼠亦有助于诊断。 【临床急救临床急救】 治疗本病一般采取以下措施： (1)阻止毒素的吸收：立即停喂含有毒素的食物、饲料和饮水，灌服0.1硫 酸铜液催吐，然后用12NaHCO3溶液洗胃，再灌服1的活性炭悬浮液或 0.050.1高锰酸钾溶液以吸附或破坏胃肠道内毒素，最后灌服57硫 酸镁液泻下排出毒素。还可以采用其他各种方法帮助排出体内的毒素、例如投 服泻剂或皮下注射槟榔素，进行温水灌肠，静脉输液，用胃管灌服普通水等。 (2)注射C型或多价抗毒素：犬48ml、猫24ml，肌肉或静脉注射，46h 重复注射1次。 (3)对症治疗：病的初期，可以静脉注射“九一四”，根据体重大小不同，剂 量为0.30.5g，溶于10ml灭菌蒸馏水中应用。全身麻痹时可皮下注射硝酸士 的宁，犬0.10.2ml，或者盐酸奎宁注射液10mg/kg体重，肌肉注射。呼吸困难 时及时给氧治疗。 (4)支持疗法：对动物进行输液：葡萄糖、维生素C、葡萄糖酸钙、维生素 B6、维生素B1、ATP、肌苷等，静脉滴注。 犬在采用上述方法的同时，还应根据病情变化随时进行对症治疗。应用 多价抗毒素治疗，每只犬可肌肉或静脉注射35mL，早期应用比晚期应用效果 显著；硫酸卡那霉素注射液5万单位/kg体重，2次/d；补液疗法，5葡萄糖 盐水1001000mL5碳酸氢钠注射液1050mL，混合静脉滴注；防止让犬 食入腐败变质的肉类及食物，饲喂前食物应加热10010min以上后喂给犬。 本病病死率高，A型为6070，B型1030，E型3050。E 型的死亡较快。近年来由于早期使用抗毒血清，A型病死率已降至 1025，B型为1.5左右。