园林植物组织培养实验报告.doc

GDOU-B-11-112广东海洋大学学生实验报告书（学生用表）实验名称实验一课程名称园林工程管理课程号学院(系)农学院专业园林班级1102 学生姓名马经国学号201011322223实验地点林果楼实验日期2013 1 实验目的 2 实验原理 3 设计要求a.为减少污染，组培室最好设缓冲走道。b.培养室应建在房屋南面，南，东或西应有大窗尽量利用自然光。c.培养室房间宜小，门也宜小，最好为滑门，以保温节能；接种室房间也宜小，备有准备小间，以更换衣帽等，超净台较宽，门应稍大，双扇滑门，内装紫外线灯。4 把自己居住的房子改造成一个小型组培实验室。要求画出原房子及改造后的实验室平面图，并标出各房间功能（化学实验室、无菌接种室、培养室等。成绩指导教师丰 锋日期注:请用A4纸书写，不够另附纸。第1页，共1页GDOU-B-11-112广东海洋大学学生实验报告书（学生用表）实验名称实验二、培养基母液的配制课程名称园林植物组织培养课程号13232204学院(系)农学院专业园林班级1102 学生姓名马经国学号201011322223实验地点兴农楼318实验日期2013/3/ 1 实验目的掌握培养基母液的配制方法。2 实验原理配制培养基时，为使用方便和用量准确，根据培养基配方各试剂用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液即可。基本培养基一般分为大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液和有机化合物母液，植物生长调节剂母液单独配制。3 实验步骤确定配方和扩大倍数 清洁容器 称量药品 分别溶解 混合定容 贴标签（注明药品名称、质量、扩大倍数、定容体积、配制人、配制日期等）。4 实验结果及分析表1 MS培养基大量元素母液电导率（单位：ms/cm）母液编号1234第1组第2组第3组第4组第5组第6组平均值 结果分析：成绩指导教师丰 锋日期注:请用A4纸书写，不够另附纸。第页，共页5 根据表2中各母液浓度，计算配制不同体积的MS十,-D 1 mg/L6-BA 0.5 mg/L培养基所需吸取的母液或所称取的药品量，并将结果填入下表：表2 MS母液浓度及扩大倍数表母液名称配方规定量母液浓度/扩大倍数定容体积（ml）母液吸取量（ml）或质量（g）1 L0.5 L0.2 L1号10500CaCl22H2O44010500KH2PO417010500FeSO47H2O100500微量元素1001000有机成分1001000肌醇10010010002,4-D10.5 mg/ml10006 - BA0.51.0 mg/ml1000NAA0.1 mg/ml1000IBA1.0 mg/ml1000GA30.5 mg/ml1000Ad1.0 mg/ml1000KT0.5 mg/ml1000蔗糖30 g/L琼脂4.5 g/L成绩指导教师丰 锋日期注:请用A4纸书写，不够另附纸。第页，共页GDOU-B-11-112广东海洋大学学生实验报告书（学生用表）实验名称实验三、MS培养基的配制与灭菌课程名称园林植物组织培养课程号13232204学院(系)农学院专业园林班级 学生姓名学号实验地点兴农楼318实验日期 1 实验目的 学习并掌握MS培养基的配制和灭菌过程。2 实验原理培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般含碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等,通常采用母液法配制。培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，确保无菌操作的顺利进行。3 实验步骤3.1 培养基的配制A 确定配方:MS+2，4-D 0.5 mg/L、MS+2，4-D 1 mg/L、MS+2，4-D 2 mg/LB 配制数量：每组1升，分装30瓶，1人5-6瓶。C 称量琼脂，加水到培养基最终容积的2/3-3/4, 加热煮沸溶解。 D 吸取母液：根据配方要求，按顺序用量筒或移液管吸取大量元素、微量元素、铁盐、维生素、植物激素等各种母液，放在干净的烧杯中。E 定容调pH值：把母液、蔗糖，倒入煮好的琼脂中定容，混匀，用0.1 N NaOH或HCl调pH，一般为5.6-5.8.F 分装：把培养基分到所选用的培养容器中（1 cm左右高，一般每瓶3035 ml），然后盖瓶盖并拧紧。3.2 培养基的灭菌（高压湿热灭菌）高压灭菌锅先加水，放入培养基，通电，0.050.07 MPa（0.50.7 kg/cm2）时排气到0， 0.11 MPa （1.1 kg/cm2、121）计时，维持在0.11-0.12 MPa（1.11.2 kg/cm2）之间20 min. 