课件：微生物复习.ppt

生物技术与实践复习,微生物的培养与利用,2019,-,1,考试说明要求,生物技术与实践 光学显微镜操作技术 生物体内物质的分离、鉴定技术 微生物培养与利用 （1）微生物的培养和分离 （2）某种微生物数量的测定 （3）培养基对微生物的选择作用 （4）利用微生物进行发酵来生产特定的产物 （5）发酵过程中亚硝酸盐含量的测定 调查 生物学研究中的科学思想和一般方法,2019,-,2,知识体系,1.微生物主要类群及特征 （形态结构、代谢类型、营养方式等） 2.微生物的培养 基本流程 分离方法 计数方法 3.微生物培养的利用 传统发酵技术 基因工程受体菌 选育特定菌种 药物抗菌性检测等 4.发酵过程中亚硝酸盐含量的测定,2019,-,3,1.微生物主要类群及特征 （形态结构、代谢类型、营养方式等）,哪些生物属于微生物？（举例说明） 教师提供一些微生物，请同学们尝试说出其代谢类型？ 培养这些微生物所需营养条件？,2019,-,4,2.微生物的培养-基本流程,选种（目的菌种含量丰富处取样） 配制培养基 以目的菌种的特点为依据（选择培养） 称量溶化调pH分装包扎 接种 固体培养基平板划线（接种环）、稀释涂布（涂布器） 液体培养基用接种环蘸取菌液（扩大培养） 培养 固体培养基倒置，37恒温培养箱，24h左右 液体培养基空气浴或水浴培养箱（摇床），震荡培养 观察 固体培养基出现单菌落 液体培养基培养液变浑浊 保存 原则：降低代谢过程、避免污染、减少繁琐操作 废弃菌种和培养基的处理（灭菌后丢弃）,2019,-,5,2.微生物的培养-分离方法,平板划线法 为什么能获得单菌落？操作时应注意的问题？未获得单菌落可能的原因有哪些？,2019,-,6,稀释涂布平板法 涂布-菌落均匀 稀释-单菌落,2.微生物的培养-分离方法,2019,-,7,为什么要对菌液进行梯度稀释？ 每一个稀释度的菌液接种1个平板可以吗？为什么？ 稀释涂布法还可以用来计数，其记录的活菌数比实际数目多还是少？为什么？,2019,-,8,选择培养基的分离作用 2011海淀二模31焦化厂活性污泥中富含难降解的有机物苯甲酰肼，是当前焦化行业环保治理的难点。某同学通过查阅资料发现可通过细菌生物降解方法处理焦化厂污染物。 （1）目的菌的筛选：选择目的菌应该从中筛选，在配制培养基时仅加入作为碳源,2.微生物的培养-分离方法,2019,-,9,鉴别培养基鉴别后分离,2.微生物的培养-分离方法,2012东城（1）富集与筛选：将适量土样放入液体培养基中，37摇床震荡培养。为获得单菌落，可将上述菌液经 后接种到固体培养基上。要想鉴定筛选的菌株，需在培养基中额外添加 。实验结果如下表：,注：“+”的多少代表颜色的深浅 由表中结果分析，菌种 为最适菌种，理由是 。,2019,-,10,综合利用选择培养基和鉴别培养基,X-gal（无色） 半乳糖+5-溴-4-靛蓝（深蓝色）,半乳糖苷酶,2.微生物的培养-分离方法,2019,-,11,（1）稀释涂布法（间接的方法）,2.微生物的培养-计数方法,2019,-,12,1mm,0.1mm,（2）显微观察法：血球计数板（直接计数）,2019,-,13,统计5个中格中各有多少酵母菌细胞,2019,-,14,（3）比浊法记数 ：（直接计数）,2019,-,15,分光光度计的使用原理,微生物细胞数目多培养液浊度大发生散射光线多分光光度计测得的吸光值增加,2019,-,16,制作原理:菌种（代谢类型） 发酵生产中的条件控制：无菌、营养、温度、pH、空气、连续培养措施；,3微生物培养的利用-传统发酵技术,2019,-,17,3微生物培养的利用-传统发酵技术,2019,-,18,无菌技术,消毒： 煮沸消毒 巴氏消毒 化学药剂消毒 紫外线消毒,灭菌： 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌,2019,-,19,3微生物培养的利用-基因工程受体菌,海淀2012零模30.（16分）为实现目的基因与载体结合，以便在大肠杆菌中大量表达相应的蛋白质，研究人员进行了如图所示操作。请分析回答下列问题：,2019,-,20,（1）将_同时用BamH I切割并混合，加入_进行连接，再与大肠杆菌感受态细胞混合，最后，将混合物接种在含有_的平板培养基上。 （2）切割后的载体用碱性磷酸酶处理，除去末端的5磷酸，可防止载体自我连接，目的基因片段不用碱性磷酸酶处理，仍然能与用碱性磷酸酶处理过的载体连接。在5组平板培养基上接种了不同操作的大肠杆菌感受态细胞，如下表所示。,2019,-,21,第1组实验目的是确认_是否符合实验要求。 第2组平板培养基菌落数目最大，说明大肠杆菌感受态细胞能够_。 第3组实验用来检验_酶是否具有活性。第4组实验用来检验_酶是否具有活性。 实验中用碱性磷酸酶处理载体可以降低仅有载体的菌落数，增加携带_的菌落比例。,2019,-,22,（2011课标）筛选高效将原油的菌种 （2008天津）选育降解莠去津的细菌,3微生物培养的利用-选育特定菌种,2019,-,23,适宜温度下培养48h后发现，不同毛霉菌株的单菌落直径的大小不同，在酪蛋白培养基上产生的透明圈直径的大小也不相同（图2），因此我们可以用_来衡量毛霉产蛋白酶能力的大小。