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1,I,F,第三节 定量分析方法,一、荧光强度与物质浓度的关系,F=K(I0-I),I=I010-ECL,F= KI0(1-10-ECL) = KI0(1-e-2.3ECL),2,e-2.3ECL= 1+,F= KI0(1-10-ECL) = KI0(1-e-2.3ECL),若C很小，ECl 0.05 则F=2.3KI0ECl=KC,+ ,3,F=2.3KI0ECl=KC,ECl0.05 F C ECl 0.05 F 与C不成正比 荧光法 紫外法,F,A= - lgT = - lgI /I0,荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法,4,二、定量分析方法,标准曲线法 比例法 多组分分析,C1 C2 C3 C4 C5,100%,20,60,80,40,80%,16,48,64,32,用空白溶液调零 用标准溶液调满刻度,5,比例法（对比法）,若在某浓度范围中成线性，可用比例法测定,Cs,Cx,Fs,Fx,=,6,多组分分析,各组分荧光峰不重叠，可分别测定 相互重叠，可利用荧光强度的加和性，如：,Fa = KaCa + KbCb,1:,Fa = Ka Ca + KbCb,2:,7,第四节 仪器与荧光分析新技术,光源,单色器 ,样品池,检测器,单色器 ,放大器,显示器,滤光片荧光计 滤光片单色器 荧光分光光度计,8,仪器的校正,灵敏度 波长 激发光谱和荧光光谱,9,荧光分析新技术简介,1. 激光荧光分析 以激光作光源，谱线更纯、强度更大。 可提高灵敏度和专一性。一次测量所需样品液 1g，可测至10-14 10-16g。,新技术,仪器方面更新 化学方法改善,10,2. 时间分辨荧光 time-resolved fluorometry,样品,杂质,脉冲激光,10-10 s,10-12 s,11,3. 同步荧光分析 synchronous fluorometry,若： = em - ex,F = K （ ex ）（ em ）C,Fex,Fem,F = K （ ex ）（ ex+ ）C,f,= f C,F = K （ em - ）（ em）C,K,= K C,12,荧光黄、罗丹明6G、罗丹明B混合物的同步荧光光谱（ =3nm）,F,荧光黄,罗丹明6G,罗丹明B,13,4. 胶束增敏荧光,CH3(CH
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