临床微生物标本的采集课件

,正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原 学诊断的前提！,标本采集、运送是分析前质量控制的重要部分。,分析前程序包括：从临床医生开出医嘱开始,到分析 检验程序时终止的步骤, 包括检验申请、患者的准 备、原始样品的采集、运送到实验室并在实验室进行 传输。,临床反馈不满意的检验结果中, 有80%的报告最终可 溯源到标本质量不符合要求。,微生物样本采样基本原则,1.及时采集微生物标本作病原学检查； 2.在抗菌药物使用前采集标本； 3.采样时严格执行无菌操作； 4.采样后立即送检；,5.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂； 6.送检标本应注明来源和检验目的；,7.混有正常菌群污染标本，不可置液体培养基。不可增菌,各类标本储存的环境,4冰箱 ：痰、尿液、粪便、活检组织、气管冲洗物、 导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等。,室温（25）： 脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、鼻、 喉、血液培养、血管导管尖、体液 、厌氧菌培养标本。,常见不合格标本主要原因,标本采集时间错误； 容器错误；,标本量不足；,标本未及时正确运送； 以及暂存条件错误；,。,临床微生物检验重要样本类型,血液培养,脑脊液培养,呼吸道标本培养 尿液培养,生殖道样本培养 粪便培养,其他无菌体液或分泌液,血培养,的采集规范,血培养采集的指征,当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养。 怀疑患者有血流感染的症状有：,不明原因的发烧(38)或体温过低(36) 白细胞增多（ 10,000/ul），粒细胞减少（ 1,000ul）,休克，寒颤，僵直,血培养采集的指征,血流感染的症状有：,严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾 炎，腹部术后感染，) 心率异常加快,低血压或高血压 呼吸频率加快,新生儿可疑菌血症,可以增加做尿液和脑脊液培养。,关于采血时机,尽可能在患者寒战或开始发热时采血；,在患者接受抗生素治疗前采血；,如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之 前采血培养。,血培养采集的消毒,皮肤消毒,培养瓶消毒,皮肤消毒程序，严格执行三步法:,1、用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上；,2、用1%-2%碘酊作用30s或10%碘伏作用60s，从穿刺点向 外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上，涂擦穿刺皮 肤2遍，待干燥。,3、75%酒精脱碘：用75%酒精由内向外方向涂抹去碘酒,液 ，待酒精挥发干燥后采血。,培养瓶的消毒,1. 去掉培养瓶口的塑料瓶盖。,2. 75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。,3. 自然待干。,4. 将标本注入培养瓶内。,5. 颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝,集。,关于采血套数与采血部位,成人“一套” 血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也 叫“一份”。,注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一 个穿刺点获得。最好从另一侧抽血。,儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。,特殊患者才考虑厌氧培养。,Weinstein et al. Detection of Bloodstream Infections in Adults: How Many,BloodCultures Are Needed J Clin Microbiol. 2007; 45:3546-3548,每位患者每次采血最少2 套，3套更好 初发患者，绝不能只采1 套标本 多个穿刺部位采血。多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断,采集部位,推荐从外周静脉采集血液标本。,不推荐动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大。 不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。如果必须 从留置导管内采血，也应同时从外周静脉采集另外一个 血培养标本以帮助阳性结果的判读提供解释。,关于采集血液量,采血量是影响灵敏度最关键因素 成人一份标本2个培养瓶（需氧厌氧），每瓶8 10ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。 儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量1总血 量下，一般为13ml 采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90以上的感 染为需氧菌或兼性需氧菌感染,0,50 40 30 20 10,采血量(ml)与检出率的关系 100 90 80 70 60,5,10,15,20,30,40,45,50,55,60,ml,% Relative Yield,25Overall35,血培养物每增加一毫升，真性菌血症 成年人微生物的检出率增加3 但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培 养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质 （补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例 为1：41：10,关于各种血液标本的采集顺序,血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、 凝血等其它标本要高。,所以要最先采集血培养标本。,培养瓶的储存温度,不需冷藏，更不能冷冻。保存在1525的室 温即可，温度过低会导致对温度敏感的细菌死 亡。,呼吸道标本,上呼吸道样本 下呼吸道样本,关于呼吸道标本,临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼 吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支 气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。,下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎 急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、,肺脓肿）等。,绝大部分上呼吸道感染局限于口咽、鼻咽和鼻腔部位；常常导致咽痛、鼻炎等。,痰及下呼吸道标本,痰及下呼吸道标本采集指征,痰液标本是临床微生物学检验最常见的标本，但不是下 呼吸道感染的最佳标本。有下列体征之一，应进行痰培 养：,咳嗽、 咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状。 咯血，包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。 呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。,发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高。 胸部影像学检查提示有感染可能。,咳痰标本的采集,标本采集方法,医师或护士直视下采集标本。,病人先漱口用牙刷（不用牙膏）清洁口腔和牙 齿，去除表面的菌群。,教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液。,无痰可用35NaCl 5ml雾吸约5min导痰也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰,咳痰标本不合格，退检吗？,如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于25个，白细胞小于 10个，应不做或仅在特殊要求时做培养。,如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽分泌 物污染明显”。,样本质量-革兰染色评估样本是否合格,不合格的痰标本,合格的痰标本,几种下呼吸道直接采集的标本,经气管穿刺吸引 经胸壁针刺吸引 经支气管镜采样,支气管肺泡灌洗经支气管镜直接吸引 防污染样本毛刷开胸肺活检（,经人工气道吸引分泌物,痰培养的送检次数,对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2 3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现 改变；,怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检；,痰培养的运送和保存,尽快（2h）送至实验室。,如不能及时送达，应将标本暂存于4，但放置时间 不可超过24h。,脑 脊 液,关于脑脊液,正常人体脑脊液是无菌的。当人体患有脑脊 髓膜炎症时，在脑脊液中可以出现病原菌。常 见的病原菌有细菌、真菌、结核分枝杆菌等。 做脑脊液的细菌培养有助于诊断脑膜炎病因。,脑脊液培养标本的采集,采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最是在应用抗生 素之前采集脑脊液。,采集方法：无菌腰穿采集脑脊液35ml，分装到3个无菌小瓶 中（各1 2ml）。,用于细菌和病毒检测时脑脊液量不少于1ml；用于真菌和抗酸杆,菌检测脑脊液量不少于2ml。,脑脊液标本采集,标本采集后应置于无菌试管内尽快送检，绝不可冷 藏！每种检验需要最小量：细菌培养lml，真菌 2ml，抗酸杆菌2ml。,标本验收与拒收：标本未收集于无菌管或送检延误或冷 藏保存，则拒收标本，通知临床要求重新采集标本。,尿培养标本,正常人体内的尿液是无菌的，而外尿道有正常菌 群寄居。尿液经尿道排出时受到尿道中细菌的污 染而混有细菌，但细菌数不超过1000cfu/ml。患 有泌尿系感染时，尿中的菌数高于104,105cfu/ml ，因而可以此界限作为诊断泌尿系感 染的依据。,关于尿液标本,尿液培养标本采集注意事项,（1）最好留取晨起第一次尿液。,（2）采集时必须严格进行无菌操作。