,图2,2019,-,24,2011山东34,3微生物培养的利用-抑菌实验,2019,-,25,紫草素功能的研究-抑菌,具有抑菌作用的物质经常会在细菌的培养基上形成抑菌圈，为了研究紫草素是否均有抑菌作用，研究人员选用不同菌液（金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌）和紫草为实验材料，进行抑菌试验： 制备紫草素提取液。 配制4个营养琼制培养基平板，编号，将培养基进行 。 用 法分别在不同培养基接入不同菌种。 以无菌操作将一个含紫草素提取液的直径0.4cm的滤纸片分别贴到每个培养基上，37培养24h观察并测量 。 实验组在每个培养皿中，如果做三个重复实验，可采取的做法是： 。,灭菌,（稀释）涂布平板,抑菌圈的直径,在每个培养皿的不同位置分别贴三个含紫草素提取液的直径0.4cm的滤纸片,2019,-,26,抑 菌 圈,2019,-,27,28,制作泡菜,亚硝酸盐的形成、含量变化及其危害,4.发酵过程中亚硝酸盐含量的测定,2019,-,29,测定亚硝酸盐含量的方法比色法,（1）在酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮反应,（2）重氮化反应形成的产物与N1萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物,(3)溶液紫红色的深度与亚硝酸盐含量成正比,2019,-,30,库尔勒香梨果实中存在游离态和结合态两大类呈香物质。结合态呈香物质大部分以糖苷形式存在，本身没有香气，但在-D-葡萄糖苷酶的作用下能分解释放出具有挥发性的游离态呈香物质。若香梨在贮藏期间上述转变过程迅速，会导致部分香气成分丧失，影响果实的风味和品质。科研人员进行了相关实验（实验结果如下图所示），请分析回答：,（1）本实验的目的是。,2011西城一模,2019,-,31,（2）本实验检测的原理如下：, 对硝基苯-D-葡萄糖苷(pNPG)与香梨中的 分子结构相似，能在-D-葡萄糖苷酶作用下生成对硝基苯酚，对硝基苯酚在碱性条件下显黄色。 由于不同香梨中的 不同，以上反应完成后，在碱性条件下呈现的黄色深浅不同，在对硝基苯酚的最佳吸收波长处测定的吸光值也不同。与事先配制好的对硝基苯酚标准溶液的 进行比较，确定含量，然后推算出。,2011西城一模,2019,-,32,2011西城一模,（3）实验步骤 提取样液：定期称取不同贮藏条件下的香梨10.0 g，立即在液氮下研磨成粉末，加入经适量预冷的pH 6.0缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，于4条 件下离心获得的上清液即为-D-葡萄糖苷酶粗提取液，用pH 6.0缓冲液定容至10mL，置于4条件下保存备用。 检测样液：在10mL试管中依次加入0.6mL缓冲液，1.0 mL酶粗提取液和0.2 mL 10 mmol/L pNPG混合均匀，迅速盖上试管塞后立即放到37条件下反应60min后，加入Na2CO3终止反应，然后在对硝基苯酚的最佳吸收波长处测定其吸光值。 提取样液过程必须在低温条件下进行的原因是。 检测样液时，酶促反应需控制在pH 6.0，37条件下完成，其最可能的原因是。 （4）实验结论 在四种不同条件下贮藏的香梨中，游离态呈香物质均在贮藏 天时相对较多，在贮藏时，香梨的风味和品质最佳。,2019,-,33,（1）研究不同贮存条件下-D-葡萄糖苷酶含量（-D-葡萄糖苷酶活性）的变化规律或探究不同贮存条件对-D-葡萄糖苷酶含量（-D-葡萄糖苷酶活性）的影响 （2）结合态的呈香物质 -D-葡萄糖苷酶的含量 颜色（或吸光值） 对硝基苯酚 -D-葡萄糖苷酶的含量（-D-葡萄糖苷酶的活性） （3）保持-D-葡萄糖苷酶含量（抑制-D-葡萄糖苷酶失活、排除温度对酶活性的影响） 此条件下酶的活性最高（pH 6.0是-D-葡萄糖苷酶的最适pH，37是-D-葡萄糖苷酶的最适温度） （4）40 1%涂膜,答案,2011西城一模,2019,-,考试说明要求,微生物培养与利用 （1）微生物的培养和分离 （2）某种微生物数量的测定 （3）培养基对微生物的选择作用 （4）利用微生物进行发酵来生产特定的产物 （5）发酵过程中亚硝酸盐含量的测定,2019,-,34,能力要求,实验探究能力 能独立完成生物学教材所规定的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合的运用。 具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理。 具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，包括运用观察、实验与调查、假说演绎、建立模型与系统分析等科学研究方法。 能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订。,创设问题情境，在解决问题中复习相关知识,2019,-,35,左手：收集气体的姿势,2019,-,36,Where is “酒精灯”？之一,2019,-,37,Where is “酒精灯”？之二,2019,-,38,Where is “酒精灯”？之三,2019,-,39,Where is “酒精灯”？之四,2019,