罗氏诊断降钙素原(PCT)中文说明书.doc

05137624001V1降钙素原（Procalcitonin，PCT） 05056888 200 100测试l 本试剂盒适用的分析仪Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于体外定量检测人体血清或血浆中的PCT(procalcitonin)。Elecsys BRAHMS PCT检测可辅助临床早期诊断相关的细菌感染。Elecsys和cobas e 免疫分析仪的工作原理是电化学发光免疫分析“ECLIA”。临床应用降钙素原（PCT）是由116个氨基酸组成的激素原，分子量大约为12.7kD。PCT由神经内分泌细胞（包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞）表达，经酶切分解为（未成熟）降钙素、羧基端肽和氨基端肽。健康人血中仅含有少量的PCT1,2。细菌感染后PCT会明显升高。动物模型试验显示机体发生脓毒血症时，多组织均能表达PCT。脓毒血症患者体内的PCT只含有114个氨基酸，缺少氨基末端的Ala-Pro4。PCT水平升高见于细菌性脓毒血症，尤其是重症脓毒血症和感染性休克5,6,7,8,9,10。PCT可作为脓毒血症的预后指标8,11,12,13，也是急性重症胰腺炎及其主要并发症的可靠指标14,15。对于社区获得性呼吸道感染和空调诱导性肺炎患者，PCT可作为抗生素选择以及疗效判断的指标。检测原理双抗体夹心法，总检测时间：18分钟l 第一次孵育：30l样本、生物素化的单克隆PCT抗体以及钌复合物标记a的单克隆PCT抗体一起孵育，形成抗原抗体夹心复合物。l 第二次孵育：添加包被链霉亲和素的磁珠微粒进行孵育，复合体与磁珠通过生物素和链霉素的作用结合。l 将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。l Elecsys软件自动通过定标曲线计算得到检测结果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三联吡啶钌试剂工作溶液M包被链霉亲和素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶6.5ml；包被链霉亲和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐剂。R1生物素化的Anti-PCT抗体（灰色瓶盖），每瓶9ml：生物素化的Anti-PCT抗体（小鼠源）约2.0g/mL，磷酸盐缓冲液95 mmol/L，Ph7.5; 防腐剂。R2 钌复合物标记a的Anti-PCT抗体（黑色瓶盖），每瓶9ml：钌复合物标记a的Anti-PCT抗体（小鼠源）5.6 g/mL；磷酸盐缓冲液95 mmol/L，pH7.5; 防腐剂。Cal1 冻干的PCT定标液1（白色瓶盖），1瓶，每瓶4ml蒸馏水溶解： PCT（重组）血清基质中浓度约0.10ng/mL; 防腐剂。Cal2冻干的PCT定标液2（黑色瓶盖），1瓶，每瓶4ml蒸馏水溶解：PCT（重组）血清基质中浓度约54ng/mL; 防腐剂。PC PCT1冻干的PCT质控品1（米色瓶盖），1瓶，每瓶4ml蒸馏水溶解：PCT（重组）血清基质中浓度约0.50ng/mL; 防腐剂。PC PCT2冻干的PCT质控品2（褐色瓶盖），1瓶，每瓶4ml蒸馏水溶解：PCT（重组）血清基质中浓度约10ng/mL; 防腐剂。定标：不同批号试剂条码中编码有相应批号的定标值。质控：不同批号的批特异性质控靶值和范围参见试剂盒附带的数值表。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据报告。所有人源性物质必须视为有潜在感染性。所有产品由献血员单体提供，经特殊制备而成，经检测HBSAg、HCV抗体、HIV抗体，均为阴性。所应用的检测方法经FDA认可或符合欧洲法令98/79/EC附件II列表A。但由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在感染的危险，故该产品仍需视作病人样本一样仔细处理。接触者必须遵循健康专业机构相应的法规12，13。若试剂超过保质期，则不能再使用。避免试剂和样本（样本、定标液和质控品）产生气泡。试剂处理试剂盒（M,R1和R2）为即用型。定标液和质控品准确添加4ml蒸馏水复溶瓶内物质，垂直加盖静置15分钟。充分混匀并避免产生气泡。根据定标液和质控品的用量进行分装，可将复溶后的定标液/质控品转移到空的有盖小瓶中（CalSet/ControlSet Vials），并贴上标签，-20保存备用。分装的定标液和质控品只能一次使用。试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。储存及稳定性存放于28。请垂直摆放Elecsys BRAHMS PCT试剂盒，确保仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用开封试剂，2812周放置分析仪上4周冻干定标液/质控品有效期内均可使用复溶后放置分析仪上2小时（只能使用一次）复溶后-20保存3月（只可冻融一次）定标液和质控品要垂直保存!确保液体没有附着在瓶盖上。样本的采集和准备下列类型的样本符合检测要求，并且样本量要充足。血清样本须用标准试管或有分离胶的真空管收集。肝素锂和K3-EDTA抗凝的血浆都适用。标准：斜率0.9-1.1，截距0.95。稳定性： 28C可保存24小时；-20可保存3月，一次冻融。标本采集后建议在24小时内完成检测，否则应-20冰冻保存。冻融标本的检测回收率可降低约8%。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。有沉淀和冰冻的样本检测前必须先作离心处理。添加叠氮化合物的样本和质控品均不能使用。