排气到0后取出培养基，冷却备用。4 培养基配制灭菌过程中的注意事项成绩指导教师丰 锋日期注:请用A4纸书写，不够另附纸。第页，共页GDOU-B-11-112广东海洋大学学生实验报告书（学生用表）实验名称实验四、外植体灭菌及愈伤组织诱导课程名称园林植物组织培养课程号13232204学院(系)农学院专业园林班级 学生姓名学号实验地点兴农楼318实验日期 1 实验目的 掌握外植体灭菌、无菌操作技术及愈伤组织诱导的方法。2 实验原理 植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚至单个细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料去进行组织培养，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团愈伤组织。而植物生长调节剂如，4-D等是诱导外植体形成愈伤组织的重要影响因素。3 实验材料 甘蔗、胡萝卜、非洲茉莉等4 实验用具 培养基、无菌碟、无菌杯、无菌水、接种刀、镊子、酒精、升汞等4 实验步骤4.1 超净工作台清洁：用75酒精仔细擦拭超净工作台台面，开启超净工作台。4.2 选择健壮无病虫的甘蔗和胡萝卜 甘蔗：小心去除外叶，找到并保留顶芽最后一节（保留直径1.0 cm），无菌条件下细心去除外叶（保留直径0.8 cm 左右），避免心叶带菌，切成 1.0 mm左右薄片。胡萝卜：流水清洁材料，将肉质根横切成约3.0 cm厚的切片，转入无菌瓶，用75%酒精浸0秒，移入添加滴吐温-20 (Tween - 20)的0.15%氯化汞溶液灭菌515 min，无菌水漂洗45次，每次23分钟，纵切1分为4，再横切成约11.5 mm 厚的小块。非洲茉莉：选择生长健壮的顶芽或侧芽，流水冲洗，去除叶片，保留5 mm左右叶柄，75酒精灭菌30秒，0.15 HgCl2灭菌15 min，无菌水漂洗45次，每次23 min，适当切除叶柄、茎断等与HgCl2接触的伤口部位12 mm，接种。4.3 接种 每瓶培养基接46块材料，把材料置于培养室内暗培养，同时在实验记录表上注明接种日期、材料名称、接种数量（瓶）、培养基名称等。4.4清洁超净工作台台面、清洗容器。4.5 3天观察一次材料生长或污染情况，统计污染率及其愈伤组织诱导率。5 实验结果及分析 实验结果见下表： 名称配方接种数污染数污染率（）愈伤组织诱导率（）甘蔗MS+2,4-D胡萝卜MS+2,4-D非洲茉莉MS+2,4-D合计成绩指导教师丰 锋日期注:请用A4纸书写，不够另附纸。第页，共页GDOU-B-11-112广东海洋大学学生实验报告书（学生用表）实验名称实验五、愈伤组织的器官分化课程名称园林植物组织培养课程号13232204学院(系)农学院专业园林班级 学生姓名学号实验地点兴农楼318实验日期 1 实验目的 掌握运用植物生长调节物质调控愈伤组织分化的方法。2 实验原理 离体的植物组织在生长调节剂调节下，可“脱分化”形成均一的无组织结构的细胞团，即愈伤组织。这种愈伤组织在一定条件下，又能“再分化”出根和芽等器官。 3 实验材料 实验四诱导的甘蔗（或胡萝卜）愈伤组织4 实验用具 无菌碟、接种刀、镊子、酒精、升汞等5 实验步骤 5.1 培养基的配制：MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L；MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L ；MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。4.2 无菌条件下将愈伤组织，转入分化培养基中，置于26、在2 000 Ix、每天14 h光照下培养，3天观察一次愈伤组织的形态变化，3-4周后统计分化率。6 实验结果及分析成绩指导教师丰 锋日期注:请用A4纸书写，不够另附纸。第页，共页GDOU-B-11-112广东海洋大学学生实验报告书（学生用表）实验名称实验六、再生植株的移植课程名称园林植物组织培养课程号13232204学院(系)农学院专业园林班级 学生姓名学号实验地点兴农楼318实验日期 1 实验目的 掌握再生植株的移栽技术。2 实验原理 试管苗要从培养基（恒温、高湿、弱光）中移栽到土壤（变温、低湿、强光）里，这是从“异养”到“自养”的转变，这个转变要有个逐渐煅炼和适应的过程，才能保证有较高的移栽成活率。3 实验材料 试管苗、珍珠岩、椰糠、泥炭、营养钵（营养袋）、沙、泥土等4 实验步骤 准备培养土：将珍珠岩、椰糠（沙）、菜园土按2：2：6混匀（可加10左右腐熟有机肥），装入营养钵（或营养袋），先装2/33/4左右，再用沙装满，置