人参皂苷re对主动脉缩窄所致大鼠左心室肥厚的影响答辩课件

人参皂苷Re对主动脉缩窄所致大鼠左心室肥厚的影响,专 业：心血管学药理,一、国内外研究现状,心肌肥厚（myocardial hypertrophy）是心肌对各种原因（如高血压、瓣膜病、急性心肌梗死及先天性心脏病等）导致的压力或容量超负荷的一种基本应答。,临床特征为心肌细胞体积增大，心肌间质组织增生而无细胞分裂和细胞数增加，使心脏的顺应性和循环泵功能降低。,心肌肥厚,细胞外 肥大刺激,胞内 信号转导,核内基因转录的活化,机械性因素,神经体液,PKC通路,MAPK通路,JAK/STAT通路,Ca2+-CaN-NFAT 通路,MAPK通路,MAPK通路,MAPK通路,Ca2+-CaN-NFAT通路,目前临床用于防治心肌肥厚的药物以抗高血压药为主，主要有血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂、钙拮抗剂等，一氧化氮（NO）供体药也有同样的作用，但仍有必要进一步开发新的高效的抗心肌肥厚药物，以供临床选择。,中药人参（panax ginseng）化学成分复杂，生物活性广泛，药理作用独特，其提取的有效活性成分人参皂苷(ginsenoside)具有清除自由基、阻断钙通道、释放NO等广泛的药理活性,表明其具有潜在的抗心肌肥厚作用。,人参皂苷Rb1,人参皂苷Rg1和人参茎叶总皂苷均具有显著的抗心肌肥大作用其机理可能部分与其降低细胞内Ca2+，促进NO释放和抑制CaN通路和MAPK通路有关。而人参茎叶总皂苷中含有30%以上的人参皂苷Re，提示Re可能具有抗心肌肥厚作用。,人参叶富含人参皂苷Re，其含量高达其总皂苷的60%，且人参叶具有来源丰富，价格便宜，更容易开发利用的特点。目前有资料报道，人参皂苷Re能抑制心肌缺血再灌注损伤和促进自然衰老大鼠学习记忆作用，而关于其是否具有抗心肌肥厚作用所知甚少。,本研究拟探讨人参皂苷Re(ginsenoside Re，Re)对主动脉缩窄所致大鼠左心室肥厚的作用，及其与MAPK通路、Ca2+-CaN通路的关系，为中药人参叶的开发利用提供基础药理学依据，也从药物经济学的角度更好地开发利用中药人参。,二、材料与方法,1.实验动物： 雄性SD大鼠，月龄2-3个月，体重180-220g ,清洁级,2.实验动物分组：,经无创性尾动脉血压测量，将血压未达到150mmHg的SD大鼠随机分组成四组，每组8只。,假手术组(Sham，等容容媒),模型对照组(Model,等容容媒),高剂量Re组（Re-H,术后次日按20 mg/kg/d，ip,连续给药20天）,低剂量Re组（Re-L,术后次日按10 mg/kg/d，ip,连续给药20天）,3.大鼠左室肥厚模型的制备,大鼠用4%戊巴比妥钠（40mg/kg）腹腔注射麻醉后按Anversa等报道的腹主动脉缩窄（AAC）法制备左室心肌肥厚模型，假手术组不结扎腹主动脉。,4.大鼠血流动力学观察,收缩压/舒张压（SP/DP）,平均动脉压(MAP),左室收缩压（LVSP）,左心室舒张期末压（LVEDP）,左室等容收缩末期压力最大上升/下降速率（dp/dtmax）,5.标本制备,血流动力学指标测定完后，立即取出心脏，用生理盐水冲洗干净，去心房及大血管，分离右心室和左心室+室间隔，用滤纸蘸干，分别称重，计算左心室肥厚指数（LVHI）和LV+S/RV。称重结束后，分装标本，置液氮速冻后置-70冻存备用。,6. HE染色、光镜观察心肌组织结构,取心肌组织块，经10%多聚甲醛固定后，常规石蜡包埋切片，二甲苯脱蜡,苏木素染色5 min，自来水冲洗,盐酸乙醇分化30 s，反复提插数次,自来水浸泡15 min,置伊红液2 min,常规脱水，透明，封片,光学显微镜观察,7.RT-PCR检测左室心房利钠因子ANF、CaN、ERK1mRNA的表达,主要步骤:(1) RNA提取与纯化;(2)测定样品中RNA的纯度及浓度;(3)逆转录;(4)Real-time PCR,8.统计学处理 所有数据以meanSD(s)表示，全部数据采用SPSS13.0软件进行ANOVA或t检验进行统计学处理，以P0.05认为有差异，P0.01认为有显著性差异。,1.Re对AAC术后各组大鼠体重的影响,三、结果,2.Re对AAC术后各组大鼠血流动力学的影响,3. Re对AAC术后各组大鼠心肌肥厚指数LVHI和LV+S/RV的影响,4. Re对AAC术后大鼠心肌形态学的影响,Sham,Model,Re 10 mg/kg/d,Re 20 mg/kg/d,5. Re对AAC术后大鼠ANF、CaN及ERK1表达的影响,1.左心室肥厚模型的建立,LVSP,LVHI,LV+S/RV,ANF,模型组,模型组,模型组,模型组,模型成功地建立,四、讨论,2.Re在独立于血流动力学变化的条件下，直接作用于心肌，抑制由压力超负荷所致大鼠的左室肥厚。,Re 10 mg/kg/d,Re 20 mg/kg/d,LVSP,模型组,左心室承受同等程度的压力超负荷,LVHI,LV+S/RV,ANF,Re 20 mg/kg/d,Re 20 mg/kg/d,Re 20 mg/kg/d,Re 10 mg/kg/d,Re 10 mg/kg/d,Re 10 mg/kg/d,3.Re通过抑制左室肥厚，提高左室顺应性并改善左室心功能。,LVEDP,dp/dtmax,Re 20 mg/kg/d,Re 20 mg/kg/d,Re 10 mg/kg/d,Re 10 mg/kg/d,4.Re的抗心肌肥厚作用与CaN和ERK信号传导通路有关。,ERK1mRNA,CaNmRNA,与Sham比较,Re 10