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡(2025C)。由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参阅“试剂工作溶液”章节。2 个 条码卡质控条码48 小瓶标签4 个 有标签的有盖小空瓶需要的物品（未提供） 货号11776576, CalSet Vials, 有盖小空瓶 规格2 x56 货号03142949, ControlSet Vials, 有盖小空瓶 规格2 x56 实验室基础设备 Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料： 货号11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系统缓冲液 货号11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,测量池洗液 货号11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液 货号11933159, SysClean 适配器 货号11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反应管 货号11706799, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪所需材料： 货号04880340,ProCell M, 2 x 2 L 系统缓冲液 货号04880293, CleanCell M, 2 x 2 L测量池洗液 货号03023141, PC/CC杯, 12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M。 货号03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针。 货号03004899, PreClean M, 5 x 600 mL 检测清洗液 货号12102137,反应杯/吸头 组合装,84反应杯/吸头 组合装48盒,废物袋 货号03023150, WasteLiner,废物袋 货号03027651,系统清洁适配器 M所有分析仪需要： 货号11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系统清洗液 检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析仪：将冷藏试剂室温平衡至20C左右，放置分析仪的试剂盘（20C）内。避免泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、关各试剂盒瓶盖。将复溶的定标液放置在分析仪的样本架上。定标时保证瓶盖开启。定标所需的信息都编码在条码上，分析仪会自动读取。定标液只能一次使用。质控品（PC PCT1和PC PCT2）的信息都编码在质控条码上，分析仪会自动读取。质控品只能一次使用。定标溯源性：可溯源至BRAHMS PCT LIA 分析。每套Elecsys BRAHMS PCT试剂的条码标签上均含有其批号特异的定标信息。使用Elecsys BRAHMS PCTCal1和Cal2定标，可调整符合分析仪要求的预定义定标曲线。定校频率：不同批号试剂须使用Elecsys BRAHMS PCT Cal1, Cal2重新定标（新试剂盒在分析仪上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标： 使用同一批号试剂，1月后（28天） 7天后（同一试剂盒在分析仪上使用） 根据需要：如失控。质控室内质控可使用Elecsys BRAHMS PreciControl PCT1和2。也可以使用其他合适的质控品。质控品1和质控品2至少每24小时内检测一次，每次更换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室可根据各自的情况设定合适的控制限和质控周期。质控值必须处于规定的控制限内。若失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。计算仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度，单位ng/mL。干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素428mol/L或25 mg/dl）, 溶血（血红蛋白0.559mmol/L或 0.900g/dl）, 脂血(脂肪乳剂 1500mg/dl）和生物素123nmol/L或 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。浓度达150IU/ml的类风湿因子对检测无影响。浓度高达1000ng/ml的PCT对检测不产生hook效应。体外对18种常用药物以及10种特殊药物进行试验未发现会影响检测结果。由于检测试剂中含有单克隆鼠抗体，因此某些接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者样本检测结果可能有误。少数病例中极高浓度的链霉素抗体和钌会影响检测结果。试剂含有的添加成份减少了上述因素的影响。除感染外，以下情况也会出现PCT水平的升高20： 长时间或者重度心脏休克 长期的器官重度不规则灌注 小细胞肺癌或者甲状腺髓质C细胞肿瘤 大面积外伤早期、外科手术和严重烧伤 炎症细胞因子刺激和释放治疗 新生儿（出生后48小时内）作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查和其他临床资料来综合评估检测结果。检测范围0.02-100ng/mL（通过最低检出限和厂商定标曲线的最高值确定）。低于检出限的值报告100ng/mL。