,（3）用药前送检。,（4）不能将尿液接种于增菌培养液中。,（5）尿液标本不适合做厌氧菌培养（除非经膀胱穿刺 取尿），不适合做支原体培养。,多次收集或24小时尿不能用作培养。,尿培养采集方法,清洁中段尿法：是最常用的方法。 耻骨上膀胱穿刺法 直接导尿,留置导尿管收集尿液,尿培养的运送和保存,室温都有利于病原菌和污染菌会生长繁殖，因此若 30min内不能及时培养尿液则必须冷藏，但也不能超过 24小时。,粪便标本,关于粪便标本,急性感染性腹泻可以由细菌、病毒及原虫引起，实验室 常规检查是细菌培养。,沙门氏菌、志贺氏菌、邻单胞菌和气单胞菌应作为实验 室常规培养的主要腹泻病原菌。,儿童(2岁以内)腹泻多以病毒性肠炎为主，应在腹 泻病毒筛选阴性之后，再考虑做细菌培养。,粪便标本采集指征,当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标 本，进行细菌培养：,粪便涂片镜检白细胞5个/HP； 重症腹泻；,体温大于38.5； 血便；,便中有脓液；,未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者； 来自疫区的患者。,粪便标本采集方法 标本采集尽可能在发病早期和应用抗菌药物治疗之前。 在不同的时间采集2至3份标本可以提高致病菌的分离率。,自然排便法,直接留置粪便标本于清洁、干燥广口容器,中送检。本法为常规方法。注意若有脓血、粘液、组织 碎片，则取有脓血、粘液、组织碎片部分的粪便23g， 液体粪便则取絮状物，一般取13ml。,粪便标本采集方法,直肠拭子法,用无菌拭子插入肛门2-4cm，轻轻旋转拭,子，可在拭子上明显见到粪便，插入运送培养基内，立 即送检。本法只适用于排便困难患者或婴幼儿，不推荐 使用拭子做常规性病原菌培养。,粪便标本运送和验收,标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存 2h。如采便后2h内未培养,标本应放入运送培养基如 Cary -Blair运送培养基中4冰箱保存，一般可保存 24h。,无菌体液标本,关于无菌体液标本,无菌体液是指除血液、骨髓和脑脊液外的羊膜腔液、后 穹窿穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑膜液， 正常的穿刺液是无菌的，在感染的情况下，只要检出细 菌，通常都可视为病原菌。,无菌体液标本采集指征,局部组织或器官怀疑有细菌感染，应进行细菌 培养。,无菌体液标本采集方法,由临床医生按相应规程无菌采取适量标本送检。当 留取标本时，为防止无菌体液凝固，应在无菌容器 内先加入灭菌肝素0.5mg（可抗凝5ml标本），再注 入各种穿刺液，轻轻混合。,肉汤管和血培养瓶可以直接注入标本并混匀，无需 抗凝，标本与培养基之比为15110。,脓,液,关于脓液标本,组织或器官的化脓性感染，其病原菌的来源可分为 两类：内源性（感染源是炎症局部周围器官中的正常菌 群）和外源性（感染源是存在于外界的微生物）。,采集指征,局部组织或器官有化脓性感染表现，应进行细 菌培养。,脓液标本采集方法,开放脓肿 用无菌盐水或70酒精擦去表面渗出物，用 拭子深入溃疡基底部或边缘部，采集两个拭子，分别做 培养和革兰染色，也可对渗出物做需氧培养。开放病灶 不能做厌氧培养。,闭合脓肿 不能用拭子，要消毒脓肿表面皮肤后用无菌 注射器抽取，注入无菌试管中送检。,烧伤伤口 清创，出现渗出物后用拭子用力采集，仅做,需氧培养。也可送组织标本。,脓疱或水疱 酒精消毒，干燥，用针头（小儿用23号针 头）挑破脓疱，用拭子采集脓疱液和基底部标本。,脓液标本采集注意事项,对大多数开放伤口，采集前应先清创，去除表面菌群。 除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养。闭合脓 肿应取穿刺物和脓肿壁标本。开放脓肿处理同开放伤 口。不要仅仅送检脓液，应在病灶活动区域或基底部采 集标本，最好是组织标本。,脓液标本采集标本运送和验收,标本采集后应尽快送检，如果在1h内不能培养，应将标 本冷藏。,标本验收与拒收:,标本拭子未装入无菌容器内或注射器渗漏污染者，送检 时间过长者应拒收。,标本涂片革兰染色若发现上皮细胞，提示标本已被污 染，一般不适合再做培养。,生殖道标本,关于生殖道标本,生殖道标本的细菌学检验是协助诊断生殖道感染的重要 手段。生殖器官标本中常见的病原菌有葡萄球菌、肠球 菌、链球菌、酵母样菌、淋病奈瑟菌、大肠杆菌、铜绿 假单胞菌、阴道加德纳菌等。,生殖道标本采集指征,怀疑有生殖道细菌感染，应进行细菌培养。,生殖道标本采集方法,应由临床医师采集，收集于无菌试管内送检。淋球菌检 查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子 宫颈3cm深取样送检，女性要避免受阴道分泌物污染。,生殖道标本采集方法,男性标本,如疑为急性淋病奈瑟菌或其他化脓性细菌感染应在清洗 龟头部后,以碘伏或其他非粘膜刺激性消毒剂消毒后,挤出 分泌物立即以无菌棉拭子采取,立即送检,或以专用的细拭 子插入尿道口12 cm ,旋转采取。,如疑为前列腺炎、精囊炎或慢性淋病奈瑟菌感染应由医师 按摩前列腺,以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。,生殖道标本采集方法,女性标本,成年妇女自宫颈采取标本,应在扩阴器的支持下,选取有 炎症或分泌物部位,先以无菌棉拭子拭去表浅层分泌物, 再用另一拭子取宫颈分泌物送检。如做厌氧或真菌培养 应另外采取标本。如怀