稀释PCT浓度超过检测范围的样本可以用PCT阴性血清进行手工稀释。推荐稀释比是1：4。稀释样本的浓度必须1.0ng/mL。手工稀释的检测结果要乘以稀释倍数。期望值参考范围使用Elecsys BRAHMS PCT检测492例表面健康者（其中245为男性，247为女性），得到正常参考值为O.O46ng/ml(95百分位点)。临床Cut-off值Elecsys BRAHMS PCT检测得到的结果和文献相符20。一项关于ICU病人的研究显示：PCT2ng/mL预示高风险的严重脓毒血症和/或感染性休克每个实验室应通过实验确定参考范围的适用性，必要时建立本实验室的参考范围。临床性能根据ACCP/SCCM (AmericanCollege of Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine)标准，对283例首诊的ICU病人进行分类：分为SIRS（全身炎症反应综合征）(95例)、脓毒血症(71例)、严重的脓毒血症(60例)和感染性休克(57例)22， 检测PCT的结果如下:以cut-off值为0.5 ng/mL进行统计临床分类ElecsyBRAHMS PCTSIRS严重的脓毒血症/感染性休克共计0.5 ng/mL635680.5ng/mL32112144共计95117212根据以上数据，临床敏感性为96%，临床特异性为66%，阳性预期值为78%，阴性预期值为93%。临床分类ElecsyBRAHMS PCTSIRS脓毒血症共计0.5 ng/mL6325880.5ng/mL324678共计9571166根据以上数据，临床敏感性为65%，临床特异性为66%，阳性预期值为59%，阴性预期值为72%。以cut-off值为2.0ng/mL进行统计临床分类ElecsyBRAHMS PCTSIRS严重的脓毒血症/感染性休克共计2 ng/mL88181062 ng/mL799106共计95117212根据以上数据，临床敏感性为85%，临床特异性为93%，阳性预期值为93%，阴性预期值为82%。临床分类ElecsyBRAHMS PCTSIRS脓毒血症共计2 ng/mL88551432 ng/mL71623共计9571166根据以上数据，临床敏感性为23%，临床特异性为93%，阳性预期值为70%，阴性预期值为62%。特殊的性能指标试剂在分析仪上的性能试验数据如下。各实验室由于具体情况不同，所得出的数据可能会稍有差异。精密度应用Elecsys试剂盒、人混合血清/血浆样本和质控品验证重复性，按照CLSI的EP5-A2执行：每天2次，共21天 (n=84)。下面是获得的结果。分析灵敏度最低检出限 0.02 ng/mL最低检出限是最低浓度标准品+2SD得到的浓度（厂商定标品1+2SD，批内精密度，n=21）。方法学比较使用人肝素抗凝血浆比较Elecsys BRAHMS PCT 分析(y)和BRAHMS PCTLIA分析（x)，相关性数据如下（ng/mL）：比较标本数n=152Passing/Bablok23 线性回归y = 1.065x - 0.090 y = 1.143x - 0.194 = 0.856 r = 0.981比较样品浓度约为0.382 ng/mL。使用人肝素抗凝血浆比较Elecsys BRAHMS PCT 分析(y)和BRAHMS PCT sensitive Kryptor分析(x)，相关性数据如下（ng/mL）：比较标本数n=185Passing/Bablok23 线性回归y = 0.850x - 0.035 y = 1.090x - 0.709 = 0.953 r = 0.988比较样品浓度约为0.485 ng/mL。分析特异性Elecsys BRAHMS PCT 检测与下列物质不发生交叉反应，PCT检测浓度约为0.4和1.5ng/mL。物质无干扰浓度（ng/mL）Human katacalcin30Human calcitonin10Human alpha-CGRPb10000Human beta-CGRP10000b) Calcitonin Gene-Related Peptide功能灵敏度0.06 ng/mL功能灵敏度是批间检测CV20%时得到的最低分析物浓度。与BRAHMS PCT LIA/sensitive Kryptor分析的一致性研究比较Elecsys BRAHMS PCT分析和BRAHMS PCT LIA。分别评价Cut-off值为0.5ng/mL和2 ng/mL的一致性。BRAHMS PCT LIAElecsys BRAHMS PCT0.5 ng/mL0.5ng/mL共计 0.5ng/mL104491530.5ng/mL6370376共计110419529BRAHMS PCT LIAElecsys BRAHMS PCT 2 ng/mL2 ng/mL共计 2 ng/mL266102762 ng/mL11242253共计277252529Cut-off 值为0.5 ng/mL时，两者的一致性为90%；Cut-off 值为2 ng/mL时为两者的一致性为96%。研究比较 Elecsys BRAHMS PCT分析和 PCT sensitive Kryptor分析。分别评价Cut-off值为0.5ng/mL和2 ng/mL的一致性。BRAHMS PCT Kryptor sensitiveElecsys BRAHMS PCT 0.5 ng/mL0.5ng/mL共计 0.5ng/mL183202030.5ng/mL2392394共计185412597BRAHMS PCT Kryptor sensitiveElecsys BRAHMS PCT 2 ng/mL2 ng/mL共计 2 ng/mL312243362 ng/mL1260261共计313284597Cut-off 值为0.5 ng/mL时，两者的一致性为96%；Cut-off 值为2 ng/mL时为两者的一致性为96%。参考文献1. 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